真菌活性检测试剂盒

产品概述

真菌活性检测试剂盒是应用新型的水溶性四唑盐2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐快速高灵敏度检测真菌活性的比色检测产品。 四唑盐在电子载体存在的情况下能够被真菌的酶还原成橙黄色的水溶性的Formazan，生成的Formazan量与真菌的活性成正比。真菌活性越强，则颜色越深；真菌活性越弱，则颜色越浅。对于同样的真菌，颜色的深浅和真菌活性呈线性关系。 本试剂盒只适合检测液体培养基悬浮培养的小型真菌样本或者能准备成悬液的霉菌等样本，不适合用于蕈类大型真菌样本。 检测溶液可以直接加入到真菌样品中，不需要预配各种成分，检测试剂溶液很稳定，对真菌没有毒性，可以长时间培养真菌用于后续其它检测。 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。

保存温度

2-8℃避光

注意事项

1.长期不用可以-20℃保存。需要长期保存可以分装后-20℃保存，避免反复冻融。

2.冻存后融解时注意重新混匀。

有效期

一年

检测方法

酶标仪

适用样本

真菌

产品特点

1.使用方便：仅使用单一试剂；

2.灵敏度高，数据可靠，重现性好，线性范围更宽；

3.结果稳定：试剂本身稳定性高，实验结果稳定可靠；

4.无需放射性同位素和有机溶剂，对微生物毒性低；

5.适合于高通量药物筛选。

产品应用

酶标仪

仪器准备

1.带有450nm滤光片的酶标仪

2.CO2培养箱

3.离心机

4.移液器

5.冰箱

6.冰盒

试剂准备

1.PBS 2.HBSS

耗材准备

1.离心管

2.吸头

3.一次性手套

使用注意事项

1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

2.需长时间保存可-20℃避光保存。避免反复冻融，否则将会增加空白吸收，从而影响检测结果。zui好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光。

3.正式实验前，建议先做几个孔摸索接种真菌的数量和加入检测试剂后的培养时间。培养时间一般在1-4小时。

4.部分药物可能对检测有影响，有影响时需去除药物后再检测，无影响时直接检测。用培养基或PBS来配制待检测药物，加入检测试剂，测药物溶液在450 nm处的吸光度。如果该吸光度与不含药物仅加检测试剂的培养基或PBS吸光度差异不大，则可以直接加入检测，如果吸光度相对较大，则需要除去培养基，并用PBS洗涤菌体两次，然后加入新的100ulPBS和10ul 检测试剂进行检测。

5.接种时注意菌液一定要混匀，以避免菌体沉淀下来，导致每孔中的细胞数量不等，可以每接种几个孔就混匀一下。培养板周围一圈孔培养基容易挥发，为了减少误差，建议培养板的四边每孔只加培养基，而不作为指标检测孔。

6.zui佳细胞接种数量的选择，可以用不同的细胞数接种，然后加入检测 试剂，1小时，2小时，3小时检测450nm 以zui大OD值1.0左右为标准选择细胞数。

7.有条件的情况下建议采用多通道移液器，可以减少平行孔间的差异。加 CCK- 8试剂时，建议斜贴着培养板壁加，不要插到培养基液面下加，容易产生气泡，会干扰O.D值读数。

8.如果不是使用96孔板检测，检测溶液的用量相应等比例增加即可。

9.检测试剂加样量较小时，也可以用培养基稀释检测试剂后加样以减小误差。

10.本试剂无细胞毒性，可以在检测后进行细胞培养，也可以再进行其他检测。

11.某些实验中吸光度值太高，可以减少细胞数量，或者缩短加入检测试剂后的培养时间。

12.如果OD值偏低，可以适当增加细胞数量或延长加入检测试剂后的培养时间。

13.接种细胞时要充分重悬，接种均匀。细胞是否接种均匀对结果影响较大。

14.OD值在0.5-2.0之间均可，zui大值控制在1.0左右zui佳，小于0.5或大于2.0请调整接种量和培养时间。

15.如果细胞数据出现异常增加，或者数据结果的方向相反等问题，可能是实验中产生了气泡、铺板不均匀等操作问题，请重复实验。

使用方法

1. 收集待检测的培养真菌样本。

2. 用PBS洗涤菌体2次。

3. 加入PBS制备适当浓度的真菌细胞悬液，在96孔板内每孔加入190μl悬液。

4. 每孔加入10μl的染色溶液。

5. 将培养板在培养箱中孵育（37℃或合适的温度）。

6. 用酶标仪/分光光度计测定在450nm处的吸光度。

真菌细胞活力计算：

各重复孔的OD值取平均数。

细胞活力% =（测试孔OD-空白OD/对照孔OD-空白OD）×100

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！