A-375人恶性黑色素瘤细胞

                        A-375人恶性黑色素瘤细胞 百欧博伟生物

一、细胞简介

平台编号：Bio-72956

规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶

细胞信息：A-375/A375

细胞名称：A-375（人恶性黑色素瘤细胞） 

种属：人

年龄（性别）：女；54岁

组织来源：皮肤；恶性黑色素瘤

生长特性：贴壁

细胞形态：上皮细胞样

背景描述：A-375细胞源自一位54岁女性，是由D·J·Giard等人建立的一系列细胞株中的一株。A-375细胞在抗胸腺细胞球蛋白、血清处理的NIH瑞士小鼠中形成类似于恶性黑素瘤的快速增长的皮下肿瘤；A-375在普通成纤维细胞和琼脂上形成克隆。

生长培养基：DMEM高糖＋10% FBS＋1% P/S

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5% 温度：37℃

用途：(STR鉴定正确)

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、细胞特性

1）来源：人黑色素瘤

2）形态：上皮细胞样，贴壁生长

3）含量：>1x106 细胞数

4）规格：T25 瓶或者 1mL 冻存管包装

5）用途：仅供科研使用。

三、细胞的运输和保存

干冰运输及复苏好存活细胞：

（1）1mL 冻存管包装干冰运输，收到后-80 度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

（2）T25 瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

四、细胞接收后的处理方法

1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将 T25 瓶置于 37℃培养箱放置约 2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

2）请在 4 或 5X 显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各 2-3 张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。

3）贴壁细胞：细胞在 37℃培养箱中放置 2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在 60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基 6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达 70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。

4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议 T25 培养瓶 1：2 传代。

五、细胞培养步骤

1、培养基及培养冻存条件准备：

1）准备 DMEM 基础培养基（高糖）87 %，

优质胎牛血清 10 %

谷氨酰胺（100x） 1%

丙酮酸钠（100x） 1%

青霉素-链霉素（100x） 1%

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37 摄氏度。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

2、细胞处理：

1）冻存细胞的复苏：：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含 4-6mL 完全培养基的离心管中混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含 6-8ml 完全培养基的培养瓶（或皿）中 37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前 3 代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：

1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2、加入 0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA 于培养瓶中（T25 瓶 1-2mL，T75 瓶 2-3mL），置于 37℃培养箱中消化 1-2 分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入 3-4ml 含 10%FBS 的培养基来终止消化。

3、轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 3-5min，弃去上清液，补加 1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按 1：2 的比例分到新 T25 瓶中，添加 6-8ml 按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按 1:2~1:5 的比例进行。

下面 T25 瓶为例；

1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为 1×106~1×107个活细胞/ml.

2、1000rpm 离心 3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml 冻存液含 1×106~1×107 个活细胞/ml 分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80 度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

六、注意事项

1、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

2、建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。

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