胎牛血清(FBS)的基础知识与提取方法!
一、什么是胎牛血清(FBS)?
胎牛血清(FBS)是指通过封闭的采集系统从牛胎儿的血液中提取的血清。血清又是什么呢?血清是血液自然凝结后剩下的琥珀色血液部分;通常通过离心进一步精制,以去除残留的血细胞。不含血细胞、纤维蛋白及凝集因子等,含有多种对细胞生长必需的营养因子及大分子物质。
二、胎牛血清可以用在哪里?
胎牛血清(FBS)用作真核细胞体外细胞培养的生长补充剂 。动物血清(牛血清和其它动物血清)都用于细胞培养,其中使用最广泛的是胎牛血清(FBS)。 FBS含有生长因子和极低水平的抗体,因此在许多不同的细胞培养应用中具有多功能性。在FBS中发现了1000多种成分,包括蛋白质,电解质,脂质,碳水化合物,激素,酶和其他不确定的成分,这些成分在许多培养条件下对于支持细胞生长都是必需的。
制造环境中的学术和工业研究人员以及科学家都在其细胞培养基中使用胎牛血清(FBS)进行调查,包括生物技术研究/生产,疫苗制造,克隆和动物诊断。
胎牛血清能够用在人兽疫苗及生物技术药物的科研、工业生产和质量控制领域。胎牛血清通常用于人源细胞系和原代细胞培养。
三、胎牛血清的优点是什么?
与其它类型血清相比,胚胎期动物血清含有更多的生长因子,及较少的gamma球蛋白含量。此外,跟新生动物血清和成体动物血清相比,胚胎期血清含有更低浓度的补体。补体具有溶解细胞的副作用,还会干扰免疫检测。
四、胎牛血清的来源地是哪里?
胎牛血清的主要来源地就是那些大量养牛的国家,包括美国、澳大利亚、新西兰、加拿大及南美和中美洲地区,由政府机构管理血清制品的生产及收集过程。 胎牛血清分为美国农业部(USDA)级和欧盟级。其中,美国农业部级胎牛血清没有疯牛病(BSE)及口蹄疫(FMD)污染,能够出口到任何国家,而欧盟级胎牛血清只在大部分欧洲国家及亚洲国家销售。
五、如何保存胎牛血清?
胎牛血清一般是在-5°到-20°之间冻存,2°到8°之间融化。一个比较好的办法是,将胎牛血清分装到50ml管中,这样做就避免了反复冻融对血清造成的危害。偶尔一些试管等分的血清在冷冻温度下保持液态。 这是由于缺少成核中心,就是一些引发结晶(冷冻)的颗粒物质。只需用手指轻弹管子,它们就会立即固化。 血清融化后常出现沉淀,可能是血清蛋白变性造成的。简短离心即可除去沉淀,并且,这些沉淀一般不会影响血清质量的。
六、胎牛血清的提取方法和流程
胎牛血清应取自剖腹产的胎牛,胎牛血清是品质最高的,因为胎牛还未接触外界,血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少。现有的胎牛血清制备工艺复杂、成本高,且纯度低,不利于体外细胞培养。
1)将怀孕9个月的母牛进行剖腹产,产前采用侧卧,剖腹产前进行局部麻醉;
2)手术切口位置选择在左腋窝腹壁的五分之二处,切口长为30cm;
3)胎牛拉出子宫后,在洁净室的层流罩下对胎牛进行心脏穿刺采血,心脏穿刺采血时采用消毒后的采血针,采血部位为胎牛的心脏,采血后立即将采集的血液输入带盖瓶体,带盖瓶体的瓶盖中部具有用于采血针穿过的小孔,待将采集的血液输入瓶体后,将带有采血针孔的瓶盖更换为密封瓶盖;
4)将步骤3)中的带盖瓶体放入冷冻离心机中,以3800转/分的转速离心35分钟,析出的血清收集进已经过杀菌的容器内进行保存;
5)将步骤4)中的血清在净化车间进行解冻,解冻温度为恒温27°;
6)对步骤5)中化开的血清进行过滤,从上到下依次三层微孔过滤膜进行3次过滤,过滤孔径依次为0.1μm。即得胎牛血清。
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