多重荧光免疫组化在探究细胞迁移与分化的应用

多重荧光免疫组化在探究细胞迁移与分化的应用 ：

多重荧光免疫组化技术（mIHC）利用酪氨信号放大技术（TSA），对不同抗原进行多轮次染色标记，可对单一切片进行至多六指标七色的染色，对于研究多种细胞之间的原位相互作用很有帮助，涉及到研究多细胞或多指标之间相互作用的领域都可以采用mIHC的技术替代传统的IHC或IF，来获得更高通量的研究结果。主要的应用领域如下图所示：  

今天就和大家分享一篇多重荧光免疫组化在探究细胞迁移与分化的应用，帮助大家更好的理解mIHC。 正畸牙移动过程中，牙周韧带内的细胞可分化为成骨细胞，合成牙槽骨，并影响间充质干细胞的增殖、迁移和分化，促进骨重塑。然而，这种机制在很大程度上仍然难以捉摸。在此，研究者评估了正畸机械应变下小鼠牙周膜张力部位和循环张力应变处理的人类牙周膜细胞中CREB的表达。然后，通过功能的得失分析，发现PDLCs中的CREB促进SDF-1和FGF2的分泌，从而增强骨髓间质干细胞的迁移和成骨分化。进一步发现CREB通过结合启动子区域转录激活FGF2和SDF-1的表达。 

这项亚研究利用多重免疫组化(mIHC)，为了比较骨膜蛋白与FGF2或SDF-1的表达检测研究者对右上颌第一磨牙施以正畸力3天。骨膜蛋白、CREB、FGF2、SDF-1、骨钙素(OCN)和α -平滑肌肌动蛋白(αSMA)进行多重免疫荧光染色。 (A)牙周组织中检测到骨膜蛋白(红色)、FGF2(绿色)和DAPI(灰色)。(B)牙周组织中检测到骨膜蛋白(红色)、SDF-1(绿色)和DAPI(灰色)。 

另外客户还做了IHC检测将实验组与对照组相比， OTM小鼠上颌第一磨牙张力部位P-CREB免疫组化染色。红色虚线框中的图像以更大的放大倍数显示。(B)张力部位PDL中P-CREB阳性细胞的百分比。(C)对右上颌第一磨牙施加正畸力3天。牙周组织中检测到骨膜蛋白(红色)、CREB(绿色)和DAPI(灰色)。(D-F) PDLCs分别于12h、24h、48h、72h行ct。未处理的细胞作为对照(0h) 

为了研究CREB是否能调控FGF2和SDF-1的表达，我们在感染PDLCs的条件培养基上进行了ELISA。结果显示，FGF2和SDF-1表达显著上调，siCREB-c降低了经cts处理的PDLCs条件培养基中FGF2和SDF-1的升高(图6 D, E)。这些结果表明，CREB可能在应用cts时充当FGF2和SDF-1的上游调节因子，数据进一步验证实验的可行性。 

mIHC方法可以允许在一张切片上同时标记多种marker，可以原位的展现多种细胞之间的相互作用，在临床科研和疾病诊断中都有很大的潜力，今天小编给大家分析的多重荧光免疫组化在探究细胞迁移与分化的应用就是如此，mIHC方法的应用，帮助科学家发现更精细的免疫细胞募集区域，为探秘临床减轻排异反应提供了更多可能性。 
今天的分享就到这了，感兴趣的小伙伴们可以关注爱必信的多重荧光免疫组化试剂盒及实验服务，相信看文章的你们也可以得到这样漂亮实验结果和好的实验发现！

【爱必信mIHC服务】

* 我们可以提供的服务：
Absin多重荧光免疫组化服务提供预实验验证-染色-拍照-分析全过程。 
最多六指标七色（含DAPI）的多色免疫组化服务（芯片最多四指标五色），样本涵盖石蜡切片、冰冻切片及组织芯片（TMA），组织大片请提供单块组织切片，FFPE样本，厚度3-5um。正式实验最好每例2张，1张备用。预实验样本数量根据预实验方案定。

(* 所有抗体指标需要您提供)

* 我们可以提供的服务结果：

1.五色及以下提供全片200X（相当于物镜20X，目镜10X）原图，六七色提供指定视野200X图片，选定视野一般默认3视野，超过视野单独收费，收费标准根据具体情况订，提供看图软件可在客户端打开。数据上传网盘1G以内，或用U盘寄送1G以上。
2.客户指定区域的单细胞分析结果：

• 单阳性细胞占有核细胞百分比，密度。

• 双阳性细胞占有核细胞百分比，密度。

• 组织面积和特定病理形态面积计算。

• TMA提供每个芯点的以上定量结果。

Absin多色试剂盒（abs50032） 

组分信息： SuperNova系列染料（可选）、信号放大反应液、鼠兔通用型或者抗兔抗鼠HRP标记二抗、抗荧光淬灭封片剂、DAPI 
产品特点： 可快速完成最高六指标七色的荧光多标记； 染料经过优化处理，相比普通染料，强度更高，持续时间更长； 有组化经验即可操作，染色无需特殊仪器，提供详细的protocol