WB实验是我们平时最常接触到的实验类型,也是最经典的免疫学实验,每年写WB实验技巧的文章,真是让人看花了眼,如果你厌倦了老生常谈的实验技巧,不如来看看我们今天的拓展,WB在半定量分析之外的妙用吧。
一、目标蛋白构象结合功能分析
WB 用于构象分析,主要基于其不同构象形式时分子量所发生的变化,比如不同的寡聚、翻译后修饰、配体结合等情况。还原和非还原型电泳分析链间二硫键,并判断蛋白聚合情况;
抗体表位分析法初步判断蛋白空间结构;利用(N - 端或 C - 端)抗体研究蛋白异构体及翻译后酶切修饰;更重要的是,WB 等方法获得的是蛋白在寡聚、结合配体、底物、信号标签等生理条件下,其分子量的动态变化,从而将蛋白结构研究与功能研究有机结合。
泛素化-蛋白酶体系统对于错误蛋白降解具有重要意义。上图显示 Nrf2 蛋白在泛素连接酶作用时间延长后,泛素化程度逐渐增加。若将各时间点的 Nrf2 蛋白结构解析,即可将该蛋白的结构研究与功能研究相结合。在 Virology 的这篇文献中,作者发现蛋白酶体抑制剂 MG132 和 lactacystin 可显著降低猪 II 型圆环病毒(PCV2)早期感染的滴度,并通过对泛素基因的沉默实验,发现其也显著降低 PCV2 滴度,由此推断泛素 - 蛋白酶体系统是 PCV2 的早期复制所必须的。
二、磷酸化信号分析
磷酸化是细胞信号系统的重要调节方式,特异的磷酸化抗体可以用于:分析信号分子磷酸化水平,从而与其功能研究建立联系;分析不同磷酸化位点对于信号分子功能的影响,比如 p53 总磷酸化水平与不同位点磷酸化水平对转录的调控,以及与癌症发生发展之间的联系。
Cai 等在JBC上发表的文章,揭示了微小RNA在肿瘤发生中的调节作用。研究发现微小RNA miR-17/20a 靶向抑制 p53 的核心激酶DAPK3(死亡相关蛋白激酶 3)的表达,去除这些微小 RNA 将导致依赖于 p53 的微小RNA转录抑制被去除,从而形成一个正反馈环,促进肿瘤形成,它们被称为原癌微小 RNA(oncomiRs)。C图清楚显示了当对 Hela 细胞转入 miR-17、miR-20a 或 miR-17/20a 拮抗剂后,DAPK3 蛋白表达增加,双链 DNA 不稳定性的标志物 ATM(Ser-1981)、p53BP1(Ser-25/29)蛋白丝氨酸磷酸化程度增高,而各自总蛋白水平并没有变化。D 图进一步确认了这些磷酸化水平升高是由 DAPK3 表达量升高引起的。p53 磷酸化水平升高将导致其抑制原癌微小 RNA 转录的水平下降,进一步提高 DAPK3 激酶的表达。该研究补充了原有的通过 E2F 家族蛋白激活 miR-17/20a 的负反馈调节通路。
爱必信的两款经典的WB产品,ECL发光液(abs920)和marker(abs924、abs922)
货号 | 品名 | 规格 |
abs50001 | Annexin V-FITC apoptosis assay kit | 50T/100t |
abs920 | ECL化学发光检测试剂盒 | 2*250ml |
abs922 | 预染蛋白marker, 10-180kDa | 500ul |
abs924 | 预染蛋白marker, 10-180kDa | 2×250ul |
abs923 | 预染蛋白marker | 500ul/5*500ul |
※ECL发光液是持久型,有效延迟淬灭时间。爱必信彩虹marker,经过与多种品牌对比验证,结果如图,看的见得优秀!
Absin特色产品线(全部现货):WB相关:ECL发光液、预染marker、预制胶;IHC相关:二抗试剂盒、组化笔;IP/CoIP试剂盒;激动剂/抑制剂;血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE;凋亡试剂盒;呼吸爆发试剂盒;ELISA试剂盒;重组蛋白;抗体: 二抗、标签抗体、对照抗体;定制服务(抗体/多肽/蛋白/标记/检测)...
爱必信(上海)生物科技有限公司 联系邮箱:info@absin.cn 公众平台:爱必信生物 | ![]() |
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