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探针标记专用 PCR 试剂盒操作步骤:
2019/12/25 16:55
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方案摘要：
产品配置单：
侵肺巴斯德菌PCR检测试剂盒供应商
型号： 50T
产地：
品牌： eBioscience
¥2499
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罗布罗布芽生菌PCR检测试剂盒
型号： 50T
产地：
品牌： PCRmax
¥2499
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利什曼原虫通用PCR检测试剂盒
型号： 50T
产地：
品牌： PCRmax
¥2499
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伪旋毛虫PCR检测试剂盒
型号： 50T
产地：
品牌： PCRmax
¥2499
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巴布亚旋毛虫PCR检测试剂盒
型号： 50T
产地：
品牌： PCRmax
¥2499
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方案详情：
探针标记专用 PCR Mix 0.5mL操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c．细胞悬液 离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2．将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。
3．可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇，室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
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公司名称： 上海莼试生物技术有限公司
公司地址： 上海嘉定区澄浏中路3404号 联系人： 王经理 邮编： 200000
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