溶质在色谱柱洗脱的动力学过程分类

高效液相色谱法可依据溶质（样品）在固定相和流动相分离过程的物理化学原理分类，也可按照溶质在色谱柱中洗脱的动力学过程分类。按溶质在色谱柱洗脱的动力学过程分类，可以分为洗脱法、前沿发和置换法三类。

洗脱法

洗脱法（elution method） 又称淋洗法，如将含三组分的样品注入色谱柱，流动相连续流过色谱柱，并携带样品组分在柱内向前移动，经色谱分离后，样品中不同组分依据与固定相和流动相相互作用的差别，而顺序流出色谱柱。此法在液相色谱分析中获得最广泛的应用，如图1所示。

图1 洗脱法色谱图

A—流动相 B—固定相 C—流出组分

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前沿法

前沿法（frontal metgod） 又称迎头法，如将含三个等量组分的样品溶于流动相，组成混合物溶液，并连续注入色谱柱，由于溶质的不同组分与固定相的作用力不同，则与固定相作用最弱的第一个组分首先流出，其次是第二个组分与第一个组分混合流出，最后是与固定相作用最强的第三个组分与第二和第一个组分混合一起流出。

此法仅第一个组分的纯度较高，其它流出物皆为混合物，不能实现各个组分的完全分离，现已较少使用，见图2 所示。

图2 前沿发色谱图

1,2,3—三种组分 c—浓度 t—时间

置换法

置换法（displacement method） 又称顶替法，当含三种组分的混合物样品注入色谱柱后，各组分皆与固定相有强作用力，若使用一般流动相无法将它们洗脱下来，为此可使用一种比样品组分与固定相间作用力更强的置换剂（或称顶替剂）作流动相，当它注入色谱柱后，可迫使滞留在柱上的各个组分，依其与固定相作用力的差别而依次洗脱下来，且各谱带皆为各个组分的纯品。
置换法现已在大规模制备色谱中获广泛应用，在生物大分子纯品制备中取得良好的效果，如图3所示。

图3 置换法色谱图

1，2，3——组分样品 D—置换剂（顶替剂） c—浓度 t—时间