前言 / PROTAC表征难题重要靶点和候选药物的亲和力筛选非常具有挑战性。当您的亲和力筛选项目涉及到PROTAC二元和三元复合物，片段化合物库及固有无序蛋白时，需要进行样品固定的SPR技术和样品消耗量大的ITC技术的检测难度会大大增加，而这些应用则是Dianthus所擅长的。光谱位移技术（Spectral Shift）光谱位移技术是通过荧光发射光谱的蓝移或红移来检测分子间的结合。Dianthus可以为您解决哪些表征难题？Dianthus是一个基于微孔板的亲和力筛选平台，使您能够克服其他生物物理方法带来的挑战。避免这些常见的障碍，让您的PROTAC项目继续推进。1通过固定二元复合物的方法来进一步研究三元复合物，二元复合物的稳定性会受到影响。答Dianthus直接在溶液内进行检测，结合平衡状态可控。因此，在表征三元结合的过程中二元复合物可保持稳定。2在再生过程中，共价分析物几乎不可能从传感器芯片上完全去除。答在单独的孔中直接在溶液中检测分子间相互作用，使得您的亲和力分析更简单、无压力且更经济实惠。3其他检测方法难以测量warheads这样的小分子的亲和力。答光谱位移技术不依赖于分子量，因此您可以使用 Dianthus 对片段化合物进行初步筛选，还可以在后续亲和力优化中筛选PROTAC 候选物。4 靶点和配体的样品量有限答使用Dianthus进行亲和力筛选无需耗费时间进行大量方法开发，检测时的样品消耗量很低，将极大节省所有的样品量。选择Dianthus表征PROTAC候选物Dianthus 是基于微孔板且无微流体系的亲和力筛选平台，您可通过 gRPC 框架轻松将其集成到任何自动化设置中。无需定期维护，您的项目不会因停机而延迟。Dianthus 随时准备好为您效劳 —— 7天24小时不间断。点击图片下载PROTAC电子书，了解更多技术难题

稳定性表征和结合亲和力检测是一个复杂的过程，特别是在处理具有挑战性的目标，考虑因素会变得更加复杂。通常情况下，我们必须克服高样本消耗和复杂的实验设置等障碍，才能获得有效进展。欢迎您参加本次在线研讨会，连线加拿大权威专家和研究人员，与他们共同探讨，获得更简捷，更丰富的生物分子表征解决方案。参与讲座，您可了解以下内容1来自麦吉尔大学的Joaquin Ortega博士和Dominic Arpin博士将介绍利用冷冻电子显微镜和微量热泳动技术鉴定核糖体组装过程中的关键步骤2来自曼尼托巴大学Jörg Stefefeld博士，介绍形成网蛋白-1细丝的结构生物物理学3Repare Therapeutics公司的Yann Mathieu博士介绍通过生物物理学方法实现不可成药靶点的成药案例4NanoTemper专家Cyril Castel为您介绍Monolith X-分子互作领域全新领航者5NanoTemper的Bridget Milorey博士将介绍如何在简化的生物制品选择过程中并行使用多种生物物理技术专家介绍Dr. Joaqin Ortega麦吉尔大学教授Joaquin Ortega现为麦吉尔大学解剖与细胞生物学系教授。他于2003年7月加入麦克马斯特大学生物化学和生物医学科学系健康科学系。2017年，他将实验室搬到了麦吉尔大学。如今，除了与他的研究团队合作外，他还是电子显微镜研究设施(FEMR)的研究主任。Dominic Arpin麦吉尔大学博士Dominic Arpin目前是麦吉尔大学Joaquin Ortega博士实验室的博士生。他的研究包括使用冷冻电子显微镜和微量热泳动技术研究细菌核糖体组装的关键步骤。在加入Ortega实验室之前，他在蒙特利尔大学的Steve Bourgault博士的指导下完成了硕士学位，并在那里从事疫苗开发工作。Dr. Jörg Stetefeld加拿大曼尼托巴大学一级研究主席Stetefeld博士就任加拿大曼尼托巴大学结构生物学和生物物理学一级研究主席，研究在生物学和人类疾病中发挥重要作用的受体-配体相互作用的结构和功能。为此，他将传统的结构生物学方法与深入的生物物理表征相结合。目标是获得配体结合在结构上如何与受体激活耦合的详细机制，并利用这些信息来操纵信号传导，从而产生治疗方法。Stetefeld实验室专注于“依赖性受体”及其在靶向细胞凋亡中的作用。此外，他们还研究了CCN家族成员的结构-性质关系。Dr. Yann MathieuRepareTherapeutics 高级科学家Yann Mathieu博士是Repare Therapeutics 酶学小组的高级科学家。他曾是一名生物化学家，在法国洛林大学获得真菌细胞内解毒酶的博士学位，并在马赛继续攻读博士后。在加入Repare之前，他在温哥华不列颠哥伦比亚大学Harry Brumer博士的实验室担任生物化学研究助理。Yann目前的研究重点是合成致命DNA修复目标，他目前在Repare通过整合生化和生物物理方法进行研究。Cyril CastelNanoTemper客户经理Cyril在图卢兹的Paul Sabatier大学获得了分析化学和仪器仪表硕士学位。在学习期间，他对生物培养基中核苷酸的LC-MS分析产生了兴趣。随后，他加入Waters公司，致力于液相色谱和质谱分析。自2017年以来，他入职NanoTemper公司，就任在法国、西班牙和加拿大的客户经理，并致力于为科学家提供生物分子表征的解决方案。Dr. Bridget MiloreyNanoTemper应用专家Bridge现任NanoTemper公司应用专家。她曾在费城的德雷塞尔大学获得生物物理化学博士学位。博士研究期间，她在德国法兰克福的歌德大学参与核磁共振相关工作，包括将光谱测量与热力学建模相结合，以确定蛋白质和寡肽的结构整合。参与直播直播时间2023.9.19 (周二）22:00-24:001.扫码报名，在线注册预约。2.报名邮箱会在9月19日收到直播提醒。（您可于直播后再次扫码，随时查看回放）3. 推荐在电脑端观看期待与您在线交流，共同探索前沿科技！来自NanoTemper的明星产品蛋白稳定性分析仪PR Panta 拥有4种强大的检测技术(nanoDSF、Backreflection、DLS和SLS)，仅需微量样品即可提供实验必需的高质量数据。连线海外专家，进一步了解Panta提供的热稳定性检测如何支持您完成候选生物制品的可开发性评估。蛋白稳定性分析仪 PR Panta 

您是否正在研究IDPs(固有无序蛋白)， GPCRs(G蛋白偶联受体)或其他棘手的药物靶点？GPCRs靶点结构不稳定、低表达，IDPs具有无序性且缺乏小分子结合口袋的特性，其亲和力的检测通常是有挑战性的。本次直播，您将了解到CALIXAR和Curve Therapeutics的科学家们如何利用NanoTemper的光谱位移技术(Spectral Shift)解决相互作用检测难题。参与讲座，您可了解以下内容1Curve Therapeutics案例分享：验证针对有挑战性的转录因子环肽hits2Eurofins-CALIXAR案例分享：合成胆固醇衍生物并验证其用于优化功能性 GPCR纯化的用途3搭载了光谱位移技术的Monolith X 和Dianthus如何帮助研究人员加速亲和力检测4NanoTemper案例分享：通过光谱位移技术表征 Myc/Max 复合物专家介绍Dr. Reece GardnerCurve Therapeutics Reece Gardner 是生物物理学团队负责人，专注于使用 Spectral Shift、TRIC 和 SPR 来验证 Curve 新型筛选平台的hits结果。他具有南安普顿大学化学生物学博士学位，研究内容为开发缺氧诱导因子环肽抑制剂。他还拥有苏塞克斯大学化学硕士学位。Dr. Alexis MorenoEurofins-CALIXAREurofins-CALIXAR 是一家专业生产和纯化天然膜蛋白的公司。拥有生物化学博士学位的Alexis Moreno是膜蛋白方面的专家，任职于Eurofins-CALIXAR 的研发部门。他负责开发在功能状态下溶解和稳定膜靶点的新分子，为GPCRs 等具有挑战性的靶点研究提供新工具。Dr. Andreas LangerNanoTemper首席科学家Andreas Langer 是生物物理学专家，拥有 10 多年的分子相互作用研究经验。他获得了慕尼黑工业大学的博士学位，研究围绕电切换生物表面及其在蛋白质分析中的应用。Andreas 目前是NanoTemper 的首席科学家，专注于增强现有产品和开发新技术。参与直播直播时间2023.9.21 (周四）23:00-24:001.扫码报名，在线注册预约。2.报名邮箱会在9月21日收到直播提醒。（也可于直播后再次扫码，随时查看回放）3. 推荐在电脑端观看期待与您在线交流，共同探索前沿科技！Monolith X同时搭载了光谱位移和MST技术，几乎无需耗费时间进行方法开发即可为您提供高质量的数据，是您进行亲和力检测的最佳解决方案。Monolith X 分子互作仪基于光谱位移技术(Spectral Shift)的Dianthus系列高通量亲和力筛选平台是基于微孔板、无微流控系统的亲和力筛选平台。检测在溶液中进行且不依赖于分子量变化，避免固定对样品的影响，无需担心分子量过低而漏掉有价值的Hits，是高难度筛选项目取得成功的绝佳平台。 Dianthus高通量筛选平台咨询电话：010-8446 2100NanoTemper扫码关注我们

Webinar 参与直播 领取福利Dianthus针对生物医药等行业，在研发管线过程中可能会包含一些PROTAC候选药物，大多数候选药物靶向的是不可成药的癌症靶点，这些靶点通常涉及信号转导、转录调控等。但使用传统生物物理方法对这些靶点进行二元和三元复杂相互作用表征存在较大的挑战，增加了候选药物开发的难度，有可能使您的公司在竞争中处于劣势，那么如何解决这个问题呢？欢迎您参与NanoTemper举办的专题直播，相信通过本期讲座，您可以找到药物研发道路上新的捷径和方法。报名方式及详情，请参见下方海报。期待您的参与咨询电话：010-8446 2100

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MST技术培训开课啦！分子互作是生命体进行物质和能量传递的基础，分子互作技术让科学家们能够更加清晰的了解其中的奥秘。NanoTemper公司的Monolith产品基于微量热泳动（MicroScale Thermophoresis, MST）和光谱位移（Spectral Shift, SpS）技术精确定量表征分子间亲和力Kd，无需固定、溶液内直接检测分子间相互作用度，是用极少量样品在溶液内测定结合亲和力的唯一方法，可以表征几乎所有类型的亲和力检测难题，是您进行亲和力检测的最佳解决方案。新学期开学之际，NanoTemper的技术专家们将为您带来Monolith的产品培训，欢迎大家围观学习。本次培训将介绍Monolith检测分子互作原理，文献解读，实验流程优化，以及数据分析。本期讲座适用于Monolith NT.115和Monolith的用户以及对此感兴趣的客户。通过此次培训，您可收获：了解高分文章进行互作的实验思路掌握挑战性互作难题的解决方法系统性学习技术原理、实验流程和优化要点在线提问直接获得实验指导您只需参加这一次培训，就能变身成实验室的Monolith分子互作技术专家！直播详情主题：Monolith分子互作技术应用培训时间：2023年9月14日 (周四) 14:00-16:00讲师：龙韵馨&刘贝贝 （技术专家）报名方式：扫码报名-预约直播！01乐扣水杯（直播间邀请榜-前2名专属奖励）02小熊玩偶（直播间多轮抽奖）03小米充电宝（答题赢奖）本期直播间设置了多轮互动环节，我们将送出丰富礼品，欢迎您参加培训&积极转发活动！9月14日下午14点，我们在直播间等你哦！咨询电话：010-8446 2100

稳定性特性是早期开发阶段评估蛋白药物的最重要质量属性之一。在所有稳定性特性中，热稳定性筛选是快速可靠地评估候选生物制品稳定性的最常见方法之一。参与本次直播一同探究如何使用热稳定性进行生物制品候选分子可开发性评估。讲座概要1为什么使用热稳定性筛选生物制品2有哪些方法可用于评估热稳定性以及各自的优缺点3热稳定性检测如何提供高分辨率数据以揭示候选分子的关键属性专家介绍Dr. Stefanie KallNanoTemper产品专家Stefanie Kall现任NanoTemper PR系列产品专家。她在芝加哥伊利诺伊大学获得了生物化学博士学位，研究通过X-ray表征激酶抑制剂等相关工作。参与直播1.扫码报名，注册预约。2.报名邮箱会在8月31日收到直播地址&提醒。*也可于直播后再次扫码，随时查看回放，推荐您在电脑端观看讲座直播时间2023.8.31 (周四) 23:00-23:30期待与您在线交流，共同探索前沿科技！来自NanoTemper的明星产品蛋白稳定性分析仪PR Panta拥有4种强大的检测技术（nanoDSF、Backreflection、DLS和SLS），仅需微量样品即可提供实验必需的高质量数据。连线海外专家，进一步了解Panta提供的热稳定性检测如何支持您完成候选生物制品的可开发性评估。蛋白稳定性分析仪PR Panta (点击仪器，查看更多信息)

从应用方向上看，科研/生物医药领域的研究人员借助PR系列蛋白稳定性分析仪的多维度组合模块和功能，可实时同步评估蛋白热稳定性，胶体稳定性，聚集体与粒径等信息，为生物制品、结构生物学、蛋白表征以及Thermal Shift Assay(TSA)等研究提供强大助力，PR提供的组合方法及四种技术模块早已成为CNS必备的高分神器，也是您的理想之选!  👉点击此处，查看详细文献列表👈选择PR获取实验所需的多维度参数信息，您将看到其他技术所不能提供的稳定性数据。选择PR让您获得更可靠的、高分辨率的蛋白质稳定性数据，检测出不易被发现的稳定性行为，让您对检测结果充满信心！

8月2-3日，NanoTemper 2023 第一场线下MST培训会于北京发展大厦顺利举办。此次会议我们特意邀请到了NanoTemper德国总部的应用技术专家来进行经验分享和技术答疑。来自全国各地知名高校的老师共聚一堂，就MST技术进行高阶培训和实验经验交流。除了理论培训，我们还在会后组织了上机测样，老师们在实验室进行了DEMO测试，直到晚上7点才依依不舍地离开我们的实验室。高阶培训首先是来自NanoTemper德国总部的应用技术专家张平博士给大家分享了MST实验优化技巧、竞争结合实验、三元结合实验等内容，并进行相关技术答疑。老师们都表示受益匪浅，很多技术问题都得到了解答。NanoTemper的应用专家刘贝贝结合DEMO案例分享了裂解液实验的细节。应用专家张玺就实验重复性的问题进行了技术讲解和案例分享。上机测样下午老师们来到NanoTemper北京实验室进行参观，应用专家张玺和应用科学家何宁宇博士给大家进行了光谱位移技术上机演示，现场的老师们皆对NanoTemper的革新技术——光谱位移的操作简单、检测速度快和数据质量高的优点表达赞许。

7月23日，第二十次中国暨国际生物物理大会在湖南省长沙市圣爵菲斯大酒店圆满落幕。会议邀请了8位大会报告人，设立了36个专题学术分会场，在为期五天的会议里共计有279位来自全国各大高校和科研院所专家分享了精彩的专题报告。现场回顾大会设有4个主题论坛，内容涵盖女科学家科研成果交流、科研人员创新创业、青年学者生涯规划和期刊写作，为参会代表搭建了多维度交流平台，也为各阶段科技工作者提供了沟通合作机会。报告间隙，许多老师、同学们来到NanoTemper展位与我们进行技术交流。我们的技术专家在现场热心地为客户讲解技术原理及各类应用案例。老师和同学们都纷纷留下联系方式，表示想要更进一步交流实验技术问题。此次会议提供了客户与NanoTemper之间面对面沟通的平台，进一步加强了我们与客户之间的交流。最后，由衷地感谢每一位前来交流的老师和同学，希望今后NanoTemper能够在生命科学领域助力更多学者发表高水平文章。NanoTemper期待与您下一次再会！关于我们NanoTemper是全球领先的科学仪器制造商，2008年成立于德国慕尼黑，历经十余载发展，在全球13个国家设立分支机构。 NanoTemper公司作为生命科学领域的创新企业，一直致力于为药物筛选提供靶蛋白质量评估、高通量亲和力筛选等便捷的生物物理工具。卓越的产品和优质的服务使NanoTemper成为全球成千上万的制药公司、学术研究机构及科技公司的首选合作伙伴。

MicroScale Thermophoresis，MSTMST（MicroScale Thermophoresis，微量热泳动），是指分子在温度梯度场中定向移动的一种现象，可以作为一种定量分析生物分子间相互作用的有效手段。MST 测试时，利用红外激光建立微观温度梯度场，对样品中一个分子进行荧光标记，通过信号追踪来探测和量化分子在微观温度梯度场中的定向移动。MST有效地结合了荧光检测的精准性与热泳动的灵活性及灵敏度，高效、可信地检测分子间相互作用。NanoTemper 线下MST技术培训会为了能够与新老客户更好地分享MST技术应用，NanoTemper将于2023年8月2日-3日在北京举办为期两天的MST 技术培训会。此次培训会我们特意邀请到了总部德国的应用技术科学家张平博士来做经验分享和技术交流。在此我们诚邀您参会，并与同行交流实验经验。培训亮点_微量热泳动技术原理_实验优化技巧_高阶实验：三元结合，裂解液检测_数据分析Q&A培训期间我们将为学员免费提供实验所需耗材、培训证书、午餐及晚宴，另外现场还有惊喜哦~培训详情时间2023年8月2日-3日地点北京发展大厦202室费用5,298元/天规模10 - 15人培训专家介绍张平 博士NanoTemper 应用科学家张平博士，常驻NanoTemper 慕尼黑总部，为德国北部的客户提供技术支持。在加入 NanoTemper 之前，她的科研专注于使用包括MST在内的生物物理方法来表征蛋白质相互作用和稳定性，是MST技术的资深用户。报名方式请发送邮件至support@nanotemper.cn，将有技术人员联系您。

随着NanoTemper中国地区业务的快速发展，为了更好地服务客户，也给员工创造更好的工作环境，我们上海办公室喜迁新址，并配备了独立的实验室。办公室新址新办公室位于上海人民广场附近的中区广场16层，毗邻上海市博物馆及大剧院，区位优势突出。乔迁仪式上午9点50分，仪式准时开始。NanoTemper中国区总经理李卓博士发表致辞，在祝贺上海办公室乔迁新址及感谢到场伙伴们的同时，也表达了公司对于快速增长的华东市场及不断壮大的上海分公司的美好展望，中国团队未来也一定可以更好地贯彻NanoTemper“创造一个任何疾病都可以治愈的世界”的公司愿景。9点58分，一声清脆的香槟声，拉开了此次乔迁仪式的序幕。在场的NTC员工以及NanoTemper合作伙伴们共同举杯欢庆这一重要时刻。乔迁仪式的圆满举行，标志着NanoTemper的发展翻开了新的篇章、迈上了新的台阶，是NanoTemper上海分公司扬帆起航的新平台。此次搬迁新址，公司升级到更新更好的办公环境的同时，配备的独立实验室为广大客户提供了一个更加专业的技术交流平台，方便客户进行参观、学习，也体现了公司对以上海为中心的重点市场的重视，未来将持续为客户提供更加优质的服务。关于我们2008年成立于德国慕尼黑，历经15年发展，NanoTemper已经成为全球领先的科学仪器制造商，在全球13个国家设立分支机构。NanoTemper公司作为生命科学领域的创新企业，一直致力于为药物筛选提供靶蛋白质量评估、高通量亲和力筛选等便捷的生物物理工具。卓越的产品和优质的服务使NanoTemper成为全球成千上万的制药公司、学术研究机构及科技公司的首选合作伙伴。最后再次感谢大家在百忙之中莅临NanoTemper China上海办公室的乔迁仪式。祝福NanoTemper越来越好，越做越强！

从2008到2023年，NanoTemper承蒙海内外广大客户的认可与携手，步履不停创新不断，不知不觉间已累积15年丰厚的成就。这期间，我们始终坚守初心，砥砺追梦，感恩来自国内外的客户朋友们与我们·一起共创 “一个任何疾病都可以被治愈的世界！”NanoTemper的两位创始人Stefan Duhr 博士和 Philipp Baaske 博士有感而发：“公司成立15年是一个非常重要的里程碑，我们的发展离不开广大用户的鼎力支持，感谢那些在生命科学行业里我们所有的客户朋友们，是你们选择了NanoTemper, 才让这个值得纪念的日子梦想成真！请与我们一起同乐，一起庆祝吧！“华灯初上，Lets’ Party !                                        作为NanoTemper总公司15周年全球庆典其中的一个环节，中国公司全体成员来到风景宜人，夏日避暑胜地的海滨城市-秦皇岛，共同庆祝这一重要时刻。下面让我们一同感受下这份喜悦，看看NanoTemper 中国团队的小伙伴们带来的庆祝活动的精彩瞬间！趣味入场仪式小编点评：入场后，小伙伴们纷纷大显身手，在仪式感满满的画布上描绘出心中自己最[完美]的样子(●’◡’●)随着晚宴的正式开始,NanoTemper中国区总经理李卓博士祝贺我们走过的15年的风雨征程，感恩广大客户对我们的支持与厚爱，感谢志同道合的所有同仁对NanoTemper在成长路上做出的贡献，同时也真切表达了对未来，对下一个15年的到来寄托更加美好的期待与信心，卓尔不凡，共创未来！Happy 15th year anniversary!同时，远在美国的Mark Capriani 先生( Global sales VP) 特别连线送上祝福，跨过时差经纬度的阻碍，与大家举杯共庆这个美妙且充满欢乐的夜晚。意外带着惊喜！雨后忽现彩虹助兴，在这个特别的傍晚，美好如期而至！NanoTemper的15周年庆典随即以彩虹为起点，再次向未来启航！小编点评：小编上一次遇见彩虹还是在上一次，投去十分羡慕的目光。NanoTemper 寄语NanoTemper 的团队专业且具有创造力。始终坚持力求卓越的工作理念，秉承客户至上的服务宗旨，帮助客户以最高效、最准确的方式取得研究成果。15年间若是没有来自全球客户、经销商、合作伙伴朋友们源源不断的支持，NanoTemper不可能一步步成长，我们始终心怀感激与热爱。期待与您一起，共同见证NanoTemper下一个15周年！ 🚀期待您与我们携手，创造一个任何疾病都可以被治愈的世界！

1什么是生物疗法？生物疗法，是一种利用人体免疫系统的癌症治疗方法。如果从操作模式的角度来区分，分为细胞治疗和非细胞治疗（包括抗体、多肽或蛋白质疫苗、基因疫苗、体内基因治疗等等）。其中，目前应用最多的就是抗体靶向治疗。单克隆抗体(mAb)自从1986年首次获得FDA批准以来作为一种治疗药物已有30多年的历史，进一步开发和优化更好的单抗生物疗法也在继续上升。基于单抗的疗法在治疗和预防许多疾病，包括癌症和自身免疫性疾病方面越来越受欢迎。在基于单抗的治疗药物的“质量源于设计”开发理念中，需要检测蛋白去折叠或变性的可能性即表征蛋白稳定性以确保整个开发和生产过程中蛋白结构和功能保持不变。抗体在成为治疗药物的过程中会受到极热、极冷、光照、试剂浓度和许多其他因素的不利影响。因此，稳定性表征分析是至关重要的，可以帮助研究人员开发和确定每种治疗药物最合适的配方和储存条件。实验指南来啦！NanoTemper 推 荐本期，我们将介绍用于检测生物治疗药物稳定性的各种技术，阐明单克隆抗体配方的来龙去脉，介绍新药临床试验申请(IND)和新药上市申请（NDA）的典型时间线，并深入研究存储条件如何影响单抗稳定性。如果您有兴趣了解更多关于生物治疗药物特性或存储和配方研究细节，请继续阅读。扫码下载本书，您将深入浅出地了解到：1. 检测蛋白质构象和胶体稳定性的常用方法有哪些？2. 制剂开发的流程 & 如何开发具有稳定性的抗体制剂？3. 抗体IND和NDA申报流程

NanoTemper 2023 蛋白稳定性专题研讨会·苏州站于6月28日下午在苏州金鸡湖凯宾斯基大酒店成功举办。此次会议由NanoTemper 诺坦普中国子公司主办，守本科学仪器（苏州）有限公司、上海昊扩科技发展有限公司共同协办。此次会议邀请到了来自湖北省药品监督检验研究院、上海探实生物科技有限公司、苏州康宁杰瑞科技有限公司的3位业内专家，以及来自全国各地的药企代表共聚一堂，就蛋白稳定性分析的议题展开热烈讨论。GM致辞会议开场由NanoTemper中国区总经理李卓博士致辞。李卓博士对与会嘉宾的到来表示热烈欢迎，同时介绍了NanoTemper的企业愿景和使命后，表达了对这次会议能促进蛋白质量评价研究的希望，也对出席本次活动的各位演讲嘉宾和参会代表表示最衷心的感谢，最后预祝本次会议成功举办。主题演讲首先是来自上海探实生物的黄懿博士分享了题为“蛋白药物的高通量制剂快速筛选与应用”的报告。演讲主要从蛋白药物CMC成药性分析策略、预制剂筛选的重要性及意义以及快速制剂筛选技术的开发及应用三个维度展开。其中黄毅博士的演讲中提到了Panta的高通量以及准确的数据质量带来的对于制剂筛选的效率提升。来自湖北省药品监督检验研究院的王文晞博士进行了题为“现代分析技术在血液制品质量评价中的应用”的演讲。血液制品是以人血浆为起始原料，经过分离纯化、病毒灭活后制得的治疗类生物制品。在探索性研究中，中心采用了NanoTemper的Panta蛋白质稳定性分析仪，对两类人凝血因子类产品的内在质量进行考察，探究不同企业在处方工艺上差异对产品有效性的影响。王文晞博士充分肯定了Panta的多参数稳定性分析所带来的好处，可以从多角度去评估生物药品的稳定性，具有非常重要的意义。NanoTemper应用专家张玺在进行了题为“多参数蛋白稳定性分析平台PR在制剂筛选中的应用”之后，在现场进行了Panta上机操作及跑样演示。现场的参会代表皆对Panta的操作简单、检测速度快和数据质量高的优点表达赞许。短暂的茶歇过后，来自苏州康宁杰瑞的制剂研发高级经理孟凡昱老师通过Practical Considerations in High Concentration Formulation Development （高浓度制剂开发的实际考虑因素）的主题报告分享了开发高浓度制剂和商业用途药品的实际考虑和策略。同时也在现场分享了她使用NanoTemper多参数蛋白稳定性分析仪的使用心得，孟老师对于Panta在胶体稳定性上的稳定表现给予了肯定，热稳定性检测的高质量数据可以帮助他们快速进行筛选。但是在重视热稳定的同时，孟老师还强调了自相互作用系数KD的检测意义，而这一点正是Panta的DLS模块的优势，不仅仅具有极高的精确度，还具有极高的稳定性，能很好地检测不同浓度生物制剂的稳定性，多参数模块带来的数据能够更加全面的评估生物制品的稳定性特质。会议最后，来自NanoTemper的应用科学家何宁宇博士分享了NanoTemper的光谱位移技术及微量热泳动技术，助力我们的客户更加高效便捷的进行药物的研发工作。最后，NanoTemper再次感谢各位嘉宾的参与和支持，同时祝贺此次专题研讨会的圆满落幕。我们今后还会提供更多这样的学术交流机会，与领域内的科研工作者探讨交流实验经验，获得更多的意见与反馈，为您提供最优质的服务。关于我们NanoTemper是全球领先的科学仪器制造商，2008年成立于德国慕尼黑，历经十余载发展，在全球13个国家设立分支机构。 NanoTemper公司作为生命科学领域的创新企业，一直致力于为药物筛选提供靶蛋白质量评估、高通量亲和力筛选等便捷的生物物理工具。使用开创性的专利技术，推出了Monolith系列分子互作检测仪、Prometheus系列蛋白稳定性分析仪、Dianthus系列高通量亲和力筛选平台等，从根本上大大缩短蛋白表征的时间和样品消耗。卓越的产品和优质的服务使NanoTemper成为全球成千上万的制药公司、学术研究机构及科技公司的首选合作伙伴。

生物素化靶点标记试剂盒Biotinylated Target Labeling Kit 大容量生物素化靶点标记试剂盒Large Volume Biotinylated Target Labeling Kit

前言人类基因组中仅有1%是负责蛋白质编码的基因，其中疾病相关的蛋白大约有 3000个，只有不到700种被目前获批的药物作为靶点，绝大多数疾病相关的蛋白被认为是不可靶向的。针对疾病相关的非编码RNA以及不可成药的蛋白靶点，使用小分子靶向RNA的结构是治疗相关疾病的一种策略。但是小分子的结合并不一定能产生生物活性，有些小分子可能结合在RNA的非功能位点，或者小分子的结合强度不足以影响RNA的生物功能。高分文献解读2023年5月24日，Scripps研究所的Matthew D. Disney教授及其合作者在Nature杂志发表了题为“Programming inactive RNA-binding small molecules into bioactive degraders”的研究论文，利用核糖核酸酶靶向嵌合体技术将非活性小分子重编程为靶向RNA降解剂，成功降解miR-155和癌症靶标MYC、JUN的RNA。https://doi.org/10.1038/s41586-023-06091-8IF: 69.504 Q1研究人员基于二维组合筛选进行RNA和小分子高通量分子间相互作用检测，发现了一些可以与pre-miRNA-155结合的小分子。接下来使用Monolith分子互作仪完成了大量RNA小分子结合表征。研究人员验证了C1仅结合于5′GAU/3′C_A motif，其他RNA凸起或者点突变RNA在相同检测浓度范围内看不到明显的结合信号。在使用Monolith检测时无需固定RNA，仅需带有CY5标记即可直接在溶液中精确表征Kd，检测一对样品仅需10min。图1：pre-miR-155-binder C1结合曲线构建靶向嵌合体小分子结合于pre-miRNA-155的非活性位点，并不会对细胞内的miRNA-155表达水平产生影响。接下来研究人员构建了双功能小分子核糖核酸酶靶向嵌合体，一端与目标RNA结合，另一端招募并激活RNA酶，从而靶向降解目标RNA。改造后的嵌合体成功在细胞内降低miRNA-155的表达水平，并且在细胞和小鼠模型中抑制了三阴乳腺癌。图2：将结合pre-miR-155的惰性结合物转化为活性RIBOTAC降解剂为了测试该方法的适用性，研究人员又构建了靶向MYC和JUN的核糖核酸酶靶向嵌合体。这两种蛋白都是重要的癌症靶点，但都是无序蛋白，被认为是不可成药的。改造后的核糖核酸酶靶向嵌合体获得了生物活性并在细胞内精准地靶向降解各自的靶向RNA，使这些癌蛋白驱动的转录和蛋白组学进程失效。这项研究表明对于由这些常见但具有挑战性的致癌基因驱动的癌症，重编程非活性小分子为靶向RNA降解剂可能会带来新的变革。图3. JUN-RIBOTAC选择性降解JUN mRNA抑制胰腺肿瘤细胞的增殖和迁移Monolith系列分子互作检测仪在此项研究中，NanoTemper的Monolith分子互作检测仪在RNA小分子结合表征的检测中提供了可靠的实验数据。RNA分子量小，体外容易降解，而Monolith系列分子互作仪对分子量无限制，同时10分钟的快速检测可以最大程度避免RNA的降解。Monolith系列分子互作仪覆盖几乎任何分子类型、缓冲液成分或亲和力强弱的检测项目，并且检测不依赖于分子量，能够轻松应对不同类型的分子间相互作用检测难题，助力靶向RNA降解剂研究。NanoTemper微量热泳动分子互作检测仪Monolith-实用应用手册_诺坦普科技（北京）有限公司 (instrument.com.cn)

01 / 前沿技术分享什么是nanoDSF技术 ？基于微量差示扫描荧光技术 (nanoDSF) 技术，可在天然条件下检测蛋白热变性和化学变性。蛋白中色氨酸和酪氨酸的荧光与其所处的环境密切相关。免标记的nanoDSF技术可以准确检测蛋白热变性和化学变性过程中内源荧光的变化。因此，通过检测荧光变化，可实现在非标记环境下测定蛋白的热稳定性或化学 稳定性。更重要的是，数据质量不会受样品聚集影响。高质量的数据助您做出更好的决定。PR系列是通过检测蛋白的内源性荧光来跟踪其折叠状态。荧光信号的比值会随着温度的增加或化学变性剂浓度的增加而变化，从而测定蛋白稳定性参数Tm值。02 / 技术应用nanoDSF技术的应用方向 ？在生物制剂研究人员日常工作中，早期可开发性评估最常见的关键质量属性（CQAs）是热稳定性。其中，高分辨率评估热稳定性的一个特殊工具是纳米差示扫描荧光法（nanoDSF），它从基于蛋白质的治疗药物的内在荧光中导出参数Tm和Ton。当您面临许多候选目标或缓冲区条件需要筛选时，nanoDSF技术可使用少量样本，适用宽泛的浓度，得到高品质的数据，作为一种不可或缺的首轮筛选技术使您可以看到前所未有的精度，发现候选者之间的细微的差异。03 / 下载收藏nanoDSF技术的应用方向 ？下载这份nanoDSF技术指南, 您可获取如下信息：nanoDSF是如何利用蛋白质的固有荧光来确定其熔解温度Tm?为什么高分辨率展开数据对于获得单克隆抗体的稳定性信息至关重要？nanoDSF数据的实际示例是什么样的？以及您可在实际数据中查看哪些信息？通过这份指南，您可以更快地选择最有发展潜力的候选目标: 查看来自抗体工程、抗体-药物偶联（ADC）、生物仿制药开发和制剂开发的真实数据， 并学会一目了然地解读它。生物药品药物研发临床前研究检测 | 生物制剂研究人员必备技术指南-如何使用nanoDSF进行候选目标筛选-诺坦普科技（北京）有限公司 (instrument.com.cn)，详细了解PR Panta如何为您的生物制品决策提供最高质量的数据。04 / 企业愿景关于NanoTemperNanoTemper公司的使命是为科研人员创造强大的生物物理学工具，以解决表征中最具挑战性的难题。我们非常兴奋能够同致力于改变世界的药物研发或与基础研究科学家合作，为实现公司愿景-创造一个任何疾病都可以被治疗的世界而不断前行。如果您在亲和力筛选、分子相作、蛋白稳定性或蛋白生产等方面遇到挑战，欢迎随时联系我们。

前 言*图片来源于湖北药检所官网人纤维蛋白原(human fibrinogen, Fg)是一种由肝脏合成的球蛋白，发挥止血和凝血功能。Fg可用于治疗先天性和获得性Fg缺乏症患者的凝血功能障碍。目前Fg制剂是由健康人血浆经分离、提纯并经病毒去除和灭活处理、冻干制成。Fg这类蛋白质药物具有大分子、多电荷、结构复杂等特点，其稳定性往往较差。而稳定性是保证药物发挥其作用的基础。2023年3月，湖北省药品监督检验研究院王文晞博士近期发表“多功能蛋白质稳定性分析仪在人纤维蛋白原制品质量控制中的应用”，借助NanoTemper公司的PR Panta对不同企业生产的Fg产品的质量进行快速分析质控。/ 实验步骤/NanoTemper多功能蛋白质稳定性分析仪PR Panta可用于快速测定蛋白质的热稳定性，通过热变性、粒径分布聚集倾向和粒径大小等参数对产品进行评估。使用毛细管吸取10uL 20mg/ml样品置于PR Panta上，首先在DLS模块上检测Fg的水力学半径（Rh），然后进行1℃/min的升温（25℃-95 ℃）。使用1份样品，同时且实时的检测获得Fg的样品热变性中点温度（Ｔｍ）、蛋白质初始去折叠温度(Tonset)、粒径开始变化温度(Tsize)和流体力学半径(Rh)等多种参数。/ 研究结果/nanoDSF检测模块结果显示21批次样品Tｍ 值为51.20~53.31 ℃(表1)。不同企业产品Tｍ值存在一定差异，最高相差 2.1 ℃， 表明各企业间产品稳定性存在较大差异。其中企业Ｆ产品Tｍ值最高（53.28℃），企业Ａ产品Tｍ值最低（51.22℃），差别2.06℃。表１ 不同企业Fg蛋白热变性中点温度Ｔｍ值测定结果21批次样品的Tonset值为47.29~49.32 ℃（表2），不同企业产品Tonset值存在一定差异。其中企业Ｆ的产品Tonset值最高，企业A Tonset值最低，总体与Ｔｍ值趋势一致。表２ 不同企业Fg蛋白质初始去折叠温度Tonset值测定结果21批次样品Tsize值45.36~46.99 ℃，不同企业产品Tsize值差异较小。表３ 不同企业Fg蛋白粒径开始变化温度Tsize值结果 21批次样品Rh值 19.03~30.75 nｍ，不同企业产品Rh值存在一定差异。表４ 不同企业Fg蛋白流体力学半径 Rh 值结果综上可知企业Ｆ产品热稳定性最好，企业Ａ产品热稳定最差。除稳定性外，纯度是反映Fg产品中可凝固蛋白与总蛋白的比值是产品有效性的重要指标。作者通过凯氏定氮仪进行样品检测后并依据下方公式计算纯度。结果显示21批次样品纯度80.3%~95.9%（表5），其中企业Ｆ产品纯度最高，平均94.6%。企业Ａ产品纯度最低平均83.2%。表5 Fg纯度测定结果作者将纯度与在PR Panta检测得到的Tｍ值进行相关性分析，结果显示相关系数为0.729,Ｐ＜0.05 。即产品纯度与Tｍ值呈显著相关, 热稳定性高的产品纯度较高。为了明确Fg的组分分布，作者采用HPSEC-MALLS测定纯度最高与最低产品的组分分布。企业Ｆ产品（稳定性&纯度最佳）由Fg单体和多聚物２个组分组成，企业Ａ产品（稳定性&纯度最佳最差）由 Fg单体、多聚物和蛋白质降解产物３个组分组成。结合以上部分稳定性与纯度呈相关性的结果可以进一步分析得出，Fg热稳定性较差，在生产、存放、复溶后放置的过程中会形成可溶性寡聚体，导致产品纯度降低。因此可根据产品热稳定性测定结果初步分析不同企业产品纯度高低，进而能简单、快速 地对不同企业间产品质量进行初步评估，为企业工艺优化和制剂筛选提供更加快速、准确的依据。多功能蛋白质稳定性分析仪可以测定产品纯度与稳定性，为人纤维蛋白原产品保护剂的筛选和生产工艺优化提供相应数据参考，且能对不同企业产品的质量进行初步分析，仪器操作简便、检测时间短、检测效率高。——摘自本文文献对PR Panta的评价

  华东理工大学药学院  葫芦素B诱导GRP78-FOXM1-KIF20A通路介导的结膜黑色素瘤细胞G2-M细胞周期停滞01前言结膜黑色素瘤 (Conjunctival Melanoma，CM) 是一种罕见且致命的黑色素细胞恶性肿瘤，位于眼表。它约占所有眼部肿瘤的2%和所有非皮肤黑色素瘤的1.6%。CM在人群中发病率低，发病机制极其复杂，潜伏期长，因此更难治愈。大多数CM源于原发性获得性黑变病 (Primary acquired melanosis，PAM) 或结膜色素痣。但迄今为止，关于CM的遗传和表观遗传特征还没有更深入的阐明。2022年10月，华东理工大学药学院李剑教授与上海九院眼科徐晓芳/贾仁兵教授团队合作在Acta Pharm Sin B（IF=14.903）上发表了题为“Cucurbitacin B-induced G2-M cell cycle arrest of conjunctival melanoma cells mediated by GRP78–FOXM1–KIF20A pathway”的研究论文，揭示了葫芦素B能够抑制结膜黑色素瘤直接靶点及其作用机制。https://doi.org/10.1016/j.apsb.2022.05.02102葫芦素B葫芦素B (CuB)是最丰富和最常研究的葫芦素衍生物之一，它是从葫芦科植物中分离出来的四环化合物。作为一种传统药物，CuB具有多种药理活性，如抗炎、解热、抗糖尿病和抗癌活性，这些活性由不同的调节信号通路介导。在中国，CuB已被用作慢性肝炎和原发性肝癌的辅助治疗药物。在此研究中，作者通过细胞学实验第一次发现CuB能够显著抑制具有典型NRAS和BRAF突变（包括CRMM2、CM-AS16、CRMM1 和 CM2005.1）的CM细胞的增殖，而对正常细胞无毒性。03亲和力检测为了确定CuB的直接作用靶点，作者采用ABPP（Activity-Based Protein Profiling）的化学蛋白质组学策略，筛选到GRP78蛋白鉴定为潜在靶标。GRP78已被验证为多种癌症的潜在生物标志物和治疗靶点，可抑制癌细胞的进展、增殖、侵袭和转移。接下来作者需要通过直接的实验证据证明筛选得到的GRP78蛋白为CuB的直接靶点。作者首先通过热位移（TSA）结合测定证明，与对照相比，使用CuB处理过的样品(0.2 mmol/L) 以温度依赖性方式增加细胞裂解物中GRP78的热稳定性（图1），表明GRP78和CuB之间可能存在直接相互作用。图1注：CuB与 GRP78 过表达 293 T 细胞 的细胞热转移结合测定。之后，评估CuB与GRP78的亲和力，团队使用了NanoTemper的Monolith NT. Automated分子互作仪进行MST检测，结果显示CuB与GRP78的亲和力为0.11 μmol/L（图2，红色曲线），与细胞活性一致。MS/MS分析表明，在经过CuB处理的重组GRP78样品中，GRP78的Lys326位点存在α-β--不饱和酮修饰。作者检测CuB与突变体 GRP78 (Lys326Ala) 的亲和力明显减弱，其Kd值为 25.40 μmol/L（图2，蓝色曲线）。综合其他实验，证明了CuB通过α-β-不饱和酮部分与GRP78相互作用。图2注：通过MST检测CuB与人重组GRP78蛋白（WT 和突变体）之间结合亲和力。04MST技术在此项研究中，NanoTemper的MST技术在小分子化合物（CuB）- 蛋白质（GRP78）相互作用的检测中提供了可靠的实验数据，证明了二者之间存在直接的相互作用，促进了结膜黑色素瘤的靶向疗法的临床研究。Monolith系列分子互作仪基于MST技术，覆盖几乎任何分子类型、缓冲液成分或亲和力强弱的检测项目，并且检测不依赖于分子量，蛋白用量少，对于蛋白聚集耐受度高，能够轻松应对不同类型的分子间相互作用检测难题，助力癌症靶点研究。

01         高分文献最新研究成果近期，中国食品药品检定研究院及国家药品监督管理局的研究人员发表了关于抗体热稳定性分析的相关技术最新的研究成果，可以为国内抗体药物研发企业提供相应的技术参考。  DOI:10.16155/j.0254-1793.2023.01.18自从1986年，全球第一款单抗药物问世之后，经过几十年的发展，抗体药物已经成为全球制药领域增长最快的领域之一。抗体药物应用领域广泛，涵盖肿瘤、自身免疫性疾病、心血管和神经性疾病、抗感染、罕见病等领域。我国在2000年批准了首个进口的利妥昔单抗产品之后，我国的抗体药物产业也有了迅猛发展。抗体活性是其发挥治疗作用最关键的质量属性，其中热稳定性评价是反映高级结构正确与否的重要一环，同时较高的热稳定性也是抗体药物成药性和储存的保障。权威验证！可替代性技术优势明显！传统方法使用DSC（差示扫描量热法）进行表征，但是该方法对于样本的浓度（0.2~2mg/mL）有一定要求，样本检测通量也有限制，不适用于现在的研发需求。对于成药的高浓度处方而言，往往需要进行稀释进行检测，从而偏离原有样品的稳定性属性。基于此，中检院对nanoDSF技术平台与DSC技术进行了比较，发现NanoTemper公司的nanoDSF技术不仅仅具有与DSC的一致性精确数据，还弥补了DSC在浓度与检测通量上的缺陷。nanoDSFnanoDSF技术展示出与DSC平台一致的精确性，nanoDSF与 DSC一致，均表现出良好的精确性，能够很好的检测到蛋白信号，也能精准识别抗体样品的不同结构。作者又考察了不同浓度下nanoDSF技术的重复性，高精准的重复性，完全满足日常研究和检测的数据间的可比性，不必因为数据质量的问题而造成不同批次间差异过大，无法进行有效的比较。02         技术对比最新研究成果那么两种技术间数据的可比性如何呢？作者对不同浓度的抗体样品在两个平台下的检测结果进行了对比，２种方法的Tm检测结果具有较好的相关性，各检测浓度下Tm结果的相关性均达0.99以上，说明nanoDSF原理检测Tm具有可行性。而在不同浓度下检测抗体样品也展现出来惊人的一致性，低浓度下也能很精确地检测出不同的结构域变化，说明nanoDSF技术具有极好的数据质量，能够检测各种不同浓度下的蛋白样品。对于PR系列仪器中的背反射模块，能够高精准地检测聚集的产生。随着浓度的升高，聚集的倾向也越大，对于蛋白的稳定性而言，热稳定性与胶体稳定性都是重要的参数。而浓度也带来了Tm的差异，所以对原浓度样品的检测是十分必要的。PR系列仪器，可以检测宽泛浓度范围（5 μg/mL~250 mg/mL）的样品，仅需10 μL 样品即可完成检测。 最后，文章认为：nanoDSF技术具有较宽的浓度适用范围，较少的样品消耗，较高的检测通量，较好的特异性、精密度、准确性，可以作为单抗分子结构稳定性、胶体稳定性及可比性研究等的有力工具。PR Panta搭载了功能强大的四个功能模块（nanoDSF，背反射，DLS与SLS），能够全方面的评估蛋白样品的热稳定性与胶体稳定性，已经被广泛的应用于各类蛋白稳定性研究中。

北大药学院将非典型E3连接酶ZFP91促进小分子诱导的E2F2转录因子降解用于癌症治疗转录因子E2 因子 (E2F) 家族是参与细胞周期及细胞凋亡的重要调节因子。作为E2F家族的重要成员，E2F2的异常表达总与各种癌症的不良预后高度相关，例如，E2F2水平在晚期肝细胞癌中普遍上调，E2F2高表达的患者生存率普遍较低，这表明E2F2具有成为抗癌靶标的潜在价值。因此，选择性抑制E2F2功能的潜在治疗策略的发现引起了广泛关注。然而E2F2 作为转录因子，缺乏典型的配体结合域，传统上被认为是“不可成药”的靶点。分子胶是一类小分子，可以诱导蛋白质-蛋白质相互作用，以驱动以前不可成药的蛋白质降解。但到目前为止，仍未见有关具有选择性 E2F2 靶向特性的分子胶的报道。为了探索 E2F2 降解策略，北京大学药学院天然药物及仿生药物国家重点实验室屠鹏飞与曾克武团队使用中药蟾酥主要活性蟾毒灵（Bufalin，BF）作为化学探针来确定其在肝细胞癌 (HCC) 中的药理作用。结果表明，一种新的非典型E3连接酶ZFP91可作为降解E2F2转录因子的药物靶点。此外，实验发现蟾毒灵具有分子胶的功能，可以有效诱导转录因子E2F2与非典型泛素连接酶ZFP91形成E2F2-ZFP91-蟾毒灵三聚体复合物，进而促进E2F2的泛素化和蛋白酶体途径降解。此文章于2022年11月发表在eBioMedicin：https://doi.org/10.1016/j.ebiom.2022.104353在这项研究中，NanoTemper的微量热泳动MST分子互作技术被用于检测蟾毒灵作为分子胶水分别与E2F2和ZFP91的亲和力（图1）。图1注：蟾毒灵招募ZFP91降解E2F2的作用模式MST技术可以在细胞裂解液中检测目的蛋白和另外分子的互作，即可免纯化。对于难纯化的蛋白来说，仍可完成定量亲和力的检测。该研究中在裂解液中目的蛋白通过2种不同的方法带上荧光，完成复杂环境中目的蛋白与其他分子的准确亲和力测定。在检测E2F2与蟾毒灵互作时，构建了带有his-tag标签E2F2质粒，在HEK293T细胞中过表达。裂解后，使用NanoTemper RED Tris-NTA试剂盒特异性标记裂解液中his-tag E2F2，使其带上荧光，然后向裂解液中加入梯度稀释的蟾毒灵。微量热泳动 (MST) 实验表明，蟾毒灵直接与E2F2结合，解离常数为3.15 ± 1.43 μM（图2）。图2注：MST检测裂解液中E2F2与蟾毒灵的亲和力在检测蟾毒灵与ZFP91互作时，作者构建pEGFP-N1-ZFP91质粒转染导HEK293T细胞中过表达，裂解后取上清，将上清液中的EGFP-ZFP91直接作为荧光信号源，加入梯度稀释的蟾毒灵。MST测定显示蟾毒灵以 462 ± 146 nM的解离常数（Kd）与ZFP91结合（图3）。图3注：MST检测裂解液中ZFP91和蟾毒灵的亲和力蟾毒灵可拆分成α-吡喃酮（α-Pyr）与DHA两个结构，团队通过MST实验证明α-Pyr直接与ZFP91蛋白结合（Kd = 900 ± 322 nM），但不与ZFP91的C349A突变结合（Kd未检测到）（图4），表明α-Pyr是蟾毒灵与ZFP91发生结合的关键基团。综合其他结果，团队提出蟾毒灵可以作为分子胶介导E2F2-ZFP91复合物的形成，进一步促进E2F2的泛素化和降解。图4注：MST 展示了α-Pyr和GFP-ZFP91之间的直接相互作用总的来说，这项研究进行了基于分子胶的E2F2癌症治疗靶向策略的概念验证，在癌症治疗中具有广阔的药用价值。同时，该研究还揭示了蟾毒灵作为天然“分子胶水”发挥抗肿瘤作用的独特药理机制，也为抗肿瘤药物的设计提供了具有中医药特色的新颖靶点与先导药物分子。Monolith 分子互作仪在此项研究中，MST技术为蛋白质-蛋白质、蛋白质-酶之间的亲和力检测提供了可靠的数据，并且可免纯化定量检测裂解液中目的蛋白和其他分子的互作强度，标记方法灵活，大大加快了实验进展。基于MST技术的Monolith系列分子互作仪，不依赖于分子量的改变，蛋白用量少，对于蛋白聚集耐受度高，可以轻松表征不同类型的分子间相互作用。

01前言Thermal shift assay（TSA），也被称为差示扫描荧光法（DSF）是表征蛋白热稳定性的常用方法之一，广泛应用于蛋白配体互作表征，突变体、缓冲液、去垢剂筛选等领域。但DSF的实验操作较繁琐，需要根据蛋白的特性及去垢剂兼容性选择合适的染料，优化蛋白和染料的比例，在配制样品时还要考虑染料自带的有机溶剂对蛋白的影响。替代性技术：nanoDSF技术时下被行业深度认可的无标记的TSA验证方法-也称nanoDSF技术，可解决DSF技术的局限性，样品无需加染料就可以直接上机检测了。下面我们一起通过用户的文献案例来进一步了解。02NanoTemper用户应用案例解读检测样品：Cas9，gRNA使用仪器：PR系列蛋白稳定性分析仪涉及技术：nanoDSF技术https://doi.org/10.1016/j.isci.2023.106399CRISPER - Cas9介导的基因编辑能够帮助人们在动物和细胞模型中实现广泛的靶向敲除(KO)或敲入(KI)，例如单点或多点KO、点突变、报告基因KO或KI等。然而，CRISPR-Cas9的切割效果和准确性仍是基因编辑面临的主要挑战，它们特别受到核糖核蛋白复合物 (RNP)的组装配比的影响。2023年3月，法国南特大学的研究人员近期发表了研究成果：Excess of guide RNA reduces knockin efficiency and drastically increases on-target large deletions，作者借助PR系列蛋白稳定性分析仪搭载的nanoDSF技术，一种无需标记和固定化的方法，证明了Cas9和gRNA的等摩尔比是形成RNP复合物的最佳条件。研究结果作者通过CRISPR/Cas9 KI将双等位纯合子GFP hiPSCs转化为BFP表达细胞，通过细胞表型分析证明在Cas9的最佳浓度为0.4 mM时，增加ssODN浓度有助于降低KO率，提高KI率，而增加dgRNA对KO和KI没有影响。0.4 mM的Cas9、等摩尔Cas9/gRNA比例和2 mM的ssODN是在hiPSC中实现高效GFP到BFP转换的最佳选择。 在此之前，有一些研究曾表明过量的gRNA对于靶向切割有帮助，而本文作者的实验结果则与之产生了矛盾。于是作者使用NanoTemper公司的nanoDSF技术建立了一套体外实验方法学，用来评估RNP复合物的形成效率，从而佐证他们的结论。通过nanoDSF这种无标记技术，可在升温过程中检测蛋白中的色氨酸和酪氨酸的自发荧光。随着升温，仪器同步采集在350 nm和330 nm处的最大发射光位移，并自动拟合出蛋白的热展开曲线。NanoDSF能够检测蛋白的构象变化导致的热稳定性差异，并由熔解温度(Tm)来表征蛋白的热稳定性。由于Cas9是一种含有色氨酸和酪氨酸残基的变构酶， 因此利用nanoDSF技术可以简单、直观地检测导致Cas9重排的RNP复合物的形成。 为了确定hiPSC中使用的dgRNA靶向GFP位点(dgRNA GFP)形成RNP复合物的有效性，作者使用恒定浓度的Cas9 (0.75 mM)与一定浓度范围内的dgRNA, 通过nanoDSF检测，作出升温诱导的蛋白变性曲线检测 (图1A)。根据一阶导数，可以确定Cas9单独的Tm(TmCas9 = 43.2C)，以及Cas9/dgRNA摩尔比为1/1至1/5 的Tm：1/1 时TmRNP = 49.6 C、1/2 时TmRNP = 50.0 C、1/3时 TmRNP = 49.9C、1/5 时TmRNP = 49.8 C (图1B)。相比只有Cas9时， Cas9/dgRNA摩尔比为1/1至1/5 时的Tm都有明显增加，但Cas9/dgRNA不同摩尔比之间的Tm并没有显著差异（图1C）。这反映了RNP复合物的形成情况。另外，当Cas9/dgRNA为等摩尔比时，是检测不到游离Cas9的。因此，可以认为Cas9/dgRNA等摩尔比是形成RNP复合物的最优条件。图1作者在大鼠胚胎上使用点突变模型来验证等摩尔Cas9/dgRNA是否能得到最佳的KI率，以及过量的dgRNA是否会影响KI效率。 他们先使用nanoDSF检测大鼠胚胎中Cas9过量、等摩尔Cas9/dgRNA或dgRNA过量这几种情况下，RNP复合物的形成情况(图2A)。在所有条件下，添加dgRNA靶向的环氧化物水解酶2基因(dgRNA rEphx2)，与单独Cas9相比，Tm都显著增加，表明RNP复合物的形成 (图2B)。 在Cas9/dgRNA摩尔比为 5/1和2/1时，可以看到变性曲线中包含了两个热变性峰，分别可表示为TmCas9和TmRNP。与单独Cas9相比(TmCas9 = 43.2℃)， TmCas9对这两种RNP的比例差异不显著(TmCas9 RNP 5/1 = 43.0℃;TmCas9 RNP 2/1 = 43.3℃, p分别= 0.4809和0.9353)，而TmRNP为(TmRNP RNP 5/1 = 48.0℃;TmRNP RNP 2/1 = 48.9℃, p 都= 0.029)。这些结果表明，在两个条件下，RNP复合物已经形成，而游离Cas9仍然存在。当等摩尔比(RNP 1/1)或dgRNA rEphx2过量(RNP 1/2, 1/3和1/5)时，只观察到一个热变性峰(TmRNP RNP 1/1 = 49.7℃;TmRNP RNP 1/2 = 49.9℃;TmRNP RNP 1/3 = 49.8℃;TmRNP RNP 1/5 = 49.7℃)，这些Tm之间差异不显著。此外，与dgRNA rEphx2相比，RNP 1/1比例的TmRNP与RNP 2/1比例的TmRNP显著不同(TmRNP RNP 2/1 = 48.9℃;TmRNP RNP 1/1 = 49.7℃, p = 0.0206)，与单独Cas9也显著不同 (TmCas9 Cas9 = 43.2℃;TmRNP RNP 1/1 = 49.7C, p这说明大多数Cas9形成了RNP复合体，RNP 1/1和dgRNA过量。由此同样佐证了作者的结论，等摩尔比Cas9/gRNA这个条件限制了游离Cas9，可能也限制了游离dgRNA，最终有效形成RNP复合物。图203关于PR系列蛋白稳定性分析仪德国NanoTemper公司自2014年推出PR系列蛋白稳定性分析仪，以nanoDSF技术为核心，通过检测蛋白内源荧光，无需标记即可检测蛋白Tm值，快速精确评估蛋白在不同条件下的热稳定性变化。2020年NanoTemper推出新一代PR Panta仪器，并于2022年整合四大技术模块nanoDSF/Backreflection/DLS/SLS，可实时同步评估蛋白热稳定性，胶体稳定性，聚集体与粒径等信息，为科研人员在蛋白质量控制、复合物分析、化合物筛选、制剂优化等方面提供强大助力。今年年初，公司凭借自身不断创新的科学技术，推出新品型号：PR Panta + 机械臂自动上样器，这款新品拥有独立且包罗万象的系统，包含机械臂、外框架、计算机和监视器。可装载多达4个384微孔板，用于检测所有蛋白质候选分子热变性、胶体稳定性和化学变性的全自动操作。可针对高通量或配方筛选实验场景，无需手动即可完成多达1536个样品的检测。PR系列产品

1用户背景介绍勃林格殷格翰(Boehringer-Ingelheim)是一家致力于人类生物制药化学和动物健康产品的医药公司，也是世界上最大的私有制药企业。名列全球前20位，高度研发驱动的领先医药公司，核心业务是包括处方药、 动物保健和生物制药，业务范围遍及全国各主要省市和地区。主要的研究领域包括：免疫及呼吸疾病、心血管及代谢疾病、中枢神经疾病、肿瘤。勃林格殷格翰成为第一家跨国公司在中国建立生物药物的制造企业。2014年，与百济神州签署战略合作协议，为其临床试验提供生物制药的生产。同年底，生物制药中试生产车间在上海张江工厂落成。2020年6月，勃林格殷格翰日前启动跨国药企在华首个外部创新合作中心。该中心采用了跨国药企中首个“三合一”业务模式，即集学术合作、业务拓展及许可、风险投资于一体。此举将整合公司的创新经验和合作伙伴在各自相关领域的独特技术和专业技能，共同开发创新药物和疗法，进而惠及更多患者。2为什么早期发现对蛋白质科研人员至关重要？单克隆抗体（mAb）是当今治疗性生物制剂的主要成分。由于其高度特异性和效力，它们被用于治疗多种疾病-从不同的癌症类型到自身免疫缺陷。新的蛋白质工程方法导致越来越多的治疗性mAb，它们还可以被修饰为双特异性、与其他生物制剂结合或用小分子药物修饰。而单克隆抗体（mAb）等生物药物的数量不断增加，以及mAb 变体之间的丰富异质性，需要一个彻底的开发过程，以最大限度地提高mAb的法规遵从性。因此，在开发过程的早期阶段就需要生物物理分析方法，以指导和简化进一步的抗体处理，并预测抗体的开发能力。抗体的构象和胶体稳定性是预测其稳定性和可开发性的关键参数，因为它们影响长期储存稳定性。开发管道中mAb和mAb变体的数量不断增加，需要使用能够快速评估这些参数的生物物理方法。在开发的早期阶段筛选条件和抗体构建体旨在确定最有希望的候选物，以满足药物批准的监管要求。在本案例中，勃林格殷格翰使用治疗性单克隆IgG1抗体的小规模配方筛选，以验证PR NT.48在确定关键稳定性参数方面的优异能力。通过PR NT.48搭载的nanoDSF技术跟踪色氨酸荧光发射的变化来评估热梯度中mAb构象稳定性。同时，PR NT.48可以检测胶体稳定性的变化和温度引起的聚集，是通过检测两次通过样品的光束的背反射强度实现的（图1）。图1：检测蛋白质聚集的背反射原理示意图(左) 光通过毛细管，被反向反射到检测器，光强度被量化。(右) 粒子散射光，导致入射光的消光和背反射光的反射--蛋白质聚集的直接测量。使用PR NT.48同时进行背向反射和荧光分析提供了几个重要信息：可直接关联热稳定性和胶体稳定性，这意味着可以识别引起聚集的展开事件，更重要的是，可以确定聚集起始温度。可确定抗体的未折叠状态的总体聚集程度，这在不同的配方和抗体类型之间可能有显著差异。应用案例分享: 了解勃林格殷格翰如何为其单克隆抗体寻找最佳缓冲条件_诺坦普科技（北京）有限公司 (instrument.com.cn)

什么是DLS动态光散射技术？NanoTemper Technology动态光散射（DLS）是一种强大的技术，是一种测量颗粒大小、低聚化和分散性，以及环境变化（如药物偶联物的添加或储存缓冲液的变化）对它们的影响的方法。可提供有关生物制剂制备物的纯度和聚集状态的信息，并增加对候选物稳定性的更深入了解。提问 DLS技术能提供生物制品的哪些信息1粒径2样品质量3自相互作用无论是早期阶段的目标蛋白分离还是临床前的药物制剂，DLS技术对于生物制品研发流程的每一个阶段都可提供重要价值。DLS技术可轻松提供额外的稳定性参数，并与其他稳定性分析方法同时进行，无需额外的时间或材料要求。将DLS信息添加到稳定性评估中会发现其他技术遗漏的细节，因此，可以在早期开发阶段缩小最终候选生物制剂的挑选范围。在实验工作中，生物制品研发人员通常需要面对的是非常复杂的分子，而在漫长的研发流程中样品稳定性、质量和功能都十分重要。通过DLS技术，使研究人员能够仅从这一种方法中就获取以上所有信息，它可以分析候选药物在应对一系列环境变化时的表现，而了解这些药物在应对变化时的表现对于生物制品的工作流程至关重要。这其中包括了从确定哪些药物值得开发，到提高药物质量以实现规模化生产和交付。无论是异构体筛选、制剂、放大生产还是储存及有效性分析阶段，因此，DLS技术在生物制品研发流程的每个阶段都是极具价值的工具。https://www.instrument.com.cn/netshow/SH104108/down_1145387.htm阅读DLS技术指南电子书，了解其工作原理，以及它如何帮助您优化候选药物的筛选过程。我们介绍了在整个生物制药流程中，DLS技术如何帮助您改善每一个决策，同时也提供了一些设计DLS实验的实用技巧。在本书中，您将了解到：1什么是生物制品，它们为什么如此重要？2DLS技术如何提供您的样品相关的数据信息，这些数据的含义是什么？3设计您自己的DLS实验时的一些小提示和注意事项愿景  关于NanoTemperNanoTemper公司的使命是为科研人员创造强大的生物物理学工具，以解决表征中最具挑战性的难题。我们非常兴奋能够同致力于改变世界的药物研发或与基础研究科学家合作，为实现公司愿景-创造一个任何疾病都可以被治疗的世界而不断前行。如果您在亲和力筛选、分子相作、蛋白稳定性或蛋白生产等方面遇到挑战，欢迎随时联系我们。

分子互作技术线上培训分子互作是生命体进行物质和能量传递的基础，分子互作技术让科学家们能够更加清晰的了解其中的奥秘。NanoTemper公司的Monolith产品基于微量热泳动（MicroScale Thermophoresis, MST）和光谱位移（Spectral Shift）技术精确定量表征分子间亲和力Kd，是用极少量样品在溶液内测定结合亲和力的唯一方法。实验时无需固定，可以表征几乎所有类型的亲和力检测难题，帮您解决SPR难以应对的分子互作难题，是您进行亲和力检测的最佳解决方案。春暖花开之际，NanoTemper的技术专家们将为您带来Monolith的产品线上培训，欢迎大家围观学习。本次培训将介绍Monolith检测分子互作原理、文献解读、实验流程优化以及数据分析。讲座适用于Monolith NT.115和Monolith的用户以及对此感兴趣的客户。您只需参加这一次培训，就能变身成实验室的Monolith分子互作技术专家！日程及安排主题：Monolith分子互作技术应用培训时间：2023年3月25日 周六上午9:30-11:00主讲人：龙韵馨&刘贝贝 ( NanoTemper应用技术专家 )扫码报名，预约直播不迷路哦！培训内容o    Monolith技术原理o    技术应用案例o    实验流程o    常见问题与优化方案o    互动问答环节（好礼相送）有奖互动o   对转发及位居邀请榜第一名的用户，送出天猫精灵一份！o   凡参与直播互动问答的用户，均有机会获得精美礼品！

NanoTemper今日正式推出新品型号：PR Panta +机械臂自动上样器，这款新品拥有独立且包罗万象的系统，包含机械臂、外框架、计算机和监视器。可装载多达4个384微孔板，用于检测所有蛋白质候选分子热变性、胶体稳定性和化学变性的全自动操作。可针对高通量或配方筛选实验场景，无需手动即可完成多达1536个样品的检测。PR Panta +机械臂自动上样器通过机械臂自动上样器，结合PR Panta，进行全自动化操作提升运行通量。PR Panta集合了nanoDSF、DLS、背反射和SLS技术，让用户在无需消耗大量珍贵样品的前提下，单侧检测同时获得热变形、聚焦、粒径大小和分散性等宝贵参数，更加完整、可靠地获得蛋白质稳定性数据。