TG1 大肠杆菌 百欧博伟生物 微生物菌种

              TG1 大肠杆菌 百欧博伟生物 微生物菌种

一、基本信息

平台编号：bio-103845

规格：1ml甘油菌附带一块平板

中文名：TG1 大肠杆菌

运输及保存： 低温运输，-80℃保存，有效期一年。

自备试剂： YPD 培养基、山梨醇、超纯水等。

二、产品特点

三、使用方法 

质粒转化大肠杆菌TG1菌种的方法有很多，如电转化、化学转化等。根据实验方法的不同，用的试剂和培养基有所不同。本手册提供一个电转化方

法。

1、挑取酵母单菌落，接种至含有 5 mL YPD 培养基的 50 mL 三角瓶中，30℃，250-300 r/min 培养过夜；

2、取 100-500 μL （≤1:100）的培养物接种至含有 50 mL 新鲜培养基的200 mL 三角摇瓶中，28~30℃，250-300 r/min 培养过夜(约 20 小时)，至 OD600 达到 1.3~1.5；

3、将细胞培养物于 4℃，1500g 离心 5 分钟，用 50 mL 的冰预冷的无菌水将菌体沉淀重悬；

4、按步骤 3 离心，用 25 mL 的冰预冷的无菌水将菌体沉淀重悬；

5、按步骤 3 离心，用 2-5 mL，1M 的冰预冷的山梨醇溶液将菌体沉淀重悬；

6、按步骤 3 离心，用 160 μL 的冰预冷的 1M 的山梨醇溶液将菌体沉淀重悬，其终体积约为 240 uL；

7、将 5~20 μg 的线性化 DNA 溶解在 5~10 μL TE 溶液中，与 80 μL 的上述步骤 6 所得的菌体混匀，转至 0.2 cm 冰预冷的电转化杯中；

8、将电转化杯冰浴 5 分钟；

9、根据电转化仪提供的资料，参考其他文献及多次摸索，确定合适的电压、电流、电容等参数，按优化的参数，进行电击（推荐：电压 1.5 kV ；电容 25 μF ；电阻 200 Ω；电击时间为 4 ～10 msec）。

10、电击完毕后，马上加入 1 mL 1M 的冰预冷的山梨醇溶液将菌体混匀，转至 1.5 mL 的 EP 管中，置于 30℃摇床低速培养 1 小时；

11、将菌体悬液涂布于 MD 平板上，每 200~600 μL 涂布一块平板；

12、将平板置于 30℃倒置培养，直至单个菌落出现（3-4 天）。

四、注意事项

1、涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μL转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4,000rpm，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。

2、新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

3、涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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