EXAKT硬组织切磨技术在龋齿切片观察中的应用

龋齿是人类口腔常见疾病，龋病的发生严重影响人们的身体健康，尤其是儿童[1-3]，因此全面分析龋病发生的成因并及早预防治疗具有非常重要的意义[4]。将龋齿制成石蜡切片进行组织形态学观察是龋齿研究中一种常用手段，牙齿本身硬度较高，制成石蜡切片过程中需要对其进行脱钙处理，这一过程往往会浪费数月的时间，以EXAKT硬组织切磨系统为代表的硬组织切磨技术则解决了这一问题。该技术无需脱钙，将不能用常规方法制备成组织切片的特有软硬组织标本制成组织切片，并保持组织本身原有的组织形态[5]。

a:未龋坏的正常牙齿切片染色结果(40倍);

b:浅龋牙齿切片染色结果(40倍);

c:中龋牙齿切片染色结果(40倍);

d:深龋牙齿切片染色结果(40倍)

图1 不同龋坏阶段的龋齿组织切片-甲苯胺蓝染色

选取了不同龋坏阶段的龋齿作为制片样本，分别为未发生龋坏的正常牙齿、浅龋牙齿、中龋牙齿和深龋牙齿。利用硬组织切片技术将各个龋齿制作成薄切片，经过甲苯胺蓝染色后在光学显微镜下观察可见龋坏在牙釉质和牙本质发展的程度。硬组织切片技术可在包埋块上连续切片，工艺精准且无需脱钙节省了大量时间。EXAKT硬组织切磨系统的切割带锯含有金刚石颗粒，磨片用的砂纸含有碳化硅颗粒，可以切割硬度较高及含有植入物的组织块，比如含有金属种植钉的骨组织、含有支架的血管肌肉组织等，切片厚度均一，划痕少稳定性高，组织结构形态保持完好，染色后颜色均匀，在光学显微镜下和电镜下均可观察，还可用于切割纤维桩等材料。硬组织切片目前开发的染色方法较多，常用的有甲苯胺蓝染色、苏木素-伊红染色、Van-Gieson染色、Ladewig染色、Giemsa染色等，通过颜色、位置、骨界面定量分析等可以观察牙结石、龋病的发生、种植体与骨组织的结合、新骨生成、血管炎症反应等。

硬组织切片技术应用广泛，但制作含有特殊材料种植体骨组织切片时仍有困难，比如氧化锆陶瓷种植体。氧化锆陶瓷硬度极高，如果种植体是结晶颗粒粘合而成，质地比较疏松，配套的砂纸可以将其打磨变薄，但相比其它种植体需打磨更长时间；如果种植体是整块结晶制成，则需借助特殊研磨料才能将其打磨变薄，耗费大量时间且容易破坏骨结合，影响结果分析。硬组织切片的免疫组化技术是另一个亟待解决的难关。免疫组织化学技术是根据免疫学的基本原理-抗原抗体反应来确定组织细胞内的抗原，对其进行定位、定性、定量的技术。

原有的包埋剂7200将组织块进行包埋后，组织细胞内的抗原信号因化学反应被破坏，无法进行抗原抗体反应，现在已有升级版的包埋剂9100可以解决这一问题，包埋剂9100不会破坏遮盖抗原信号，为后期的抗原抗体反应提供条件。切片在进行免疫组化反应之前需进行脱塑处理，使抗原抗体充分接触反应，但是现行的脱塑方法极易导致脱片，脱片后组织皱缩变形，原有的形态结构发生变化，植入物与组织极易分离，无法弥补。为解决这一问题，硬组织切片技术在积极改进脱塑技术以减少脱片概率，或者改良制片方法，使切片不用脱塑直接进行免疫组化反应。如果能克服这一难关，硬组织切片技术必将迈进一大步，在组织工程研究领域作出更大的贡献。

综上所述，EXAKT硬组织切磨技术无需脱钙，可以将不同龋坏程度的龋齿制成组织薄切片，片子厚度均一，经过抛光工艺划痕少稳定性高，经过染色后在光学显微镜下可以清晰的看到龋坏在牙釉质和牙本质中的发展程度，在龋坏观察等口腔组织工程研究领域有广泛的应用前景。

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