细胞共培养实验方法介绍

细胞共培养实验介绍

1.基本原理

体外细胞共培养（co-culture)是将两种细胞（可以来自同一种组织，也可以来自不同的组织）混合共同培养，从而使其中一种细胞的形态和功能稳定表达，并维持较长时间。该技术能模拟体内生成的微环境，便于更好地观察细胞与细胞、细胞与培养环境之间的相互作用以及探讨药物的作用机制和可能作用的靶点，填补了单层细胞培养和整体动物实验的鸿沟。
目前主要有三方面的研究内容：分别是a. 细胞与细胞之间的接触、作用，引起胞质膜的直接接触并产生细胞外基质 ECM ，其含有间质胶原、纤连蛋白、蛋白多糖及层粘连蛋白等成分，从而模拟了与体内相似的微环境，维持细胞的立体构形及促进细胞的功能。b.细胞与细胞之间的相互作用 ,观察细胞共培养后其功能、性状和生长行为的变化 ,如某一细胞的分泌物对另外一种细胞基因表达的影响，细胞与细胞之间的“对话”等。c.研究药物对细胞形态、功能的影响以及相关机制，为新药研发提供重要技术支持。
细胞共培养分为直接接触式共培养和非直接接触式共培养。直接接触式共培养是指在合适的条件下，将两种细胞按照一定比例在同一培养皿中共同培养。利用两种细胞或组织接触，通过旁分泌、自分泌分泌细胞因子或直接接触等相互作用方式，主要缺点是两种细胞分离较困难，不便于观察和后续检测；非直接接触式共培养是指在共培养体系中一者对另者的影响是通过旁分泌的细胞因子相互作用，但两者不接触。由于两种细胞容易分离，便于观察和不影响后续的检测，包括以下4种方法：（1）用一种细胞的培养上清液（含有不同生长因子）与另外一种细胞共培养。（2）将玻片上（经过1型胶原凝胶预处理）培养的细胞B，以一定的比例放入细胞A的培养皿中与其共培养。（3）Millicell插入式细胞培养皿（Transwell小室）是一类有通透性的杯状装置，杯子底层放一张有通透性的膜，一般常用的是聚碳酸酯膜，孔径大小有 0.1～12.0um。将 Transwell 小室放入培养板中，细胞A种在上室内，下层种植的细胞B 其培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究细胞B分泌或代谢产生的物质对细胞 A 的影响。（4）三维细胞培养(three dimensional cell culture,TDCC)：TDCC是将具有三维结构不同材料的载体与各种不同种类的细胞在体外共同培养，使得细胞能够分化产生一定的三维组织特异性结构，构成三维细胞载体复合物,如现在常用的基质胶 (matrigel)，是一种从小鼠肿瘤组织中提取的物质，在室温下，它形成类似于体内的细胞外基底膜的胶状结构，把内皮细胞培Matrigel胶内，内皮细胞表现出新生血管的特征。Matrigel胶方法的局限性是并不能很好模仿体内肿瘤和血管内皮的微环境，细胞分离及提取困难，而且细胞因子的弥散受到一定的影响。

Ibidi共培养实验产品介绍----µ-Slide 2孔共培养
2.应用范围：（1）不同细胞系或原代细胞的共培养
（2）上皮-间质细胞互相作用
（3）体外不同种类细胞旁分泌互相作用
（4）基质胶中细胞或细胞球体培养
3. 特点：
（1）IBIDI有2孔共培养载玻片，细胞互不接触，但共享同一个液体环境，可以实时观察细胞，不像transwell做共培养，需要取出细胞才能观察；
（2）IBIDI共培养载玻片在孔里加液换液，培养和观察等操作方便，比transwell的操作要简单；
（3）此产品能按实验需要调节供体细胞和受体细胞的比例；
（4）产品用法简介：在浅的孔中种细胞，细胞贴壁后，加入培养基浸过所有的浅孔，共培养实验开始；
－（如果实验是做少量细胞的共培养，或多细胞对少细胞的共培养）IBIDI这些2孔插件，还有4孔插件都可以做，把少细胞种在插件的孔里；

4. 实验流程简介
1. 将40-60ul的受体细胞悬浮液种到slide中间小室，根据你的细胞类型密度控制在5-10×104cells/ml；
2. 将40-60ul的饲养层细胞悬浮液种到slide的其他8个小室；
3. 细胞贴壁后，移去各小室培养基，并洗脱掉未贴壁细胞，再加400-600ul培养基到大well，两种细胞共享同一培养体系。


纵切面：