霍乱弧菌核酸检测试剂盒（恒温荧光法）

以下是PCR检测试剂盒的订购信息：

产品规格：48T

产品运输：低温运输

产品保存：-20℃保存

产品有效期：一年

储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

运输：低温、避光，快递免费送货上门。

使用及效果：

PCR反应特点

(1) 特异性强

PCR反应的特异性决定因素为：

①引物与模板DNA特异正确的结合；

②碱基配对原则；

③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性；

④靶基因的特异性与保守性。

组成及试剂配制:

1、酶标板：一块（96孔）

2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。

3、 样品稀释液：1×20ml。

4、 检测稀释液A：1×10ml。

5、 检测稀释液B：1×10ml。

霍乱弧菌核酸检测试剂盒（恒温荧光法）其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。

(2) 灵敏度高

PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在细菌学中zui小检出率为3个细菌。

(3) 简便、快速

PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。

(4) 对标本的纯度要求低

不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。

97%100g25ml麦芽糖Transforming growth factor beta receptor type 3AR，98%97%100gSCD-1

96%25g100g麦芽糖Complement factor H-related protein 2AR，98%96%25gHSL

96%500g25g麦芽糖一水合物Vitamin K-dependent protein SAR，98%96%500gGK

96%100g500g麦芽糖一水合物neutrophil extracellular trapsCP96%100gLPL

1mol/L THF溶液25g1g木聚糖nitric oxide synthaseCP1mol/L THF溶液25gSCD-1

2.0 M 乙溶液500g25g木聚糖Ribonuclease 4CP2.0 M 乙溶液500gSTAT6

≥98%100g5g木聚糖Disabled Homolog 1AR，99%≥98%100gCXCL9

≥木聚糖β2GYG AbAR，99%≥98%25gMDC

98%500g5g甲壳胺hypoxia-inducible factor αAR，99%98%500gNLRP1

98%100g1g甲壳胺heme oxygenase98%98%100gNLRP2

霍乱弧菌核酸检测试剂盒（恒温荧光法）钼酸铵负染色液(3%)RECQL-5特纯，98%97%25gIL-10

98%5g25g钨酸负染色液(2%)apoprotein A特纯，98%98%5gIL-11

98%100g5g钨酸负染色液(3%)Lipoprotein A特纯，99%98%100gIL-12

98%25g1g钨酸负染色液(5%)Epidermal regulator特纯，99%98%25gIL-12;P70

98%500g25g改良苯酚品红染色液DERL1特纯，99%98%500gIL-12;P40

98%1g5g固绿染色液(0.1%)Serum transferrin receptor特纯，99%98%1gIL-13

92%25g10g固绿染色液(0.5%)protocadherin 1特纯，99%92%25gIL-15

92%5g50g基底膜六胺银染色液Estrone特纯，99%92%5gIL-17

97%100g25g胆紫水溶液(0.5%)Granule protein precursor特纯，98%97%100gIL-17A

97%25g5g胆紫水溶液(0.1%)NR2A特纯，98%97%25gIL-17F
PCR反应五要素： 

霍乱弧菌核酸检测试剂盒（恒温荧光法）参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物： 引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。

设计引物应遵循以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。

③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3’端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。

⑤引物3’端的碱基，特别是zui末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。

⑥引物中有或能加上合适的酶切位点，被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点，这对酶切分析或分子克隆很有好处。

⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。