使用 MANTIS® 分液器在器官移植中进行自动化、可再现的 HLA 抗体筛查

背景

人类白细胞抗原 (HLA) 系统是我们适应性免疫系统的一部分，在疾病防御和器官移植中都发挥着重要作用。带有与受者匹配的 HLA 标记的供者排斥器官的几率较小。

荷兰拉德布德大学医学中心的医学免疫学实验室 (LMI)的研究者从潜在器官受体的血清中筛选出 HLA 特异性抗体。为避免供体器官的超急性排斥，检测针对 HLA 标志物的抗体是必要的。排斥可能是由输血、移植或怀孕引起的。该实验室每季度进行一次筛查，以检测患者血清中的这些有害抗体。

可以通过将一名患者的血清与来自具有不同 HLA 标记的不同个体的 60 多种独特的淋巴细胞悬浮液进行交叉匹配，来检测这些抗体。这也称为补体依赖性细胞毒性 (CDC) 测试。

在这项研究中，FORMULATRIX®的MANTIS®液体处理器用于将分离好的淋巴细胞分配到准备好的 Terasaki 板中。

材料和方法

首先，使用 ART Robbins (Sunnyvale, CA) 血清分配器将 1μl 患者血清分配到 Terasaki 板 (Greiner) 中。使用密度梯度 Lymphoprep (Elitech Group) 或液氮方法从血液中分离供体淋巴细胞，然后用 CFDA C195 (Invitrogen) 染料培养并洗涤。然后制备每毫升 4 x 106 个细胞的淋巴细胞悬浮液。

MANTIS® 分液器用于将 1 μL 分离的淋巴细胞分配到准备好的 Terasaki 板中。之后的步骤包括添加兔补体 (Immucore, Norcross, GA) 和 EDTA (Merck, KGaA, Darmstadt, Germany)、血红蛋白和碘化丙啶的悬浮液，并进行培养。

在最后添加步骤之后，在倒置荧光显微镜（Leitz Leica Diavert Inverted Microscope withfluorescent light illuminator (480-525nm) Oculair 10x）下观察微孔板以确定患者血清和供体淋巴细胞之间是否存在阳性或阴性反应。

根据荧光染色结果确定杀灭百分比 (% kill) 的测量结果（参见图 1）。杀灭百分比是阳性细胞（红色）占阳性和阴性细胞总数（绿色）的百分比。百分比得分如表 1 所示。

表 1: 杀灭百分比得分

图 1: 明显易观察的淋巴细胞样本 (A) 阴性反应，绿色。 (B) 阳性反应，红色。 (C) 强阳性反应，红色

结果与结论

由于现有设备不再受到支持，因此实验室必须找到一种替代的自动分液器，用于将准备好的淋巴细胞添加到 Terasaki 板中。手动分液在实验过程中会引入可变性量，这对于研究者而言是不可接受的。

越来越多使用不再受支持的设备进行 HLA 筛查的实验室将需要更换这种过时的技术，因此 LMI 的团队同意分享他们的评估结果，以使参与这项重要工作的更广泛的学术圈受益。

与手动移液器加液相比，FORMULATRIX公司的 MANTIS 仪器被认为是一种用于添加淋巴细胞的优越技术，并已成功应用到实验室的常规工作流程中。它能在更短的时间内获得结果，并且具有更高的一致性和准确性。

感谢和致谢

FORMULATRIX®非常感谢Yvonne van Berkel（senior analyst Cellulaire Immunologie en Histocompatibiliteit）和 LMI 团队在评估 MANTIS® 分液器的 HLA 工作流程方面所做的工作，以及在本应用说明中提供的数据结果。该团队的其他成员为Siham Akdimi、Gaby Derksen、Suzanne Hendriks 和 Jeroen Slager。