冰冻切片活性氧(ROS)检测试剂盒-绿色荧光

产品概述

组织切片活性氧检测试剂盒是一种利用荧光探针O12进行活性氧检测的试剂盒。 BBoxiProbe® O12是一种细胞膜通透性的荧光探针，本身没有荧光，被活性氧特异性氧化生成绿色荧光物质，绿色荧光强度与活性氧水平成正比，检测绿色荧光就可以知道组织内活性氧的水平。 在激发波长500nm，发射波长525 nm附近，使用荧光显微镜/激光共聚焦检测绿色荧光，从而测定样本内活性氧水平。利用本试剂盒可以快速定性检测样本内活性氧水平变化差异。 活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 包括过氧化氢（H2O2，Hydrogen peroxide）、羟基自由基（•OH，Hydroxyl radical）、单线态氧（1O2，Singlet oxygen）、一氧化氮（NO，Nitric oxide）、超氧阴离子(•O2-，Superoxide anion)、过氧化自由基(ROO• ，Peroxyl radical)、过氧羟自由基（HOO• ，hydroperoxyl）及其下游产物过氧化物过氧亚硝基阴离子（ONOO-，Peroxynitrite anion）、ClO-和羟化物等，参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。 活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生主要是氧化磷酸化的结果，在呼吸链中，在某些位点会有“泄露”的电子直接和氧气或和其他电子受体反应，在酶或非酶作用下引发一系列反应生成不同种类的活性氧：“泄露”的电子最初和氧气反应生成超氧阴离子自由基(O2•-)(图1A)。超氧阴离子遇水生成H2O2(图1B)，同时过氧化氢也可由氧气在单胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)的作用下生成(图1C)，生成的过氧化氢在髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)的催化下与Cl-反应可生成ClO-(图1D)，在铁或铜离子的催化下发生Fenton反应生成OH•(图1E)，超氧阴离子遇氮氧化物反应生成ONOO-(图1F)。这些生成的高氧化活性的物质统称为活性氧。 一般最hao使用振动切片或者冰冻切片样本检测活性氧。石蜡切片样本的ROS在蜡块的制作过程中会损失掉，不建议使用石蜡切片样本。已经制备好的石蜡切片样本中残余的ROS本试剂盒也可以检测。 有条件的话也可以采用直接用组织样本检测，不需要制备成切片的ROS检测试剂盒。 除了绿色荧光的ROS检测试剂盒，也可以提供红色、蓝色、深红色等其它颜色的检测试剂盒。 还可以为您提供各种组织、细胞样本、切片样本的活性氧、活性氮等各种颜色的检测试剂盒产品。

保存温度

-20℃ 避光

注意事项

1.避免反复冻融。

2.可以根据需要分装后冻存。

3.探针为DMSO溶液，在2-8℃时是固体状态，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

有效期

6个月

检测方法

激光共聚焦显微镜/荧光显微镜

适用样本

1.新鲜冰冻切片 2.振动切片

3.石蜡切片

产品特点

1.使用方便：可用荧光显微镜直接拍照分析；

2.背景低，灵敏度高；

3.线性范围宽，使用方便。

仪器准备

1.激光共聚焦显微镜或荧光显微镜，

2.离心机

3.移液器

4.冰箱

5.冰盒

试剂准备

PBS缓冲液或者HBSS

耗材准备

1.离心管

2.吸头

3.玻片

4.一次性手套

使用注意事项

1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。

2.尽量缩短探针标记后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差。

3.对于某些样本，如果荧光太强，可以按照1:200-1:1000稀释探针。探针标记的时间也可以根据情况在20-60分钟内适当进行调整。

4.冰冻切片制作不需要经过固定脱水包埋等步骤，直接冷冻后切片贴片。

5.有条件也可以采用振动切片的方法。有些方便处理的样品类型也可以采用徒手切片。

6.以下操作步骤仅供参考，请根据实际样本情况调整。

使用方法

试剂配制

1. 根据样本数，用纯水将BBoxiProbe® O12活性氧荧光探针200倍稀释，配成染色工作液。

2. 用纯水将10X清洗液10倍稀释，配成1X清洗液工作液。

探针标记

1. 准备待测的厚为10 μm的未经固定处理的冰冻切片。

2. 室温下，小心加上200 μl清洗液工作液，铺满整个切片表面，静置5-10分钟。

3. 小心吸除清洗液。

4. 滴加100 μl染色工作液，在37℃培养箱避光孵育20-60分钟。

5. 移除染色液。

6. 用PBS洗涤切片2-3次。

7. 加盖玻片或甘油封片。

8. 荧光显微镜检测。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！