人前列腺癌细胞的应用与操作步骤！

                   人前列腺癌细胞的应用与操作步骤！

一、C4-2B 人前列腺癌细胞的简介

C4-2B，人前列腺癌细胞上皮样细胞呈多角形，尺寸更为规则，贴附在基质上呈散在斑片状生长。

产品名称： C4-2B

中文名称：人前列腺癌细胞

细胞数量：1*10^6

组织来源：前列腺癌；左锁骨上淋巴结转移；男性

细胞种属：人

生长特性：贴壁

细胞污染： HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌检测阴性。

培养基：1640，90%；FBS，10%；双抗。

传代方法：1:2-1:4

培养条件：空气, 95%; CO2, 5%。温度: 37℃

二、C4-2B 人前列腺癌细胞操作步骤

1、细胞传代

如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。（1）弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。（2）加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。（3）按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。（4）将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

2、复苏细胞

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

3、细胞冻存

待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；（1）细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。（2）1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。（3）将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

4、细胞运输

干冰运输(2ml冻存管)或活细胞运输（T25细胞瓶）

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