巴氏梭菌的培养条件与注意事项!
一、菌种简介
1、菌种名称:巴氏梭菌 Clostridium pasteurianum
2、菌种编号:bio-103518
3、生物危害程度:四类
二、储存条件
冻干菌种和试管斜面请置于 2-8℃冷藏。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。
三、培养条件
1、培养基编号:CM0162
2、培养基成分:
(1)全玉米粉加水调成糊,倒入沸水中,使其浓度为 5%,不断搅拌,煮1h。分装于已灭菌的试管中,1.5kg/cm2 压力下灭菌 90min。(代替巴氏灭菌)
(2)冷却后接种。
(3)接种后将试管放入沸水浴中热处理 1~2min。
(4)将试管立即在冷水中冷却,揩干试管。
(5)37℃厌氧培养 7~10 天,如糊化液全部液化,顶盖浮在上面,下部有云带,即表明生长良好,可作为种子,按上述步骤再传一代,即可扩大培养。
3、需氧类型:厌氧
4、培养温度:38℃
四、注意事项
1、菌种常规培养时间:细菌 1-2 天,酵母 3 天,霉菌 5-7 天,大型真菌 7-10 天。
2、试管斜面菌种请尽快转接,不建议长期存放。
3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养,如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失,我单位不负责任。
4、使用者应保证菌种的安全存储和操作,带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。
5、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降,应及时和中国微生物菌种查询网联系或更换新的菌种。
五、冻干管打管说明书
1、安瓿瓶开封:用浸过 75%酒精的脱脂棉檫试冻干管表面进行消毒,将管顶端于酒精灯外焰上均匀加热;立即滴 2-3 滴无菌水于加热部位,使管壁破裂;再用镊子或其他适宜工具敲下破裂处。
2、菌株恢复培养:用无菌吸管吸取 0.5ml 左右液体培养基(固体培养基去掉琼脂即可)于冻干管中将冻干菌粉全部溶解。将溶解后的菌悬液转移至盛有 4~5mL 液体培养基的试管中混匀,并取 100μL 转接到固体培养基上。将液体试管和斜面试管于推荐条件下静置培养。
3、注意事项:菌种活化前,请将安瓿管保存在 2-8℃的环境下,某些菌种经过冷冻干燥保存
处于休眠状态,延迟期较长,需要转接至 2-3 代恢复活力。
4、复苏后的菌种在传 1-2 代后使用。
5、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏(特殊除外)。
6、冻干管打开后需一次用完,不能留存。
7、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行,生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作,打管时冻干管应远离面部,保护眼睛。
8、打管操作应在烧杯或托盘上方进行,用完冻干管应灭菌处理后丢弃。
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