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恒温解冻仪,血清这样保存才正确

2021-03-01 14:25

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血清是指血液凝固后,在血浆中除去纤维蛋白原分离出的淡黄色透明液体或指纤维蛋原白已被除去的血浆。血清如此珍贵,我们要怎么做才能使损失降到低,其中的保存环节肯定是至关重要的。血清的保存应该注意以下几点: (1)需要长期保存的血清储存于-20℃-70℃低温冰箱中,4℃冰箱中保存时间切勿超过1个月,由于血清结冰时体积会增加约10%,因此,血清在冻入低温冰箱前,预留体积空间,否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。 (2)切勿将血清放置在37℃中太久,因为这样血清会变得浑浊,同时血清中的有效成分也会受到破坏,血浆解冻箱从而影响血清的质量。 (3)热灭活是指56℃,30分钟加热已解冻的血清,加热过程中须规则摇晃均匀,此热处理的目的是使血清中的补体成分(complement)灭活。除非,一般不建议作此热处理,因为热处理会造成血清沉淀物显著增多,而且还会影响血清的质量。 (4)瓶装血清解冻需采用逐步解冻法:-20℃至-70℃低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天,然后移入室温,待全部溶解后再分装,在溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一,减少沉淀的发生,切勿直接将血清从-20℃进入37℃解冻,这样因温度改变太大,容易造成蛋白质凝集而出现沉淀。 (5)一般厂商提供的血清为无菌,无需再过滤除菌,如发现血清有悬浮物,则可将血清加入培养液内一起过滤,切勿直接过滤血清。恒温解冻仪 (6)血清中的沉淀物絮状物:主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成,这些絮状物不会影响血清本身的质量,可用离心3000rpm,5分钟去除,也可不用处理.。显微镜下“小黑点”:经过热处理过的血清,沉淀物的形成会显著增多.有些沉淀物在显微镜下观察象“小黑点”,常误认为血清受污染。一般情况下,此小黑点不会影响细胞生长,但如果怀疑血清质量,则应立即停止使用,更换另一批号的血清。
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在100倍显微镜下,移动计数板将视野对准计数板的中央大方块,该方块四周有一圈3条平行线包围,中间有密集的网格。中央方块区差不多刚好可以填满整个视野 使用手持式计数器记录计数池四个角以及中央方块内的细胞数(1-5号位置,经典的current-protocol推荐每个方块细胞数应不大于20-50),并重复记录另一侧计数池中的细胞数,总计十个方块。计数的方法是只计算上边和左边压线的细胞,而右边和下边压线的细胞不予计算(下图,总体原则是“计上不计下,计左不计右",判断标准为是否接触三条边线的中间线)。如果有多个细胞没有吹散成团存在,此时只可记为一个细胞。如果团块很多,则可能需要重新吹打甚至消化直至绝大多数细胞为单个细胞

细胞培养技术中,细胞计数是一项基本功,对于标准化培养条件以及需要定量的实验来说都关键。这里介绍使用血细胞计数器对细胞进行计数的经典方法以及中间一些需要注意的细节。 制备细胞悬液: 对于贴壁生长的细胞,我们需要使用胰酶消化的方法使细胞从培养皿表面脱落 根据需要加入合适体积的培养基,将细胞进行中和及稀释,以得到均质的细胞悬液。要求尽可能将细胞吹打散开,不要残留任何细胞团 准备血细胞计数器: 使用70%乙醇将盖玻片和血细胞计数器清洁干净 将将盖玻片润湿(使用水或呼一口气,目的是使盖玻片与血细胞计数器接触更紧密,易于粘连),并覆盖至血细胞计数器上 台盼兰染色(可选): 如果需要计算细胞的活力,则需要将细胞悬液和0.4%台盼兰等体积混合 室温孵育3-5分钟,使台盼兰进入死细胞,使死细胞着蓝色 血细胞计数器加样: 使用吸管将细胞悬液或细胞/台盼兰混合液滴加到血细胞计数器计数池的边缘。此时液滴将在虹吸的作用下进入盖玻片下方的计数池 以同样的方式在另一侧的计数池中也加入细胞悬液 将计数板放置几分钟使细胞扩散,同时用吸水纸吸除多余的液体 细胞计数:

6、解冻完成后,依次将血浆解冻袋取出,将血浆去掉解冻袋后放置室温下待用; 7、如果解冻后的血浆温度已经恢复到室温仍未发出,应该将血浆转移到4℃储血冰箱内待用。 八、注意事项 1、解冻箱应使用独立的三芯插座; 2、解冻箱上水时务必连接好排水管,防止加水过量后溢水。 3、发现有破损血浆时需立即换水,并进行清洗。 4、要避免血袋标签等物品落入水箱内,以免堵塞水管,致使水循环系统瘫痪; 5、解冻箱长期不用时,应将解冻箱内的水排尽。 九、保养与维护 1、解冻箱应每周做清洗保养,清洗内外表面; 2、温度校正:每年由计量部门对解冻箱进行温度检测,如发现实测温度与显示温度相差0.5℃以上,应对解冻箱进行校正。

操作规程 一.目的 建立循环水浴箱解冻新鲜冰冻血浆、普通冰冻血浆及冷沉淀标准操作规程,规范冰冻血液成分解冻操作流程,血液质量安全。 二. 职责 本科室工作人员应用此操作规程,为临床提供安全的血浆。 三.原理 冰冻血浆融化箱采用电气控制原理,新鲜冰冻血浆、普通冰冻血浆及冷沉淀等需要在 37 一 40℃稳定温度条件下,解冻防止蛋白成分析出 ,循环水溶箱可以维持稳定温度的水浴条件,快速、批量解冻冰冻血液制品,解冻速度和血液质量。 四.适用范围 适用于循环水浴箱解冻新鲜冰冻血浆、普通冰冻血浆及冷沉淀操作。 五、器材与试剂 器材:血库融浆机,血浆解冻袋 六、环境条件 温度:20-27℃,湿度≤80% 七、操作程序: 1、连接进水管,排水管,接通电源; 2、打开电源开关,按“启动"键,提示“缺水"状态,拧开水龙头开始加水,直至进水完成,“预温"灯亮; 3、设定解冻温度(一般设定为38℃)及解冻时间(根据解冻血浆数量确定,一般设定在16分钟以上); 4、待预温完成后,水箱水位上升到工作状态; 5、将血浆或冷沉淀从低温冰箱中取出,去掉包装盒,套上解冻袋,放入解冻槽中,盖好解冻箱盖;

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