线粒体膜电位检测试剂盒（DiOC6(3)法）

产品概述 

线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。DiOC6(3)是一种可以通透细胞膜的选择性染色活细胞线粒体的荧光染料，可以用作检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential)的荧光探针。 DiOC6(3)是亲脂性荧光染料，其在水溶液中时荧光较弱，与脂质结合后荧光大幅度增强。在正常细胞中能够依赖线粒体跨膜电位进入线粒体内膜。在细胞凋亡发生时，线粒体膜完整性破坏，线粒体膜通透性转运孔开放，引起线粒体跨膜电位(ΔΨm) 的崩溃，DiOC6(3)重新释放出线粒体膜。通过荧光信号的强弱来检测线粒体膜电位的变化。 本试剂盒可用于培养的细胞或从组织中提取出的线粒体的膜电位检测。 DiOC6(3)可以快速通过细胞膜，仅需几分钟就可以被具有活性的线粒体所俘获，并且对细胞没有任何毒性。DiOC6(3)的最da激发波长为482nm，最da发射波长为500nm。在荧光显微镜下观察，呈现黄绿色荧光。 可以提供各种细胞检测试剂盒。包括细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。

保存温度

2-8℃避光

注意事项

1.染料短期2周内可以2-8℃保存。染料长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。

2.探针液A为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

3.可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。

4.试剂拆封后请尽快使用完！

有效期

6个月

检测方法

1.流式细胞仪

2.激光共聚焦

3.荧光显微镜

适用样本

1.悬浮细胞

2.贴壁细胞

产品应用

1.流式细胞仪

2.激光共聚焦

3.荧光显微镜

仪器准备

1.流式细胞仪或荧光显微镜或激光共聚焦

2.离心机

3.移液器

4.冰箱

5.冰盒

试剂准备

1.PBS 缓冲液（pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液（1X））

2.或者HBSS（Hank's Balanced Salt Solution）

耗材准备

1.离心管

2.吸头

3.一次性手套

4.铝箔

使用注意事项

1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。

2.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

3.始终保持平衡染液中pH值的一致性，因为pH值的变化将影响膜电位。

4.根椐细胞种类、实验条件不同流式细胞仪设置不同。

使用方法

悬浮细胞

1. 试剂配制：

根据样本数量，用37℃培养箱预热染料稀释液试剂B将DiOC6(3)荧光染料10倍稀释。再用HBSS或相应的无血清培养基或其他缓冲液将探针DiOC6(3)进行25000倍稀释，配制成染色工作液。

2. 收集样本细胞以及阴性、阳性对照细胞。

3. 用PBS洗涤细胞两次。离心收集细胞。

4. 用500 μl DiOC6(3)染色工作液将细胞重悬，细胞密度约5-10X105个/ml。37℃，5% CO2的培养箱中孵育15-30分钟。

5. 常温离心收集细胞。 用PBS洗涤细胞2次。

6. 用500 μl预热的HBSS或PBS缓冲液将细胞重悬。

7. 用流式细胞仪或荧光酶标仪/分光光度计检测分析结果，或者用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察结果。

贴壁细胞

对于贴壁细胞，可以先收集细胞，重悬后参考悬浮细胞的检测方法。

纯化线粒体

1． 把配制好的DIOC6(3) 染色工作液再用DIOC6(3)孵育缓冲液(1×)稀释5 倍。

2． 0.9mL 5倍稀释的DIOC6(3) 染色工作液中加入0.1mL 总蛋白量为10～100 μg的纯化的线粒体。

3． 结果检测。

组织样本

组织样本可以用玻璃匀浆器匀浆成单细胞悬液后按照细胞样本的方法检测。也可以用其他细胞悬液制备的试剂盒处理组织后检测。

结果分析 ：

检测时可以把激发光设置为488nm，发射光设置为500nm。

线粒体膜电位降低，荧光强度减弱。

用流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位的情况。

也可以用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察；用荧光分光光度计或荧光酶标仪检测。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！