大鼠肠巨噬细胞的应用！

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一、背景

大鼠肠巨噬细胞自肠道组织；肠道指的是从胃幽门至肛门的消化管。肠是消化管中最长的一段，也是功能最重要的一段。哺乳动物的肠包括小肠、大肠和直肠3大段。大量的消化作用和几乎全部消化产物的吸收都是在小肠内进行的，大肠主要浓缩食物残渣，形成粪便，再通过直肠经肛门排出体外。肠道堪称身体最劳累的器官——每天不停地消化、吸收食物，以提供足够的养分，其实它的功能还远不止此——它还是机体内最大的微生态系统。

巨噬细胞属于免疫细胞，有多种功能，是研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的重要对象。巨噬细胞属免疫细胞，有多种功能，是研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的重要对象。巨噬细胞较易获得，便于培养，并可进行纯化。巨噬细胞属不繁殖细胞群，在条件适宜下可生活2-3周，多用做原代培养，难以长期生存。

巨噬细胞（Macrophages）是一种位于组织内的白血球，源自单核细胞，而单核细胞又来源于骨髓中的前体细胞。巨噬细胞和单核细胞皆为吞噬细胞，在脊椎动物体内参与非特异性防卫（先天性免疫）和特异性防卫（细胞免疫）。它们的主要功能是以固定细胞或游离细胞的形式对细胞残片及病原体进行噬菌作用（即吞噬以及消化），并激活淋巴球或其他免疫细胞，令其对病原体作出反应。

二、应用

用于长链非编码RNA在脂多糖刺激的大鼠肠巨噬细胞中表达谱分析研究：

分析长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)在脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导大鼠的肠巨噬细胞组与未处理组之间差异表达谱,并对差异表达的mRNA进行生物信息学分析,为初步探讨lncRNA的调控机制奠定基础。

1、方法

⑴提取六只大鼠的肠巨噬细胞进行培养,随机分成两组,实验组加脂多糖(浓度为1 mg/L)诱导大鼠的肠巨噬细胞,对照组则未加脂多糖。应用高通量基因芯片技术(Affymetrix Gene Chip Mouse Transcriptome Array 1.0)检测两组之间差异表达的lncRNA和mRNA,并用分层聚类的方法分析两组间差异表达的lncRNA和mRNA。

⑵对芯片筛选出差异表达的mRNA进行基因功能分析(GO-Analysis)和信号通路分析(Pathway-Analysis)探索其参与的生物学功能,并构建差异表达lncRNA和mRNA的共表达网络,从中发现处于核心调控地位的lncRNA。

⑶结合共表达网络分析结果和基因芯片数据,挑选出差异表达的lncRNA和mRNA采用实时荧光定量PCR技术,对芯片结果进行验证。

2、结果

将差异表达的纳入标准设为:差异表达倍数(Flod-change)>1.5,P值<0.05,与对照组相比,LPS处理的肠巨噬细胞组lncRNA和mRNA表达谱发生明显变化,差异表达的lncRNA共有357个,其中上调的有245个,下调的有112个。差异表达的mRNA共有542个,其中上调的有187个,下调的有355个。

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