组织透明化技术在阿尔茨海默症的最新应用

图2：示意图显示分泌酶对淀粉样前体蛋白（APP）的加工，生成β-淀粉样蛋白。β-分泌酶切割APP后，在细胞外释放可溶性APPβ（sAPPβ）。然后，残留的跨膜蛋白被?-分泌酶裂解，从而在细胞外释放APP细胞内结构域（AICD）和毒性形式的β-淀粉样蛋白。过量的β-淀粉样蛋白螯合成聚集体，Alzheimer博士称其为“老年斑”。

基于我们对导致AD病理和认知能力下降的分子途径的认识，研究人员建立了AD的转基因小鼠模型，这些模型为神经科学领域研究疾病进展和探索潜在疗法提供了重要工具。建立这种模型的策略包括将突变基因引入小鼠脑中，这些突变会引起家族性遗传的早发型阿尔茨海默症。例如，5xFAD小鼠含有编码人APP和Presenilin-1（?-分泌酶复合物的关键成分）基因的多个突变。突变APP的表达和突变?-分泌酶的异常加工导致有神经毒性的β-淀粉样蛋白42过量表达。从而引起广泛的脑淀粉样变性（老年斑的沉积）和明显的神经胶质化，使得反应性星形胶质细胞迁移到受损的大脑区域。因此，在产后6个月的5xFAD小鼠中，就出现了许多AD表型，包括广泛的神经变性和认知缺陷。

我们通过LifeCanvas Technologies的SmartClear II Pro设备进行了快速透明化，并通过SmartLabel设备进行了均一的免疫标记，我们使用的5xFAD小鼠完整大脑样品来自于卡尔加里大学细胞生物学与解剖学系Jonathan Epp博士实验室。Epp博士主要对构成记忆整合基础的神经机制以及记忆中断的病理过程感兴趣。我们对Epp博士的5xFAD小鼠脑样本进行了β-淀粉样蛋白和GFAP（标记星形胶质细胞）的免疫标记，并使用光片显微镜获得了3D图像数据（图4）。我们可以清楚地观察到星形胶质细胞向淀粉样蛋白聚集体延伸并清除和降解这些沉积物的过程。毫无疑问，Alzheimer博士也会对这些3D透视下的壮观、高分辨率的病理图像赞叹不已。毕竟，这是他最初揭示的病理标记物。

（原文来自于LifeCanvas Technologies官方网站）

组织保存 – SHIELD试剂

SmartClear Pro II智能透明化电泳仪

SmartLabel智能荧光标记电泳仪

SmartLabel智能荧光标记电泳仪采用专利的电泳设计和薄膜设计，在染色的过程中大限度的保护样品蛋白，实现完整组织和器官的均匀标记。充分利用荧光探针，减少浪费，降低非特异性标记。使实验者获得好的标记结果。

锘海生物科学仪器（上海）股份有限公司与西湖大学高亮（平铺光片技术发明人)实验室共同研制的新型光片照明显微镜LS 18，克服了传统光片显微镜3D空间分辨率、Z轴层析能力和成像视野之间的矛盾；摒弃原有选择性平面照明显微镜中的单光片照明的方式，运用多个薄的光片分段照明，在不损失成像视野的情况下，获得更高分辨率的3D图像。LS 18光片照明显微镜适用于各种不同类型透明化方法处理的样品（水性透明化方法如Scale、SeeDB、CLARITY、CUBIC、SWITCH、SHIELD等；油性透明化方法如BABB、3DISCO、iDISCO、uDISCO、PEGASOS等），都可得到高分辨率、高信噪比的多色荧光3D图像，能够快速定位宏观样品中的目标细胞，获得高分辨率的3D细胞微结构。