NP-40裂解液
产品简介
1. NP-40裂解液(NP-40 Lysis Buffer)是一种比较温和的细胞组织裂解液。NP-40裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP和co-IP等。
2. NP-40裂解液的主要成分为 Tris,NaCl,NP-40以及leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白降解。
3. 用NP-40裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂, 不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度,可以用我们生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。
使用方法:
对于培养细胞样品:
1. 取适当量的 NP-40 裂解液混匀,在使用前数分钟内加入 PMSF,使 PMSF 的最终浓度为 1mM。
2. 对于贴壁细胞,去除培养液用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。加入适量裂解液。用枪
吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。轻轻的摇晃约 5-10 分钟。充分裂解后,10000-14000g
离心 10 分钟,取上清,即可进行后续操作。
裂解液用量说明: 用于不同规格标准培养板裂解液容量
板规格/表面积 试剂容量
100mm 500-1000μι
60mm 250-500μι
6-well plate 200-400μιper well
24-well plate 100-200μιper well
96-well plate 50-100μιper well
3. 对于悬浮细胞,离心收集细胞,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍.加入适量裂解液用枪吹
打把细胞吹散。用手指轻弹或旋涡震荡 5-10 分钟以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉
淀。如果细胞量较多,必需分装然后再裂解。充分裂解后,10000-14000g 离心 10 分钟,取上清,即
可进行后续操作。
对于组织样品:
1.手术切除的组织块迅速置于预冷的生理盐水中,漂洗数次,以清洁表面的血迹,将组织称量后切
成几个较小的组织块放入组织匀浆器中。
2. 取适当量的 NP-40 裂解液混匀,在使用前数分钟内加入 PMSF,使 PMSF 的最终浓度为 1mM。
3. 按组织净重(g):裂解液(ml)=1:10 的比例,加入相应体积的裂解液进行匀浆(如果裂解不充
分可以适当添加更多的裂解液 如果需要高浓度的蛋白样品 可以适当减少裂解液的用量) 。
4. 用玻璃匀浆器匀浆直至充分裂解。
5. 充分裂解后10000-14000g 离心 3- 5 分钟取上清即可进行后续作。
注:NP-40 裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基
因组 DNA 等的复合物。在不检测和基因组 DNA 结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上
清用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散该透明
胶状物,随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子,例如 NF-kappaB、p53 等时,
通常不必进行超声处理,就可以检测到这些转录因子。
注意事项:
1. 抽提蛋白的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。建议将样品分装成合适的量,然后冷冻干燥或直接
以液体状态置-20℃中保存,不要反复冻融。
2. 需自备 PMSF。建议在临用前数分钟内加入 PMSF
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