光谱流式客户应用分享—22色方案助力免疫治疗生物标记物研究

Cytek Biosciences

2020/09/17 11:58

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Cytek光谱流式技术的普及，将科研和临床领域的许多研究，都提升到了一个前所未有的新水平。前不久，来自百时美施贵宝（BMS）公司临床流式部门的研究者Tania Nevers, Doli Patel等人，发表了他们基于Cytek光谱流式开发的22色髓系来源抑制细胞（MDSCs）方案，在免疫治疗临床生物标记物研究中的应用。

Development of a 22-color Panel Measuring Myeloid Derived Suppressor Cells (MDSC) Subsets in Blood using Spectral Cytometer Aurora to Support a Clinical Biomarker Study

Tania Nevers, Doli Patel, Yongliang Sun and Michael Hedrick

Clinical Flow Cytometry, Bristol-Myers Squibb Co., 3551 Lawrenceville Rd

Princeton, NJ 08540

研究背景：

髓系来源的细胞，是一群高度多样化的细胞，在肿瘤进展中起着重要作用。许多研究证据证实，骨髓来源的抑制细胞（MDSCs）会参与肿瘤血管生成、肿瘤耐药、促进肿瘤转移、抑制免疫系统中各种细胞的功能等（图1）。因此，靶向MDSCs细胞可能为肿瘤治疗带来一个非常有吸引力的前景。为支持这一设想，研究者基于Cytek Aurora光谱流式，设计了一个人22色MDSCs方案，用来研究这一稀有细胞群的广泛表型，探索潜在的抗肿瘤治疗生物标志物。

图1-MDSCs与免疫系统中各种细胞相互作用

实验设计：

人全血（WB）收集在cyto chex试管中，并在采集后24小时使用；
裂解红细胞（RBC），用viability dye 染色去除死细胞后，用Fc封闭缓冲液及抗体，冰上孵育30min 进行封闭；
注意：检测活化标记时，使用活化的Vericells，或者经PMA和ionomycin 细胞激活预混液激活的PBMCs；
抗体稀释共测试8个梯度，从制造商推荐浓度的2倍稀释开始（在100ul染色缓冲液中）；
样本染色，并在Aurora光谱流式上样前，重悬于200ul 稳定液中；
确定合适的滴度后，进行完整方案的染色和FMO对照，以优化方案。

实验流程如下图2所示：

图2-Aurora上进行检测的实验流程

经过优化，研究最后确定了一个22色的MDSCs方案，方案中相关抗体的详细信息如下图3：

图3-BMS公司22色MDSCs研究方案详细信息

设门策略：

MDSCs方案，覆盖T细胞，B细胞，NK细胞，单核细胞，粒细胞，DC细胞，MDSCs，免疫检测点等相关的标记。跟随研究者的设门思路，可清晰了解如何通过手动设门，一步步圈出MDSCs及其他细胞亚群，并深度分析感兴趣的生物标记。（图4）

图4-人全血MDSCs深度表型分析设门策略示例

研究结论：

通过上述介绍，研究者证实了基于光谱流式开发的MDSCs检测是一个强大，且符合预期标准的方案。可用于检测单核细胞的MDSC、粒细胞MDSC的水平，典型/非典型/中间型单核细胞和树突状细胞亚群，及这些亚群细胞上的活化标记，以支持临床试验的研究需求。

研究者认为，Cytek光谱一管22色方案，即可对免疫系统中这些扮演着重要角色的细胞亚群和生物标记进行研究，并为临床开发新的免疫治疗方案提供非常有价值的信息，为研究者进一步了解MDSCs在肿瘤免疫抑制中的作用带来更为广泛的视野。

参考资料：

Tania Nevers, Doli Patel, Yongliang Sun and Michael Hedrick Clinical Flow Cytometry, Bristol-Myers Squibb Co., Development of a 22-color Panel Measuring Myeloid Derived Suppressor Cells (MDSC) Subsets in Blood using Spectral Cytometer Aurora to Support a Clinical Biomarker Study.