白细胞裂解液

白细胞裂解液

White Cell Lysis Solution 

产品及特点 本产品为即用型白细胞裂解溶液，可以用于裂解分离纯化好的血液白细胞，用于 DNA 提取、RNA 提取等后续实验。

运输及保存 常温运输和保存，有效期一年。

自备试剂 Tris 饱和酚、氯仿、乙酸钠溶液、乙醇、TE 缓冲液等

使用方法 下面以 DNA 提取为例：

1. 取新鲜抗凝血 5 mL，在 10 mL 或 15 mL 的塑料离心管中用红细胞裂解液裂解红细胞（红细胞裂解液有几种配方，用户需要根据所选产品的使用手册进行操作，这里不列出每种的详细骤），也可以直接 2500rpm 离心 5 分钟后取白细胞层到一新的 10 mL 或 15 mL 的塑料离心管中。

2. 在所得的白细胞沉淀中或所得白细胞层溶液中加自备的生理盐水使得白细胞的终体积为 2 mL。

3. 加 1 mL 的本产品，混匀后 55℃ 保温 3 小时，其间轻轻振摇数次。

4. 加入 3 mL 自备的 Tris 饱和酚，轻轻震摇 5 分钟，使得水相和酚相充分分开。

5. 3500 rpm 离心 15 分钟，上层水相含 DNA，中间白色层为蛋白质，下层为酚相。

6. 将非常粘稠的含 DNA 的上清液转移到一干净的 10 mL 或 15 mL 的塑料离心管中。

7. 再用 Tris 饱和酚重复上面的抽提步骤，直到离心后中间层没有白色的蛋白出现为止。

8. 在上清液中加入等体积的自备的氯仿，轻轻震摇 5 分钟，3500 rpm 离心 5 分钟，转移上清液到一干净的 10 mL 或 15 mL 的塑料离心管中。此步可以除去残留的酚。

9. 在上清液中加入 0.1 倍体积的自备的 3 M 乙酸钠溶液（pH 5.2）和 2倍体积的无水乙醇，轻柔颠倒混匀，将出现絮状的 DNA 沉淀。

10. 用移液枪头将 DNA 沉淀挑取出来，转移到 1.5 mL 的塑料离心管中，用 75%的乙醇浸泡 2 次。此操作可以去除 DNA 中残留的盐离子。

11. 转移 DNA 沉淀到一个 1.5 mL 的塑料离心管中，空气中放置 10 分钟左右待乙醇挥发后，加入 0.5 mL 自备的 TE 缓冲液溶解 DNA，4℃放置待用。