Lysis Buffer for WB/IP Assays

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产品描述：

产品名称：Lysis Buffer for WB/IP Assays

描述:

本免疫印迹及免疫沉淀用（WB/IP）裂解液（Lysis Buffer for WB/IP Assays）是在非变性环境内裂解细胞的一款裂解液，主要成分为 20mM Tris-HCl（pH 7.4），150mM NaCl，1% Triton X-100，以及焦磷酸钠，β-甘油磷酸，正钒酸钠，EDTA 和抑肽酶等多种抑制剂，可广谱且有效抑制蛋白降解，并且维持原先蛋白间相互作用。经本品裂解所得的蛋白样品，适用于 PAGE，蛋白免疫印迹（Western Blot），免疫沉淀（IP），免疫共沉淀，ELISA 等实验。经本品裂解收集的蛋白样品，可使用增强型 BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定总蛋白浓度。由于本品含有较高浓度的 Triton X-100 等干扰物质，不适合用 Bradford法来测定总蛋白浓度。

产品组分

别名: 免疫印迹及免疫沉淀用（WB/IP）裂解液；Western及IP细胞裂解液

储存/保存方法: 细胞裂解液A保存于2~8℃，B、C保存于-20℃。

外观: 溶液

使用方法: 试剂准备： 裂解液制备：临用前，取适量的 Western 及 IP 细胞裂解液，在其中分别加入 1%裂解液 B、C， 混匀后使用。 使用说明： 一、对于培养细胞样品： 1、对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没 有干扰，可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 100~200μL 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下， 使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞 1~2sec 后，细胞就会被裂解。 2、对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞加入 100~200μL 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。 如果细胞量较多，必需分装成 5~10×10⁵ 细胞/管，然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分，而少 量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。 3、充分裂解后，10000~14000g 离心 3~5min，取上清，即可进行后续的 PAGE、Western、免疫 沉淀和免疫共沉淀等操作。 注：裂解液用量说明：通常 6 孔板每孔细胞加入 100μL 裂解液已足够，但如果细胞密度非常高 可以适当加大裂解液的用量至 150μL 或 200μL。 二、对于组织样品： 1、把组织剪切成细小的碎片。 2、按照每 20mg 组织加入 100~200μL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加 更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。) 3、用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。 4、充分裂解后，10000~14000g 离心 3~5min，取上清，即可进行后续的 PAGE、Western、免疫 沉淀和免疫共沉淀等操作。 5、如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈 vortex 使样品 裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆 器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

注意事项: 1、裂解样品的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。 2、为了您的自身安全，使用试剂前，请做好防护，如穿实验服，带手套等。

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