样品净化的目的

    早期生物样本中阻断剂和镇静剂的报道主要集中在血液、尿液等液体样品中，镇静剂类常采用乙醚、氯仿或正己烷等溶剂在碱性条件下提取，而阻断剂卡拉洛尔则在碱性条件下采用正己烷-甲基丁醇提取。巴比妥类镇静剂的提取可用N-aOH溶液调节为pH值为12，进行碱解，使药物转化为钠盐进入水相，离心分离，上清液用磷酸洞节pH值为酸性(3.0～3.5)再用有机溶剂萃取净化。或是样本中加人β-葡萄糖酸苷酶磷酸缓冲溶液(pH值为6.5)于37℃温育60 min，使结合的或轭合的药物释放。

    固体和半固体样品如肉、肾脏、肝脏等样品．通常先用酸化水解或酶解后用反相有机溶剂如乙腈、丙酮或者正相有机溶剂乙酸乙酯等提取。孙雷等用弱极性有机溶剂提取了猪肉和猪肾中安眠酮、氯丙嗪、异丙嗪、地西泮、硝西泮、奥沙西泮、替马西泮、咪达唑仑等10种镇静剂类药物的残留，样品经酶解后，调节pH值呈碱性，分别用乙酸乙酯和叔丁基甲醚进行萃取，高速冷冻离心去除脂肪等杂质，3个加标水平的回收率为64.5％～111.4％。Delahaut等利用乙腈作为提取溶剂提取了猪肉、猪肾组织中丙酰丙嗪、乙酰丙嗪、氯丙嗪、甲苯噻嗪、阿扎哌隆及其代谢物、卡拉洛尔等药物，样品匀浆后振摇15 min，在4℃冷冻离心，取部分上清液直接用LC –MS/MS分析，不同化合物在肌肉和肝脏中的回收率高于80％。

    样品净化的目的是将提取液富集后除去干扰物质。净化方法通常有液-液萃取法、固相萃取法、固相微萃取法、液相微萃取法等。

    液-液萃取通常在碱眭条件下用乙醚或正己烷作为萃取溶剂，再用稀酸反萃取，最后用氯仿在高pH值或在离子对辛醇磺酸存在条件下萃取。由于镇静剂和阻断剂都是带有一个或几个氨基的碱性化合物，在碱性环境可让其呈分子杰，增加其在有机溶剂中的溶解度，在酸性环境中这些化合物是离子态的，可从有机溶剂中分配至水溶液中。液-液萃取对于极性的化合物如甲苯噻嗪、氮哌酮及其代谢物具有较高的回收率。

    SPE操作简便，可以净化很小体积的样品，溶剂用量少，选择性高，速度快，可实现自动化，不会发生乳化，净化中引人的杂质少，是应用最广泛的样品前处理方法。同相萃取适合于不同极性的镇静剂和β-受体阻断剂的净化。通常使用的是反相的固相萃取填料和高分子聚合物填料及免疫亲和柱。目前有关的研究表明，C18固相萃取柱对于某些镇静剂的回收率比较理想，如氯丙嗪、安定等。李存等建立了猪尿中10种镇静剂类药物(噻拉嗪、阿扎哌隆、氟哌啶、氟哌啶醇、艾司唑仑、硝西泮、地西泮、奥沙西泮、氯丙嗪和奋乃静)残留量的液相色谱-串联质谱方法。猪尿样品离心后过C18固相萃取小柱，用甲醇：乙酸乙酯(1：4)混合溶剂洗脱，用氮气吹干后用0.1%甲酸溶液溶解进行分析，回收率大于60％。但是这种小柱对β-受体阻断剂回收率低，重现性差。这主要是由于硅胶基质的C18柱含有大量残留的硅醇基，这些基团能够与带有氨基的目标物发生分子间结合产生强吸附，从而难以洗脱，结果表明，用C18柱净化卡拉洛尔，甲醇作为洗脱溶剂，回收率为0。而聚合物材料的反相固相萃取柱则不含有硅醇基，在碱性条件下是稳定的，近年来应用很多。由于口受体阻断剂等物质的碱性，混合型阳离子交换柱也被用于动物源性食品的净化。