人食管鳞癌细胞的培养方法与注意事项！

                  人食管鳞癌细胞的培养方法与注意事项！

一、菌株简介

平台编号：bio-107428

规格：1×10?cells/T25培养瓶

拉丁属名：KYSE-150（人食管鳞癌细胞）

细胞又名：KYSE 150; KYSE150; Kyse150; KY150

细胞来源：DSMZ

种属来源：人

组织来源：食管

疾病特征：鳞癌

细胞形态：上皮细胞样

生长特性：贴壁生长

培养基：RPMI 1640/F12，90%；FBS，10%。

生长条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%; 温度：37 ℃, 

传代方法：1：2至1：6，每周2次。

冻存条件：90% 完全培养基+10% DMSO，液氮储存

二、KYSE-150人食管鳞癌细胞接受后处理

1) 收到细胞后，请检查是否漏液 ，如果漏液，请拍照片发给我们。

2) 请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。

3) 弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的完全培养基。

4) 如果细胞密度达80%-90%请及时进行细胞传代，传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。

5) 接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。

三、KYSE-150人食管鳞癌细胞培养操作

1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将 细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。      

1)弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2)加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。  

3)按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4)将细胞悬液按1：2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

下面T25瓶为类：

1)细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2)4min 1000rpm离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。

3)将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

四、KYSE-150人食管鳞癌细胞培养注意事项

1、收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。

2、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问 题，责任由客户自行承担。

3、用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养4~6小时,再取出观察。此时多数细胞均会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常，请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活力，请拍下照片及时和我们联系，信息确认后我们为您再免费寄送一次。

4、静置细胞贴壁后，请将细胞瓶内的培养基倒出，留6~8mL维持细胞正常培养，待细胞汇合度80%左右时正常传代。

5、请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件。

6、建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和Procell技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7、该细胞仅供科研使用。

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