大鼠脑微血管内皮细胞

                       大鼠脑微血管内皮细胞 百欧博伟生物

内皮细胞系指血管、淋巴管的内膜上皮将内腔面覆盖的细胞。多数是单层扁平上皮属中胎叶性的上皮。血液循环和组织中大单核的游走的吞噬细胞有人认为是来自增生的血管内皮。小鼠淋巴管内皮细胞分离自淋巴管组织；淋巴管由毛细淋巴管汇合而成。其形态结构与静脉相似，但管径较细，管壁较薄，瓣膜较多且发达，外形呈串珠状。脑微血管内皮细胞是构成血脑屏障(BBB)的重要成分，与外周血管内皮细胞不同，它具有高跨内皮阻抗(TER)、细胞间紧密连接、极少的胞饮小泡、缺乏窗孔结构以及含有选择性双向跨细胞膜转运系统等独有的特征，从而使血脑屏障形成一个限制大多数极性分子和蛋白质运动的选择性低渗透性的屏障。

一、产品信息

平台编号：Bio-73733

规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶

细胞信息：原代细胞

细胞名称：大鼠脑微血管内皮细胞

培养条件：原代细胞取组织现分

用途：研究

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、细胞详述

脑微血管内皮细胞是血脑屏障的主要组成成分，能够限制可溶性物质和细胞等从血液进入大脑。大脑微血管内皮细胞与外周内皮细胞相比具有一些相同特性。

脑微血管内皮细胞存在许多细胞间紧密连接，产生很高的跨内皮阻抗，延迟细胞旁的通量；脑微血管的内皮细胞间衔接得十分紧密，不象其他组织的血管内皮细胞那样有较大的缝隙脑微血管内皮细胞缺乏内皮细胞的窗孔结构，其液相物质胞饮水平较低；脑微血管内皮细胞具有不对称定位酶和载体介导转运系统，从而产生 “两极分化”的表现型。 与外周内皮细胞相同，大脑微血管内皮细胞表面表达细胞粘附分子，调控白细胞进入大脑。由于微血管内皮细胞的器官特异性，内皮细胞通常取源于疾病研究的相关组织。

三、细胞特性

1)组织来源于实验动物的脑动脉组织。

2)细胞鉴定：血管假性血友病因子（vWF）免疫荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

5)细胞生长方式：铺路石状细胞，不规则细胞，贴壁培养。

四、产品的运输和保存

视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。

1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。

2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。

五、产品使用

1)本产品仅能用于科研

2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核

3)本产品未通过用于活体诊断的审核

六、体外培养

1、脑微血管段的分离与脑微血管内皮细胞原代培养

大鼠颈椎脱臼处死后浸泡于759毛乙醇中消毒3-5min百断头置于玻璃培养阻中，打开颅腔后取出全脑置盛有冷D-Hanks液的玻璃培养皿中解剖去除小脑、日]脑(包括海马)，随后将大脑半球在干滤纸上缓慢滚动以吸除软脑膜及脑膜大血管后置于新的含冷D-Hanks液玻璃培养皿中，用细解剖摄去除大脑白质、残余大血管和软脑膜，保留大脑皮质，用D-Hanks液漂洗次后，加入mlDMEM培养液，用虹膜剪将其剪碎成mm大小，加入0.1%II刑胶原酶(含30u/mlDNasel.1ml1大脑)混匀后37oC水浴消化1.5，离心(1000r/min，8min，主温)，去上请液，加入20%BSA悬浮混匀后离心(1000g，20min，4OC)或加入159毛葡聚85糖悬浮混匀后离心(4000r/min，20min，4OC)，去除中上层神经组织及大血管，保留底音沉淀，加ml0.1%胶原酶/分散酶(含20u/mlDNaseI)浮泪匀后37oC水浴消化，自心(1000r/min，8min，言温)，去上清液，加入mlDMEM培养液悬浮后铺于经离心形成连续梯度的12ml50%Percoll(25000g，60min，4OC)，离心(1000g，10min，4OC)，靠近底部的红细胞层之仁的白黄色的层面即为纯化的微血管段，吸出后用DMEM洗两次(离心1000r/min，5min，室温)，去上清液，加入DMEM完全培养液(含20%FBS100μglml肝素铀)悬浮后接种于涂布基质的35mm一次性塑料培养皿(1.5ml1培养皿，可接种个培养皿/大脑)，置于3TC5%C0培养箱内静置培养12-24后换液，并加入ng/mlbFGF，随后隔天换液。

2、结果

接种当时可见由圆形的内皮细胞构成的呈单枝状或分枝状的脑做血管段，并可见散在的单细胞及组织碎片(图1-1)；培养12-24后可见培养的细胞从贴壁的微血管段周围长出，细胞呈短梭形，区域性单层生长，经换液后微血管段的残余部分不断减少，成纤维细胞、周细胞等杂细胞含量较少：随着培养时间的延长，内皮细胞不断增殖，可见"旋涡状"分布，大约5-7天细胞达到融合，短梭形的内皮细胞占90%以上，但可见少量周细胞等杂细胞生长于内皮细胞单层表面或细胞克隆间隙(未示)。细胞生长过程见图1.细胞接种于纤连蛋白/N型胶原涂布的培养皿。