A549人非小细胞肺癌细胞使用说明书！

                 A549人非小细胞肺癌细胞使用说明书！

一、细胞简介

平台编号：bio-72958

规格：5×10?cells/T25培养瓶

拉丁属名：A549

细胞名称：A549（人非小细胞肺癌细胞） 

种属：人 

年龄（性别）：男；58岁 

组织来源：肺癌 

生长特性：贴壁 

细胞形态：上皮细胞样 

背景描述：A549细胞是由D·J·Griad通过肺癌组织移植培养建系，源自于一位58岁白人男性；A549能通过胞苷二磷酸胆碱途径合成含有高含量不饱和脂肪酸的卵磷脂。 

生长培养基：Ham's F-12K(货号:PM150910)＋10% FBS(货号:164210-500)＋1% P/S(货号:PB180120) 

推荐传代比例：1:3-1:4

推荐换液频率：2~3次/周

倍增时间：~22 hours

冻存条件：冻存液：55% 培养基+40%FBS+5%DMSO 温度：液氮

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5% 温度：37℃

抗原表达情况：The cells are positive for keratin by immunoperoxidase staining.

保藏机构：ATCC; CCL-185 ATCC; CRM-CCL-185 ATCC; CRL-7909 BCRC; 60074 BCRJ; 0033 DSMZ; ACC-107 ECACC; 86012804

说明书下载：A549.pdf

二、细胞传代

1.用75%酒精喷洒整个培养瓶消毒，将其平躺置于培养箱中进行1-3小时的缓冲，.然后置于无菌操作台，打开瓶口，将其中的培养液去掉，再往其中加入5-6mL新鲜培养基(以T25培养瓶为例)并置于细胞培养箱中培养，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代，一般2到3天换一次液；

2.待细胞长满瓶底面积80%-90%，需要对其进行传代，传代比例为1:3到1:6；

3传代步骤：将0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°预热，倒掉培养瓶中的培养基，往培养瓶中加入3-5 ml PBS，轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1-2 ml预热好的胰酶，置于37°孵育消化（第一次消化需时常取出置于显微镜下观察，以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为z佳消化时间，记录最佳消化时间，以便于下次消化），消化好后加入3ml完全培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之完全脱落，然后收集细胞悬液，1200rpm离心3min，弃上清，加入完全培养基重悬细胞，进行传代。

三、细胞保存

冻存条件：80%完全培养基+10%FBS+10%DMSO

(备注：建议使用本公司的冷冻液（H-W-100），用4度保存的冷冻液直接重悬细胞，不能预热后使用。)

保存条件：液氮存储

四、供应限制：仅供研究之用。

五、常见问题及解决方案

1.培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。

2.收到细胞后尽快更换为含 10%血清的新鲜培养基，如因特殊情况需要继续使用原瓶培养基，请在原瓶培养基中额外添加 10%的血清（原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过 72 小时）

3.细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。1-2小时后观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留8-10ml培养液培养观察，细胞生长至汇合度80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。

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