解答微生物限度检查仪检测时的常见问题

2021-02-03 10:14

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资料摘要：

微生物限度检查仪采用不锈钢金属材料制成，配有内置进口隔膜液泵，不需外接抽滤瓶，液体直接通过隔膜液泵排除，减少了抽滤瓶使用上的繁琐，避免了连接不好造成抽滤速度慢等缺点。工作原理是将供试品注入微生物限度培养器内，通过检验仪自带内置进口隔膜液泵负压抽滤，将供试品中微生物截留在滤膜上，用取膜器取出滤膜，转移至配置好的固体培养基上，菌面朝上，平贴。盖上盖子形成封闭的培养盒，置于相应的恒温培养箱内培养并计数。以下内容解答微生物限度检查仪检测时的常见问题：一、梭菌检查中需置厌氧条件下培养48小时，是否指在厌氧培养箱中？答：需要在厌氧培养装置中进行培养，未必是厌氧培养箱。二、常规的监督抽样检品（包括原料）在进行微生物限度检查时，是否要进行活螨检查并在原始记录与报告书中体现？答：需要进行检查。可以在原始记录中体现，报告书上可以不出现，除非当发现有活螨检出。三、包装材料的大肠埃希菌检查？答：根据包装材料的不同，大肠埃希菌的检查方法大致有两种，一种是将浸提液合并后，取一部分，接种胆盐乳糖培养基进行检查；另一种是将浸提液合并后，薄膜过滤，然后按规定的方法检验。四、药包材微生物限度检查规定了合格质量水平，通常产量下取样8个，要求8个瓶子均符合规定，如何进行？答：每个瓶子分别进行实验。五、控制菌检查方法验证时，采用多种方法均未检出控制菌，如何处理？答：在确保所使用的各种方法都没有错误的情况下，如果仍无法使试验菌生长，则应该采用薄膜过滤法进行检查。理由是该方法能够zui大程度地去除产品的抑菌作用。六、大肠埃希菌具体操作规程？答：参见药品检验标准操作规程。七、动物组织及动物类原药材的提取物入药，是否需要检沙门菌？答：需要进行沙门菌检查。

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在100倍显微镜下，移动计数板将视野对准计数板的中央大方块，该方块四周有一圈3条平行线包围，中间有密集的网格。中央方块区差不多刚好可以填满整个视野使用手持式计数器记录计数池四个角以及中央方块内的细胞数（1-5号位置，经典的current-protocol推荐每个方块细胞数应不大于20-50），并重复记录另一侧计数池中的细胞数，总计十个方块。计数的方法是只计算上边和左边压线的细胞，而右边和下边压线的细胞不予计算（下图，总体原则是“计上不计下，计左不计右"，判断标准为是否接触三条边线的中间线）。如果有多个细胞没有吹散成团存在，此时只可记为一个细胞。如果团块很多，则可能需要重新吹打甚至消化直至绝大多数细胞为单个细胞

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细胞培养技术中，细胞计数是一项基本功，对于标准化培养条件以及需要定量的实验来说都关键。这里介绍使用血细胞计数器对细胞进行计数的经典方法以及中间一些需要注意的细节。制备细胞悬液：对于贴壁生长的细胞，我们需要使用胰酶消化的方法使细胞从培养皿表面脱落根据需要加入合适体积的培养基，将细胞进行中和及稀释，以得到均质的细胞悬液。要求尽可能将细胞吹打散开，不要残留任何细胞团准备血细胞计数器：使用70%乙醇将盖玻片和血细胞计数器清洁干净将将盖玻片润湿（使用水或呼一口气，目的是使盖玻片与血细胞计数器接触更紧密，易于粘连），并覆盖至血细胞计数器上台盼兰染色（可选）：如果需要计算细胞的活力，则需要将细胞悬液和0.4%台盼兰等体积混合室温孵育3-5分钟，使台盼兰进入死细胞，使死细胞着蓝色血细胞计数器加样：使用吸管将细胞悬液或细胞/台盼兰混合液滴加到血细胞计数器计数池的边缘。此时液滴将在虹吸的作用下进入盖玻片下方的计数池以同样的方式在另一侧的计数池中也加入细胞悬液将计数板放置几分钟使细胞扩散，同时用吸水纸吸除多余的液体细胞计数：

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6、解冻完成后，依次将血浆解冻袋取出，将血浆去掉解冻袋后放置室温下待用； 7、如果解冻后的血浆温度已经恢复到室温仍未发出，应该将血浆转移到4℃储血冰箱内待用。八、注意事项 1、解冻箱应使用独立的三芯插座； 2、解冻箱上水时务必连接好排水管，防止加水过量后溢水。 3、发现有破损血浆时需立即换水，并进行清洗。 4、要避免血袋标签等物品落入水箱内，以免堵塞水管，致使水循环系统瘫痪； 5、解冻箱长期不用时，应将解冻箱内的水排尽。九、保养与维护 1、解冻箱应每周做清洗保养，清洗内外表面； 2、温度校正：每年由计量部门对解冻箱进行温度检测，如发现实测温度与显示温度相差0.5℃以上，应对解冻箱进行校正。

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操作规程一．目的建立循环水浴箱解冻新鲜冰冻血浆、普通冰冻血浆及冷沉淀标准操作规程,规范冰冻血液成分解冻操作流程,血液质量安全。二．职责本科室工作人员应用此操作规程,为临床提供安全的血浆。三．原理冰冻血浆融化箱采用电气控制原理,新鲜冰冻血浆、普通冰冻血浆及冷沉淀等需要在 37 一 40℃稳定温度条件下，解冻防止蛋白成分析出 ,循环水溶箱可以维持稳定温度的水浴条件，快速、批量解冻冰冻血液制品，解冻速度和血液质量。四．适用范围适用于循环水浴箱解冻新鲜冰冻血浆、普通冰冻血浆及冷沉淀操作。五、器材与试剂器材：血库融浆机，血浆解冻袋六、环境条件温度：20-27℃，湿度≤80% 七、操作程序： 1、连接进水管，排水管，接通电源； 2、打开电源开关，按“启动"键，提示“缺水"状态，拧开水龙头开始加水，直至进水完成，“预温"灯亮； 3、设定解冻温度（一般设定为38℃）及解冻时间（根据解冻血浆数量确定，一般设定在16分钟以上）； 4、待预温完成后，水箱水位上升到工作状态； 5、将血浆或冷沉淀从低温冰箱中取出，去掉包装盒，套上解冻袋，放入解冻槽中，盖好解冻箱盖；

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