细胞活力定义为样品中活细胞所占的比例,是所有细胞培养技术中的基本考量要素。对于某些实验,比如细胞毒性试验,细胞活力是度量给定药物毒性的指标。而在其他的应用,例如单克隆抗体的生产中,它则是细胞培养技术与产品质量控制的重要元素。培养细胞时,目标是一致地生产高活力且可重复的细胞样品。在所有的情况下,为了避免影响结果的可重复性和可靠性,细胞培养方法和工作流程不影响细胞活力是至关重要的。
公认的会影响细胞活力的参数有很多,包括环境条件、传代次数以及培养基相关因素等等。然而,每一个不确定因素,甚至是处理技术的差异,都可能影响细胞的健康和结果的可重复性。其中的一些影响显而易见,更容易控制。例如微生物污染会形成明显可见的构造和菌落,又如年老的细胞会随着衰老发展出不同的表型。然而,应力对活力的影响可能只有在培养期间或培养后,或者通过专门的染色才会显现。剪切力是细胞在移液、毛细管转移以及离心过程中必然会遭受的应力因素之一,能够显著降低细胞活力和增殖。关于细胞可承受剪切应力大小的观点说法不一,但学界一致认为,超过临界极限可能会损害细胞健康,并因此导致细胞裂解或细胞死亡等后果。剪切力对细胞活力的影响并不总是显而易见的,有报道称,在施加应力后的长达24小时内,细胞活力出现了显著的降低。
细胞培养工作流程中的许多重要阶段(例如细胞分离、取样、接种以及基于细胞的检测)都需要使用移液器进行混合。如果操作不慎,可能会在枪头孔口处发生细胞剪切。如同在地铁上驱使忙碌拥挤的人群一般,迫使细胞通过过于狭窄的管道,或以过快的速度通过,都有可能造成细胞创伤。当枪头孔径缩小或流速增加时,细胞活力、铺展和增殖都会受到影响。 大孔径枪头的开孔直径更大,可降低对细胞的应力,但这只解决了问题的一半。使用手动移液器时,每一次的混合动作都略有差异。骤然的开始和停止,以及柱塞速度的变化都是不可避免的,这也必然导致分离细胞所需的混合步骤数量各不相同。这些混合和移液速度中的不确定因素可能会使细胞承受不同水平的剪切力,从而影响结果的可重复性。
轻柔的处理和正确的工具能够提高细胞活力。移取易碎的细胞样品时,选择大口径枪头是明智的选择,因为它们的孔口更大,便于细胞流过。精密的电动移液器允许使用者选择、编制和保存清晰设定分液速度和混合动作的移液流程,以便每一次都能够以相同的速度执行每一个动作,这也有助于减少移液性能的不确定性。这些模式通常都是预先设置的,或者可以自定义来满足应用的需要。这消除了使用者技术或经验对细胞处理质量和一致性的影响,降低了剪切力对细胞活力的隐藏影响,并造就了产量更高、更健康的细胞——在所有的细胞处理任务中提供无与伦比的可重复性。
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