自动化快速确定小抑菌浓度 (MIC)，NTEGRA移液器为何如此出众？

建立化合物库是药物发现途径的第一步，必须对大量目标化合物进行系统的筛选，以找到合适的候选药物。该过程需要可靠的液体处理解决方案。INTEGRA为小样品量的可重复处理提供了一系列移液选项，可确保测试分析的准确性和精密度。INTEGRA的电动移液器不仅可以独立使用，还可以与ASSIST PLUS移液工作站联用来实现自动化，减少动手操作时间。96/384通道电动移液器可提高处理通量并降低出现错误的可能性（避免重复试验，节省宝贵样品），同时优化人体工程学体验。这些移液解决方案也非常适合用于确定化合物功效的下游测试。

通过 ASSIST PLUS 上连续稀释步骤的自动化快速准确地测定 MIC抗生素耐药性是全球公共卫生的主要威胁。抗生素耐药性的原因之一是在医疗保健和农业中过度使用和滥用抗生素。用于定义抗菌化合物有效性的重要方法之一是确定小抑菌浓度 (MIC)。通过将化合物与液体生长培养基混合，然后添加细菌来进行化合物的连续稀释。然后在不同浓度的化合物存在下测量细菌生长。MIC 定义为抑制细菌生长的抗菌化合物的低浓度。使用 ASSIST PLUS 移液机器人自动执行转移和混合步骤，可以更快、更可重复地执行连续稀释。

ASSIST PLUS 移液机器人，欲了解更多，

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概述：如何自动化 MIC 测试

ASSIST PLUS 移液机器人和 8 通道 VOYAGER 125 μl 可调吸头间距电子移液器和 125 μl 无菌 Filter GripTips 可用于自动测定 MIC。在该微量肉汤稀释测定中，在单个 96 孔板中用一种细菌菌株在 10 倍两倍稀释（倍稀释）范围内测试了八种不同的抗生素（图 1）。还包括生长对照（生长培养基和细菌接种物）和无菌对照（仅生长培养基）。移液程序是使用 VIALAB 软件生成的。

在开始 MIC 测试之前，应将抗微生物化合物溶解并稀释到适当的起始浓度。细菌接种物应来自培养过夜的形态相似的菌落，浓度为 5x10 5 CFU（菌落形成单位）/ml。

图1：10 倍双倍连续稀释的示意图（GC：生长控制，SC：无菌控制）

图 2：用于 1.5/2 ml 微量离心管的 INTEGRA 架

实验设置：自动 MIC 测定

甲板位置 A：   

带有 SureFlo™ 防密封阵列的 10 ml 多通道试剂储液槽。

甲板位置 B：   

INTEGRA 架用于 1.5/2 ml 微量离心管（图 2），带有两个滑块。

甲板位置 C：    

96 孔平底板（Greiner Bio-One International）。

图 3：用于确定 MIC 的甲板设置

分步程序

1.添加介质

将细菌生长培养基添加到样品、无菌和生长控制孔中

用 8 ml 新鲜细菌生长培养基填充 10 ml 多通道储液器，并将其加载到甲板位置 A。将 INTEGRA 架放在甲板位置 B。用八种不同的抗菌化合物填充 0.5 ml 螺旋盖管，以针对细菌菌株进行测试（图 3，绿色）。用细菌接种物填充 1.5 ml 反应管（图 3，浅粉色）。将 96 孔平底板放在甲板位置 C（图 3，洋红色）。

在 VOYAGER 移液器上选择并运行 VIALAB 程序“MIC_Assay”。移液器将 50 μl 细菌生长培养基转移到微孔板的第 2 至 11 列。5 μl 后分配确保精确移液，即使生长培养基在移液过程中容易形成气泡。在下一步中，移液器将 100 μl 细菌生长培养基转移到微孔板的第 12 列。此列中的孔将是无菌对照，仅包含细菌生长培养基。

此步骤使用一组无菌过滤器吸头，因为它只涉及将无菌介质转移到空的无菌板。

提示：

工作流程参数可以在 VIALAB 软件中轻松修改。如果样品和试剂采用不同的实验室器具格式，则可以快速设置。

2. 连续稀释

抗菌化合物的两倍系列稀释

移液器将 100 μl 抗微生物化合物转移到第 1 列的孔中，然后进行两倍系列稀释（图 1），从第 1 列（高浓度）开始，到第 10 列结束（低浓度 = 1:512）。移液器从一列的孔中吸取 50 μl 体积，然后将其分配到下一列的孔中。充分混合组分在连续稀释中至关重要，因此该程序包括一个优化的混合步骤，包括吸液前和分配后的三个混合循环。后一次吸出液留在吸头中，随后随吸头一起丢弃。这确保在连续稀释的每个孔中都有相等的体积。

提示：

连续稀释中的混合体积 (100 μl) 设置为高于转移体积 (50 μl)，从而在不显着增加测定时间的情况下实现均匀混合。

在将化合物从试管转移到 MIC 检测板时，使用 VOYAGER 可调节吸头间距移液器可以显着提高生产率。

3. 加入细菌

添加细菌接种物

在此步骤中，ASSIST PLUS 移液机器人将 50 μl 菌剂转移到第 1 至 11 列的孔中。 在确定 MIC 时，每孔中菌剂的浓度相同非常重要，以确保一致和可重复的结果。通过在每次抽吸之前和每次分配之后执行混合步骤，确保相同的接种物浓度。

提示：

使用一次性无菌过滤器吸头可实现无污染处理。

4. 孵化和读板

培养细菌生长和结果读出

ASSIST PLUS 移液机器人会通知用户孵育 96 孔板，然后提示他们使用酶标仪读取结果。使用无菌对照的空白孔测量和校正光密度，并确定细菌生长。对于每种化合物，没有细菌生长的低浓度定义为 MIC（图 4）。

图 4： MIC 测试结果。针对一种细菌接种物测试了八种不同的抗微生物化合物（行 AH）。还使用了生长（第 11 列）和无菌（第 12 列）对照

结论

小抑菌浓度的测定是临床微生物实验室在抗生素开发和常规抗微生物药敏试验中非常重要和广泛使用的方法。

使用 ASSIST PLUS 移液机器人和 VOYAGER 可调节吸头间距移液器进行 MIC 测试提供了一种全自动解决方案，能够灵活地适应不同的实验室器具格式和用户需求。

连续稀释是容易出错的过程，但使用 ASSIST PLUS 可以显着提高 MIC 测试的可重复性。

通过自动更换吸头和使用无菌过滤的一次性吸头可以避免污染。

通过全自动 MIC 测试可以避免连续稀释步骤中长时间移液的潜在人体工程学危害。