创伤弧菌的制备与鉴定方法！

                      创伤弧菌的制备与鉴定方法！

 创伤弧菌属革兰氏阴性弧菌。在液体培养基中菌体大小为0.7*2-3μm,稍弯曲。在固体培养基中呈多样性。有极端单鞭毛。培养特性：营养要求一般，最适生长温度为30℃，兼性厌氧。在无NaCl及超过8%NaCl的培养基中不生长，可在0.5%NaCl及3%NaCl的蛋白胨水中生长，在含6%NaCl的蛋白胨水中生长良好。

非冷冻样品采集后应立即置7℃～10℃冰箱保存，尽可能及早检验；冷冻样品应在45 ℃以下不超过15 min或在2℃～5℃不超过18 h解冻；如果样品需要冷冻贮存，应在样品中加等量缓冲甘油-氯化钠溶液（液体样品应加双料），推荐贮存温度为-70 ℃以下。

甲壳类，则应先在自来水中洗刷外壳并甩干表面水分，然后以无菌操作打开外壳，按上述要求取相应部分。

以无菌操作取检样25 g（mL），加入3％氯化钠碱性蛋白胨水225 mL，用旋转刀片式均质器以8 000 r/min均质1 min，或拍击式均质器拍击2 min，制备成1:10的均匀稀释液。如无均质器，则将样品放入无菌乳钵中磨碎，然后放在500 mL的灭菌容器内，加225 mL 3％氯化钠碱性蛋白胨水，并充分振荡。鱼类和头足类动物取表面组织、肠或鳃。贝类取全部内容物，包括贝肉和体液；甲壳类取整个动物，或者动物的中心部分，包括肠和鳃。

嗜盐性试验：挑取纯培养的单个可疑菌落，分别接种于不同氯化钠浓度的胰胨水，36 ℃±1 ℃培养24 h，观察液体混浊情况。创伤弧菌在无氯化钠、8％氯化钠和10％氯化钠的胰胨水中不生长，在6％氯化钠的胰胨水中生长旺盛。

氧化酶试验：挑选纯培养的单个菌落进行氧化酶试验，创伤弧菌为氧化酶阳性。

涂片镜检：将可疑菌落涂片，进行革兰氏染色，镜检观察形态。创伤弧菌为革兰氏阴性，呈棒状或弧状。

挑取纯培养的单个可疑菌落，转种3％氯化钠三糖铁琼脂斜面并穿刺底层，36 ℃±1 ℃培养24 h观察结果。创伤弧菌在3％氯化钠三糖铁琼脂中的反应为底层变黄不变黑，无气泡，斜面颜色不变或红色加深，偶尔斜面变黄。

V-P试验：以接种针由3％氯化钠三糖铁琼脂斜面挑取少许培养物穿刺3％氯化钠MR-VP培养基，36℃±1 ℃培养24 h，在加V-P试剂前应先观察动力。沿穿刺线周围呈扩散性生长为动力阳性。

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