赛默飞高效液相色谱仪HPLC的使用说明

1. 开机（软件）：双击“控制器”，点击“启动仪器控制”，待仪器显示“运行空闲”，双击“变色龙软件7”进入色谱工作站，工作站左上角“模块状态”显示“Connected”，表示连接成功。

2. 排气：打开输液泵的盖子，找到输液泵的排气阀，拧松排气阀（逆时针）拧松一圈半到两圈，将A流动比例设为100%，泵流速设为3ml/min（具体自己定），点击冲洗按钮，在排气阀打开的情况下忽略警告执行。重复上述操作，分别进行b、c、d流路的排气操作，一般排气60s。在此期间观察各流路软管内是否有气泡，确保气泡完全排除。结束后再次点击冲洗按钮，停止排气，拧紧排气阀。（此处要注意，在拧紧排气阀之前，一定要将流速降低，确保压力在正常范围小于150bar）

在加样前，选择自动进样器选项，依次进行灌注注射器、清洗缓冲环、外部清洗针。

3 创建仪器方法：点击创建 → 选择仪器方法 → 设定运行时间（） → 取消选择所有通道 → 点击下一步 → 编写各瓶溶剂名称 → 下一步 → 删除平衡阶段 → 编写仪器方法（每一个时间不代表区间，仅代表着该时间点的流速以及各相比例） → 下一步 → 采用默认的进样针参数 → 下一步 → 采用默认的进样模式 → 下一步 → 进行温度控制（具体自己设，本实验条件为30℃） → 下一步 → 设置波长信号 → 直至完成，在方法界面里，左上角保存改仪器方法。

4. 平衡基线：流速设为1ml/min，有机相：流动相比例设置为（自己设），点击马达，启动输液泵；点击UV选项，设置波长，点击紫外灯，点灯成功会有打钩。  有机相与流动相比例不断进行调整，直到进样需要的条件，本实验从100%有机相到20%有机相。

5 处理方法的创建：选择创建菜单下的处理方法，选择基本定量 → 下一步 → 命名处理方法并保存 → 打开 → 完成。  采用仪器的默认数据处理方法。

6 样品检测：序列创建：创建菜单 → 序列 → 编写相关信息 → 下一步 → 浏览 → 选择建好的仪器方法和处理方法 → 下一步直至完成，命名序列并完成。待到基线平衡后，在数据点击开始运行。可以在仪器操作界面看到当前情况。（此处要注意队列中前面的队列已完成）

7 清洗柱子（清洗色谱仪先水洗，后醇洗，柱子需要保存在100%有机相中，分为快洗和慢洗，此处描写快洗方法，需要时刻注意压力值）：快洗：先将调到100%醇:0%水 → 0%醇:100%水 → 100%醇0%水进行柱子保存。

（打开UV界面的紫外灯，再打开位于界面最上方的基线监视）

慢洗：创建仪器方法同上，运行时间尽可能大，在编写仪器方法时，可尝试如下编写。（0min时各相比例应与HPLC工作时的比例相同；需确保各相试剂充足；具体流速需根据A:B=1：1时进行调整，此比例下柱压最大）