Lysis Buffer for WB/IP Assays (Without Enzyme Inhibitors)

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产品描述：

产品名称：Lysis Buffer for WB/IP Assays (Without Enzyme Inhibitors)

别名: 免疫印迹及免疫沉淀用裂解液（不含蛋白酶/磷酸酶抑制剂）

储存/保存方法: 2~8℃保存

描述:

Western及IP细胞裂解液，是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液。本细胞裂解液裂解的细胞，可以用于PAGE，Western，免疫沉淀和免疫共沉淀。使用本裂解液时，用户可以根据具体用途自行添加特定抑制剂或者不添加抑制剂。
Western及IP细胞裂解液的主要成分为Tris-HCl，NaCl，去垢剂。可以有效抑制蛋白的降解，并维持原有的蛋白间相互作用。
使用本裂解液获得的蛋白样品，如果用于酶活性检测或一些生物小分子的检测，需要测试标准品用本裂解液稀释后是否会显著影响标准曲线。如果本裂解液对于标准曲线无显著影响，则可以使用本裂解液。
用Western及IP细胞裂解液裂解得到的蛋白样品，可用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂等干扰物质，不能用Bradford法测蛋白浓度。 

使用方法: 1、对于培养细胞样品 （1）取适当量的裂解液，根据需要自行确定添加适当的抑制剂或不添加抑制剂。 （2）对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 100~200uL 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞 1~2sec 后，细胞就会被裂解。 （3）对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞加入 100~200uL裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成 5~10×105 细胞/管，然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。 （4）充分裂解后，10000~14000g 离心 3~5min，取上清，即可进行后续的 PAGE、Western、免疫沉淀、免疫共沉淀、酶或生物小分子检测等操作。 注：裂解液用量说明：通常 6 孔板每孔细胞加100uL 裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量至 150uL 或 200uL。 2、对于组织样品 （1）取适当量的裂解液，根据需要自行确定添加适当的抑制剂或不添加抑制剂。 （2）把组织剪切成细小的碎片。 （3）按照每 20mg 组织加入 100~200uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。) （4）用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。 （5）充分裂解后，10000~14000g 离心 3~5min，取上清，即可进行后续的 PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。 （6）如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈 vortex 使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

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