金黄色葡萄球菌的检测方法与注意事项！

      金黄色葡萄球菌的检测方法与注意事项！

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus，S. aureus)也称“金葡菌”，隶属于葡萄球菌属，是革兰氏阳性菌代表，为一种常见的食源性致病微生物。该菌最适宜生长温度为37℃，pH为7.4，耐高盐，可在盐浓度接近10%的环境中生长。金黄色葡萄球菌常寄生于人和动物的皮肤、鼻腔、咽喉、肠胃、痈、化脓疮口中，空气、污水等环境中也无处不在。

一、菌种简介

平台编号：bio-59957

提供形式：冻干物

拉丁属名：Staphylococcus aureus

中文名称：金黄色葡萄球菌

属名：Staphylococcus

种名加词：aureus

其它中心编号：=ATCC 27217

来源历史：←中国检验检疫科学研究院(22003) ←军事医学科学院

收藏时间：2008.1.5

资源归类编码：15131315101

模式菌株：非模式菌株

用途：研究、质量控制，《GB 4789.10-2010金黄色葡萄球菌检验》阳性对照菌株。

主要用途：研究；分析检测

具体用途：研究、质量控制

特征特性：G+球菌，鸟氨酸脱羧酶阴性，发酵葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖产酸不产气。发酵甘露醇。甲基红反应阳性，伏-普实验弱阳性。产金黄色色素。低毒性。兼性厌氧，最适pH7.0-7.5。    

生物危害程度：三类

致病对象：人畜共患

致病名称：溃疡、脓肿等

传播途径：经口、呼吸道、接触

培养基：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入5mg MnSO4·H2O，则有利于产生芽孢。

培养温度：37℃

资源保藏类型：培养物

保存方法：真空冷冻干燥法

实物状态：有实物

共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享

二、储存条件

冻干菌种和试管斜面请置于 2-8℃冷藏。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。

三、培养条件

1、培养基编号：CM0002

2、培养基成分：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入 5mg MnSO4·H2O，则有利于产生芽孢。

3、需氧类型：好氧

4、培养温度：37℃

四、检测方法

1、传统分离鉴定方法

世界上对食品中金黄色葡萄球菌的检测通常采用生化鉴定的手段，并在初期采用平板划线分离。当前我国检测食品中金黄色葡萄球菌依据国家标准《食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验》(GB4789.10-2016)中的方法进行。国家标准执行内容包括定性检测和定量检测两部分。在无菌条件下接种到肉汤中进行前增菌，最后将培养物接种划线，根据生化鉴定方法进行血清学鉴定。传统生化鉴定方法操作简单，稳定性强，成本低，是目前最常用的鉴定方法。

2、免疫学检测方法

免疫学检测方法主要是基于免疫学理论研究，其是通过设计的抗原、抗体和免疫细胞，检测抗原和抗体的结合以及免疫细胞分泌的细胞因子的，从而达到检测目的一种实验方法。该技术方法主要包括酶联免疫法、免疫荧光法、免疫胶体金法等。

①酶联免疫法：其原理是利用抗体与抗原在载体表面的特异性结合，加入某种酶，酶与抗体或抗原结合在一起，从而形成可以跟踪抗体或抗原的标记物，由于抗原或抗体与受检样品的反应产生抗原或抗体的复合物，此时加入酶反应显色底物，产物的量的大小与检测物质的量的大小呈正相关，分析显色情况从而确定样品中待检测物的含量。目前已经开发了几种根据 ELISA 技术用于检测培养上清液和食物样品 (例如干酪，土豆沙拉，火腿和牛奶)中的金黄色葡萄球菌。

②免疫荧光法：免疫荧光技术利用荧光色素对抗体或抗原进行标记，然后检测目标抗原或抗体。抗原和抗体特异结合后，通过考察荧光信号的强弱进行定性定量检测。与酶介导的免疫测定相比，基于荧光的免疫测定具有提供高通量分析和灵敏度的更大潜力。

③免疫胶体金法：该方法借助硝酸纤维膜为固定相载体，样品溶液通过毛细作用在试纸条中移动，在试纸条中同时加入了针对待检测物质特异性的抗原或抗体。与 ELISA 技术相比，免疫胶体金技术操作更为简单，对实验人员没有特别的技术要求，适合基层单位和现场诊断。但是免疫胶体金相比较 ELISA 法而言，灵敏度更低，且使用范围不广，需要进一步的研究。总体而言，免疫胶体金有着强大的发展潜力和广阔的应用前景。

3、分子生物学检测方法

该技术主要包括聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）技术，核酸探针技术，环介导等温扩增技术等技术。

①聚合酶链反应技术：该方法的原理是在 DNA聚合酶的作用下，游离的脱氧核糖核酸参照碱基互补配对的原则，以模板 DNA为主链，通过提供一段引物，迅速的扩增 DNA 的双螺旋结构。PCR 技术特异性强、敏感度高，已广泛应用于医学、生物学等领域中。PCR 作为致病微生物的检测方法，稳定性强，是目前主流的检测方法。在微生物检测应用中，引物的设计以及靶序列的选择是 PCR 方法的核心。PCR 法同时也有一定的局限性，由于该方法需要对样品进行增菌，食品成分复杂，会对实验造成干扰。与其他方法相比，PCR 技术仪器设备价格高，需要花费的成本较高，推广普及需要一定的时间和资金支持。

②核酸探针技术：通过使用基因特异性核苷酸序列作为探针与目的 DNA 杂交的一种核酸杂交技术，通过检测该段特异性的标记物，从而判断是否含有目标微生物。核酸探针具有分子生物学检测技术的灵敏度高、特异性强的优点，但是实验周期长，操作繁琐，如果样品中目标微生物含量过低，极易造成样品目标微生物未检出，出现假阴性的实验结果。

③环介导等温扩增技术：该技术基于 DNA扩增技术，能够在恒温条件下，根据设计的多对引物，利用链置换型 DNA 聚合酶快速的进行核酸的扩增。与 PCR 方法比较，环介导等温扩增法操作更加快捷简单，花费成本较低，且对仪器要求低，能够广泛利用在食源性致病微生物的检测中。

4、其他方法

试剂盒法：试剂盒法通常将十多种，甚至几十种培养基或成分集中在特定微型装置内，通过观察微生物的生长和代谢过程的某些产物或现象，对试验现象进行分析，将传统试验中多次试验通过一次完成，缩短了检测时间。此法可大大缩短测试时间，在24 h内得出结果，甚至某些可缩短至4 h内。目前，用于检测金黄色葡萄球菌的成品试剂盒有API、MIS等。

测试片法：其将纸膜、纸片或胶片附着相关培养基和特定显色液作为金葡菌的培养载体，依据金葡菌在载体上的生长以及显色情况，来衡量食品中金黄色葡萄球菌的存在数量，该方法简便易行，但结果精度不高。

四、注意事项

1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。

2、试管斜面菌种请尽快转接，不建议长期存放。

3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。

4、使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃

5、与菌种相关的其它信息请参阅中国微生物菌种查询网网站(www.biobw.org）。