组织线粒体分离试剂盒

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产品描述：

产品名称：组织线粒体分离试剂盒

描述:

别名: Tissue Mitochondria Isolation Kit

外观: 溶液

使用方法: 1、清洗：取新鲜组织(不宜采用冻存的组织)，迅速称重 50～100mg，用预冷的 PBS 清洗1 次，冰上剪成 3mm2 大小的组织碎片。 2、匀浆裂解：加入 10 倍体积的预冷的Mitochondria Lysis buffer(如需获得细胞浆蛋白，应提前加入 PMSF，至 PMSF 浓度为 1×)，置于冰浴上 Dounce 匀浆器中，匀浆 10～20次。 不同组织或不同匀浆器所需的匀浆次数有所不同，需自行优化。 3、离心：4℃，600g 离心 5min 以去除细胞核、未破碎的细胞和大的膜碎片。注：如需获得纯度更高的线粒体，可以将此步骤的离心速度改为 2000g 离心 3min，其缺点是相同数量细胞的线粒体抽提得率会下降。 4、上清液转移至一干净离心管，4℃ 12000g 离心 10min。注：如需获得纯度更高的线粒体，可以将此步骤的离心速度改为6000g 离心 10min，其缺点是相同数量细胞的线粒体抽提得率会下降。 5、弃上清，沉淀为线粒体，如果希望获得去除线粒体的细胞浆蛋白，应在本步骤中收集上清，并且在收集上清时注意勿触及沉淀。随后把收集的上清 12000g，4℃离心 10min，上清即为去除线粒体的细胞浆蛋白。 6、保存：弃上清，用适当缓冲液悬浮沉淀。如果用于线粒体酶活性或功能的分析，线粒体沉淀应重悬于 Mitochondria Stock buffer；如果用于线粒体蛋白的分析，获得的细胞浆蛋白应保存于 1×Protein Stock buffer，即按细胞浆蛋白：Protein Stock buffer (5×)=1:4比例混合；如果用于双向电泳，应使用恰当的保存液。

储存/保存方法: -20℃，有效期12个月。组分C常温保存。

产品用途: 该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

注意事项: 1、试剂 (如 PMSF)对于不同实验不必全部使用，在实验条件成熟后可以不必使用。 2、 如果不是用于制备线粒体蛋白，Mitochondria Lysis buffer 不必加入 PMSF。如果用于制备线粒体蛋白样品，Mitochondria Lysis buffer 需添加 PMSF。PMSF 一定要在试剂加入到样品中前 1～2min 内加入，以免 PMSF 在水溶液中很快失效。 3、分离线粒体的所有步骤均需在冰上或 4℃进行，所用溶液需冰浴或 4℃预冷，全部操作时间尽量控制在 1h 以内。 4、通常在分离线粒体时前后两次离心速度选取 1000g 和 12000g，如果希望纯度更高，但对线粒体的得率要求不高，前后两次离心速度可用 2000g 和 6000g。 5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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