ELISA双抗原夹心法测抗体    反应模式与双抗体夹心法类似。用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检测相应　　的抗体。与间接法测抗体的不同之处为以酶标抗原代替酶标抗抗体。此法中受检标本不需　　稀释，可直接用于测定，因此其敏感度相对高于间接法。乙肝标志物中抗HBs的检测常采　　用本法。本法关键在于酶标抗原的制备，应根据抗原结构的不同，寻找合适的标记方法。

ELISA双抗体夹心法测抗原双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，操作步骤如下：　　1） 将特异性抗体与固相载体联结，形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。　　2） 加受检标本，保温反应。标本中的抗原与固相抗体结合，形成固相抗原抗体复合物。　　洗涤除去其他未结合物质。　　3） 加酶标抗体，保温反应。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合　　的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。　　4） 加底物显色。固相上的酶催化底物成为有色产物。通过比色，测知标本中抗原的量。　　在临床检验中，此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、　　AFP、hCG等。只要获得针对受检抗原的异性抗体，就可用于包被固相载体和制备酶结合　　物而建立此法。如抗体的来源为抗血清，包被和酶标用的抗体最好分别取自不同种属的动　　物。如应用单克隆抗体，一般选择两个针对抗原上不同决定簇的单抗，分别用于包被固相　　载体和制备酶结合物。这种双位点夹心法具有很高的特异性，而且可以将受检标本和酶标　　抗体一起保温反应，作一步检测。　　在一步法测定中，当标本中受检抗原的含量很高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标　　抗体结合，而不再形成"夹心复合物"。类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象，此时反应　　后显色的吸光值（位于抗原过剩带上）与标准曲线（位于抗体过剩带上）某一抗原浓度的　　吸光值相同（参见1.3.2，图1-4），如按常法测读，所得结果将低于实际的含量，这种现　　象被称为钩状效应（hook effect），因为标准曲线到达高峰后呈钩状弯落。钩状效应严重　　时，反应甚至可不显色而出现假阴性结果。因此在使用一步法试剂测定标本中含量可异常　　增高的物质（例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等）时，应注意可测范围的最高值。用　　高亲和力的单克隆抗体制备此类试剂可削弱钩状效应。　　假使在被测分子的不同位点上含有多个相同的决定簇，例如HBsAg的a决定簇，也可　　用针对此决定的同一单抗分别包被固相和制备酶结合物。但在HBsAg的检测中应注意亚型　　问题，HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4个亚型，虽然每种亚型均有相同的a决定簇的反应　　性，这也是用单抗作夹心法应注意的问题。　　双抗体夹心法测抗原的另一注意点是类风湿因子（RF）的干扰。RF是一种自身抗　　体，多为IgM型，能和多种动物IgG的Fc段结合。用作双抗体夹心法检测的血清标本中如含　　有RF，它可充当抗原成份，同时与固相抗体和酶标抗体结合，表现出假阳性反应。采用　　F（ab'）或Fab片段作酶结合物的试剂，由于去除了Fc段，从而消除RF的干扰。双抗体　　夹心法ELISA试剂是否受RF的影响，已被列为这类试剂的一项考核指标（参见6.2）。　　双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原，但不适用于测定半抗原及小　　分子单价抗原，因其不能形成两位点夹心。

ELISA试剂盒加板时产生气泡的处理办法ELISA试剂盒加板时产生气泡的处理办法：A、使用吹风机，将吹风机打开，并调节到最高温度，对96孔板吹1-2秒就可以了。B、采用更好材质的板、或采用专门的96孔板振荡器。C、可以用tip吸走，但实验中费事、效果还不是很理想。D、使用注射器针头扎破。ELISA试剂盒使用时需留心的细节：（1）不管是试剂盒，还是其它产品，在使用之前都要仔细阅读说明书，同时确定试剂盒是不是在有效期内。（2）标本制备要规范，每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备（贮存），尽量分装做备份，短期内无法实验者，注意低温保存。（3）根据检测标本数量确定所需试剂盒的量。（4）按说明书将所用试剂盒平衡至室温，配制所需试剂盒，DIY夹心法ELISA常见技术指南。（5）选择抗体时最好选择一个单抗和一个多抗进行配对，若选择两个单抗，必须识别不同表位的抗体，最好从同一家公司选择抗体。（6）若使用过氧化物酶作为显色系统，应严禁在洗液和稀释液中加叠氮钠，叠氮钠可抑制过氧化物酶的活性。（7）当测定混合液体中的抗原时，如血清，建议在标本稀释液中加不相干的Ig。（8）准备好所有实验额外所需物品，如试管、吸头、移液器、离心机等。ELISA试剂盒已成为国内生命科学领域产品的主要供应商之一，代理许多国际先进水平的高科技产品，包括分子生物学、细胞生物学、免疫学等多个研究及应用领域，期待能与更多科研单位深入合作，共同打造生物行业一片蓝天。

ELISA试剂盒血清在动物细胞培养中起的作用ELISA试剂盒与你共享血清在动物细胞培养中起着多方面的作用如下：A  供应细胞生计和增殖所必需的生长调理因子。B  补偿根底培养基中没有或量缺少的营养成分。C 富含一些可供贴壁细胞型细胞贴壁生长的基质成分。D 供应载体蛋白，可联络维生素、脂质、金属离子等。E 在一些情况下，中和毒性物质维护细胞不受损害。F 给培养液供应杰出的缓冲系统。G 供应蛋白酶克制剂，维护细胞免受死细胞开释的蛋白酶的损害。细胞也存在一些害处，比如存在不少有害成分（补体、免疫球蛋白和一些生长克制因子等）；血清成分不明确，影响对作用的剖析；不一样动物、不一样批次的血清成分和活性有很大不一样，使得培养作用不稳定。尽管如此，血清仍然是培养液中最根本的添加物，尤其是在原代培养或细胞生长情况不良时，常常会先运用有血清的培养液进行培养，待细胞生长旺盛后再换成无血清培养液。血清中富含蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等，其间蛋白质主要为白蛋白和球蛋白。氨基酸有多种，是细胞构成蛋白质的根本成分，其间有些氨基酸动物细胞自身不能构成（称为必需氨基酸），必须由培养液供应。血清激素有胰岛素、生长激素等及多种生长因子（如表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、类胰岛素生长因子等）；血清还富含多种不知道的促细胞生长因子、促贴附因子及其他活性物质，能推动细胞的生长、增殖和贴附。因此，细胞培养时，要保证细胞能够顺利生长和增殖，一般需添加十%～20%的血清，动物血清还可起到酸碱度缓冲液的作用。

ELISA试剂盒的结构质量ELISA试剂盒而特异性与反应物的结构有密切关系，这便是一种变构酶的活性。还有一点便是与其代谢途径有关。这么我们就能得出，DNA中，核苷酸的不一样摆放次序可以经过ELISA试剂盒产生不一样的表达效果，ELISA试剂盒这就展示出它们是不一样基因的实际。从组织和功用下手在，只是了解ELISA试剂盒的一个初步，还有很多的问题等着我们正本，例如：激素、亚细胞结构、抗原、抗体、同类细胞是怎样彼此辨认的等。如今在上，很多首要的疾病诊断标志物均运用酶联免疫测定方法来查看，如抗HAV IgM，乙肝“两对半"、抗HCV，抗HIV，ELISA试剂盒梅毒抗体、优生优育TORCH系列、性病病原体的抗原或抗体等传染性病原体血清标志物、激素、肿瘤标志物、自身抗体、特种蛋白、细胞因子和治疗药物以及HBVDNA，HCV-RNA，遗传病基因、肿瘤基因、基因突变等，这些标志物直接关系到患者的诊断和治疗。ELISA试剂盒一种生物或活性物质，只需有方法得到其特异的抗体，就可以树立这种物质的酶联免疫测定方法。从生物化学的角度上说ELISA试剂盒，必须先了解细胞结构和细胞的亚结构和一些细胞的功用，还有便是一些生物分子之间的结构和功用。只要对这方面的知识有必定的了解后，才能对ELISA试剂盒有一些开始的知道。细胞中用于生物催化的蛋白质，通常我们称之为“酶"。酶的催化功率和它的活性有关，而酶的活性与它自身的分子结构有着千丝万缕的联络。在曾经看来一些难以进行质量测定的微量生物活性物质。酶联免疫测定技术从低活络的免疫沉淀和免疫凝集反应进入到了高活络的放射免疫、酶免疫、荧光免疫和发光免疫测定时代，可见酶联免疫测定更多的是用于生物活性物质的微量测定。ELISA试剂盒的测定方法是以抗原抗体间的特异反应为根底的，其与生化的化学反应有着实质的区别，并且由于符号物如同位素、酶、荧光素、微量元素、发光物质等的掺人。

ELISA试剂盒血清标本应趁新鲜使用ELISA试剂盒血清标本宜在新鲜时检查。如有细菌污染，菌体中也许富含内源性HRP，也会发作假阳性反应。如在冰箱中保留过久，其间的可发作聚合，在间接法ELISA中可使本底加深。ELISA的操作因固相载体的构成不一样而有所区别，国内医学查验一般均用板式点。血浆中除尚富含纤维蛋白原和抗凝剂外，别的成份均平等于血清。制备血浆标本需借助于抗凝剂，而血清标本只需待血清天然凝结、收缩后即可获得。除特殊情况外，在医学查验中均以血清作为检查标本。在ELISA中血浆和血清可平等使用。血清标本可按惯例办法收集，应留意防止溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为符号的ELISA测定中，溶血标本也许会增加非特异性显色。ELISA试剂盒在5天内测定的血清标本可放置于4℃，超越一星期测定的需低温冰存。冻住血清融解后，蛋白质有些浓缩，散布不均，应充沛混匀宜轻缓，防止气泡，可上下颠倒混和，不要在混匀器上强烈振动。混浊或有沉积的血清标本应先离心或过滤，澄清后再检查。自配的缓冲液使用pH计丈量较正。重复冻融会使抗体效价跌落，所以测抗体的血清标本如需保留作多次检查，宜少数分装冰存。保留血清自收集时就应留意无菌操作，也可加入恰当防腐剂。按试剂盒说明书的请求预备实验中需用的试剂。ELISA顶用的蒸馏水或去离子水，包括用于洗涤的，应为新鲜的和高质量的。有些标本可直接进行测定（如血清、尿液），有些则需经预处理（如大便和某些分泌物）。大多数ELISA检查均以血清为标本。从冰箱中取出的实验用试剂应待温度与室温平衡后使用。ELISA试剂盒中本次实验不需用的有些应及时放回冰箱保留。

研究人员力劝在复活灭绝物种时要谨慎 研究人员试图使用基因编辑技术让已灭绝的冰川时代猛犸象复活的新闻吸引了公众的注意。虽然前景非常有趣的，但许多人也提出反对。这个项目颇具争议，例如复活一个没有社会群体的生物是否是道德的，而整个动物复活项目也不是不存在潜在问题。最近在《自然》杂志上发表的一项新研究强调了其中一些问题，力劝科学家和相关组织考虑复活灭绝生物的估算成本。其中一个重要的问题是，保护复活的灭绝物种的成本可能超过保护更大数量现有物种的成本。另外，现有物种的保护工作可能受到影响，而复活的灭绝物种在适应失态系统时也可能会遇到麻烦。 最终，用于保护灭绝物种的有限预算可能导致现有物种的灭绝。研究人员敦促环保主义者和科学家关注现有物种，而不是令它们面临危险或灭绝的风险。 

疱疹病毒触发自闭症近日，一项新研究显示，单纯性疱疹病毒Ⅱ型（HSV-2）感染可能导致自闭症。科学家发现，怀孕初期感染活动性HSV-2的女性生下出现自闭症谱系障碍（ASD）的男性婴儿的几率为未感染女性的两倍。“这是一篇非常重要的论文。”未参与该研究的美国加州大学戴维斯分校行为神经免疫学家Karen Jones表示。该研究为自闭症与妊娠感染的关联性提供了首个免疫学证据。哥伦比亚大学和挪威公共卫生研究所的科学家研究了自闭症出生组研究项目中的442位孩子患有ASD的母亲，并将相关数据与464位后代没有患ASD的母亲进行了比较。进行比较的两组孩子出生于1999年至2008年间的相同月份和年份且性别相同。研究结果刊登在mSphere上。研究人员主要研究了ToRCH病原体——弓形虫、风疹病毒、巨细胞病毒以及HSV-1和HSV-2，妇女怀孕期间暴露于这些病原体会引发流产、出生缺陷等问题。他们采集了怀孕大约18周时以及孩子出生时的血样，分析了每种ToRCH病原体的抗体水平。结果显示，对HSV-2的高抗体水平与ASD风险有关。而且，这一关联只在怀孕初期抽取的血液样本中是明显的，胎儿神经系统在这时会快速发育。而其他病原体没有类似结果。这也与早前的流行病学数据相吻合——怀孕初期到中期母体免疫系统的活化与后代长期的发育和行为问题存在关联。不过，研究人员还表示，ASD的发生是受遗传易感性和环境因素影响的。还需要进一步的研究判断怀孕期间是否需要筛查和抑制HSV-2感染。此外，样本中患有ASD的女婴数量很少，所以还没有足够的证据能证明该影响是分性别的。据悉，美国约有1/5的女性携带HSV-2，经过初次发作后，该病毒会存在于神经细胞中，通常处于不活跃状态，随着人体对其形成免疫力，复发率会降低。

在体内仅需阻断两个基因就可高效地将α细胞转化为β细胞在一项新的研究中，来自来自美国、加拿大、瑞士和挪威的研究人员发现在活的小鼠体内，仅需阻断两个基因的表达就能够诱导胰腺中的α细胞快速地和高效地变成产生胰岛素的β细胞。他们对来自糖尿病供者死后的胰腺的研究还提示着α细胞的“职业改变”也在糖尿病患者体内自然地发生，但是仅是少量地和更慢地发生。这项新的研究提示着科学家们可能有朝一日能够利用这种细胞命运的天然灵活性在人体内诱导α细胞转化为β细胞，从而缓解糖尿病症状。相关研究结果于2017年2月16日在线发表在Cell Metabolism期刊上，论文标题为“Converting Adult Pancreatic Islet α Cells into β Cells by Targeting Both Dnmt1 and Arx”。论文通信作者为美国斯坦福大学医学院发育生物学教授、医学教授Seung Kim。论文第一作者是斯坦福大学医学院博士后研究员Harini Chakravarthy博士。Kim说，“为糖尿病患者仔细地评估所有潜在的新的β细胞来源是比较重要的。如今，我们发现是什么让α细胞保持α细胞的身份，并且发现一种方法在活的动物体内将它们高效地转化为与胰腺中的β细胞几乎无法区分开的细胞。这是非常激动人心的。”作为资助1型糖尿病研究的JDRF机构的创新研究主任，Andrew Rakeman博士（未参与这项研究）说，“将α细胞转分化为产生胰岛素的β细胞是一种非常有吸引力的恢复1型糖尿病中的β细胞功能的疗法。通过鉴定调节α细胞-β细胞转化的通路和证实这些通路在来自1型糖尿病患者的胰岛中也是有活性的，Chakravarthy博士和她的同事们在实现α细胞转分化的治疗潜力的目标上迈出了重要的一步。”食物对葡萄糖水平的影响胰腺中的β细胞和α细胞负责调节人体对就餐后血液葡萄糖水平的上升和下降作出的反应。当葡萄糖水平上升时，β细胞释放胰岛素，指示整个人体中的细胞储存这种糖分子，供以后使用。当葡萄糖水平下降时，α细胞释放胰高血糖素，从而促进储存的葡萄糖释放。尽管1型和2型糖尿病主要与β细胞的数量下降相关联，但是有迹象表明α细胞也在这两种疾病中存在功能障碍。Kim说，“在一些情形下，α细胞可能实际上分泌出太多的胰高血糖素。当不存在足够的胰岛素时，过量的胰高血糖素就好比是火上浇油。”这些研究人员认为人体具有大的α细胞库，而且这些α细胞有时分泌太多的胰高血糖素，因此，将一些α细胞转化为β细胞应当是耐受良好的。这项新的研究是建立在一家瑞士实验室几年前在小鼠体内开展的一项研究之上。那项研究已证实当β细胞受到破坏时，胰腺中大约1%的α细胞开始看起来和表现得像β细胞。但是这发生得非常缓慢。Kim说，“那项指标研究所缺乏的是对这种转化机制的理解。但是针对主调控因子可能是什么，我们基于我们自己的研究，提出一些看法。”Chakravarthy和她的同事们靶向两种主要的候选物：蛋白Arx，已知它在α细胞产生期间发挥着重要作用；蛋白DNMT1，它可能通过维持它的DNA上的化学标记，有助α细胞“记住”如何保持α细胞的身份。他们千辛万苦地培育一种实验室小鼠品种：当通过饮用水让它们服用一种化合物时，它们的胰腺α细胞不能够产生Arx和DNMT1。他们观察到在这些小鼠体内阻断这两种蛋白产生7周内，α细胞快速地转化为看起来像是β细胞的细胞。为了证实这种转化，通过与斯坦福大学医学院生物工程教授、应用物理学教授Stephen Quake实验室合作，这些研究人员研究了所产生的这些细胞的基因表达模式。他们也将这些细胞运送到来自加拿大阿尔伯塔大学和美国伊利诺伊大学的合作者们那里，以便测试它们的电生理学特征，以及它们是否和如何对葡萄糖作出反应。Kim说，“通过我们的同事们和合作者们开展的这些大量的研究，我们发现这些细胞在每个方面显著地类似于天然的β细胞。”在人细胞中测试这一理论这些研究人员随后将他们的注意力转移到来自糖尿病供者和非糖尿病供者死后的人胰腺组织。他们发现来自死后一到两年内经诊断患上1型糖尿病的儿童的胰腺组织样品包括一部分产生两种激素的细胞，它们产生胰高血糖素和胰岛素。Kim和他的同事们认为他们可能捕捉到正在转化为β细胞的α细胞，作为对糖尿病产生作出的反应。他们也观察到来自糖尿病供者的人α细胞样品不表达基因ARX和DNMT1，而在小鼠体内，这两个基因的表达会阻断α细胞转化为β细胞。Kim说，“因此，相同的基本变化可能也在1型糖尿病患者体内发生。这表明利用靶向方法阻断糖尿病患者胰岛中的这两个基因的表达或者控制它们的信号来提高α细胞转化为β细胞的比例可能是可行的。”

安定药为胰腺癌治疗带来新希望导管腺癌是最常见的一种胰腺肿瘤，这种疾病的康复率很低不仅是因为早期诊断存在困难，还因为缺少特异性的药物治疗方法。最近发表在国际学术期刊Scientific Reports上的一项研究为导管腺癌的治疗带来了新的希望。研究人员发现一种一直用于焦虑症治疗的药物分子能够干扰一种参与癌症发育过程的蛋白分子的活性。这个叫做Nupr1的蛋白与胰腺癌的关系从上世纪90年代就开始得到证明。“在这项研究中，我们对超过100种已经得到批准用于各种治疗用途的药物分子进行筛选，将实验技术与计算机模拟结合使得我们能够发现一些与Nupr1相互作用的药物。体外实验证明这些筛选出来的化合物能够降低肿瘤细胞的活力，抑制肿瘤细胞的迁移，完全抑制肿瘤细胞的克隆形成能力。我们将最有效的化合物用在异种移植的小鼠模型上证明这种药物能够完全阻止胰腺癌的发展。这种叫做trifluoperazine的分子一直用于焦虑症的治疗，我们证明这种药物还具有抗肿瘤作用，作用效果甚至好于最有效的化疗药物。”文章作者Bruno Rizzuti这样说道。除此之外，这项工作还在蛋白结构研究方面迈出重要一步。“一个蛋白的构象应该是独特的，确保每一个分子及其都能执行特定的功能。发生紊乱的蛋白推翻了这一原则的有效性，这种蛋白存在灵活的结构，能够在细胞交流和调节方面发挥多种功能。但是缺少确定的结构元件是开发特异性药物阻止蛋白发挥作用所面临的一个不可逾越的障碍。”Rizzuti这样表示。发现能够抑制这种紊乱蛋白的活性分子是非常重要的一步，为找到更多药物靶点提供了可能性。

重磅！维生素D可阻止急性呼吸道感染在一项新的研究中，来自英国、美国、瑞典、以色列、意大利、加拿大、新西兰、比利时、芬兰、澳大利亚、波兰、印度和日本的研究人员发现维生素D补充剂可阻止包括感冒和流感在内的急性呼吸道感染。相关研究结果发表在2017年2月15日的BMJ期刊上，论文标题为“Vitamin D supplementation to prevent acute respiratory tract infections: systematic review and meta-analysis of individual participant data”。这项研究提供迄今为止最为强大的证据证实维生素D不止对骨骼和肌肉健康有益处，而且可能对公共健康政策产生重大的影响，如在英国，往食物中添加维生素D以便消除较高比例的维生素D缺乏。这项新的研究涉及大约11,000名参与者，这些参与者参加了在14个国家开展的25项临床试验。这些研究人员对来自这些参与者的原始数据进行一番新的分析后获得上述的研究结果。单独而言，这些临床试验产生互相冲突的结果：一些临床试验报道维生素D阻止呼吸道感染，而其他的临床试验报道它没有效果。论文通信作者、英国伦敦大学玛丽皇后学院的Adrian Martineau教授说，“这项大型的合作研究产生首个确凿的证据证实维生素D确实阻止呼吸道感染。将来自10,933名临床试验参与者中的每一个人的原始数据汇集在一起，并进行分析，这就允许我们解决了一个棘手的问题：为何维生素D在一些临床试验中有效果，而在其他的临床试验中没有效果？”“结果就是维生素D补充剂的保护效应在具有最低维生素D水平的那些参与者体内是最强的，而且每天或每周服用这种补充剂的效果要比间隔更长时间服用更好。”“往食物中添加维生素D提供一种稳定的低水平的维生素D摄入，这已几乎消除了几个国家中存在的维生素D严重缺乏。通过证实维生素D的这种新的益处，我们的研究进一步支持往食物中添加维生素D改善一些国家国民的维生素D水平，比如，在英国，维生素D严重缺乏是比较常见的。”维生素D，也被称作阳光维生素，被认为通过提高肺部中的抗菌肽（即天然的类似抗生素的物质）水平，阻止呼吸道感染。这项研究的结果符合人们观察到的现象：感冒和流感在冬季和春季最为常见，这是因为在这两个季节，人体的维生素D处于最低水平。它们可能也解释了为何维生素D抵抗哮喘发作。哮喘通常是由呼吸道病毒触发的。在具有最低的维生素D基线水平（低于25 nmol/L）的人当中，每天或每周服用维生素D补充剂让他们遭受急性呼吸道感染的风险减少。当然，具有更高的维生素D基线水平的人服用维生素D也会受益，只不过效果更加温和：风险降低10%。总体而言，服用维生素D导致的急性呼吸道感染风险下降相当于可注射的流感疫苗抵抗流感样疾病的保护效应。急性呼吸道感染是全球发病率和死亡率的一个主要原因。感冒和流感等上呼吸道感染是看医生和几天时间不能工作的最为常见的原因。肺炎等急性下呼吸道感染则并不那么常见，但是据估计在2013年，导致全球265万人死亡。补充维生素D是安全的和便宜的，因此补充维生素D导致急性呼吸道感染风险下降可能是极具成本效益的。

突破！科学家提出阿司匹林防癌的新机制如今多项研究都发现古老而又简单的药物—阿司匹林能够有效抑制癌症，然而阿司匹林目前并不是治疗任何一种癌症的主流疗法，美国预防工作小组推荐特定成年人服用阿司匹林来有效预防结直肠癌的发生；但研究人员一直非常困惑这种特效药到底是如何发挥作用来抵御癌症的，很多人认为这或许和阿司匹林降低炎性水平的效应有关。日前，一项刊登在国际杂志Cancer Prevention Research上的研究报告中，来自美国退伍军人事务处的研究人员通过对小鼠和细胞培养物进行成功检测，提出了一种新的理论，研究者表示，阿司匹林的抗癌特性或许同药物对血小板的影响有关，血小板是一种能够形成血凝块来阻断机体流血的关键血细胞。在伴随凝血的过程中，血小板在心血管的形成上也扮演着关键角色，在正常情况下这种作用是非常有益的，比如当机体出现伤口开始形成新的血凝块时，新生血管就会被重新更改血流量；但相同的作用还会帮助肿瘤进行生长，而阿司匹林就能够干扰这种过程的发生，实验室中研究人员检测了阿司匹林如何通过关闭COX-1酶类的作用来阻断血小板和癌细胞之间的相互作用，从而来有效抑制循环学校办的数量及其活性。有些实验研究会从当地的药店购买普通的阿司匹林进行研究，但在另外一种阶段下，研究人员利用特殊制备的阿司匹林结合磷脂酰胆碱（一种脂质分子）来进行实验，磷脂酰胆碱是大豆卵磷脂(soy lecithin)中的一种主要成分，如今PLx制药公司开发的名为阿司匹林-PC/PL2200（Aspirin-PC/PL2200）的产物就能够降低机体使用标准阿司匹林带来的胃肠道风险。相比普通的阿司匹林而言，这种增强的阿司匹林复合物能够更加强大地抵御癌症，研究人员在文章中写道，阿司匹林产生化学防癌的效应或许部分是因为其能够阻断血小板的促肿瘤产生行为，而且阿司匹林-PC/PL2200还能够作为一种潜在有效且安全的化学预防制剂来帮助抵御结直肠癌和其它类型的癌症。研究者Lenard Lichtenberger在PLx制药公司也拥有股份，他表示，目前公司正在开发新型的以脂质为基础的阿司匹林（商标名称为Aspertec），而且并没有人报告存在潜在的利益冲突。如今研究小组计划联合美国安德森癌症中心（MD Anderson Cancer Center）的研究人员对高风险结直肠癌患者进行研究来检测这种基于脂质的阿司匹林复合物的安全性及效果；同时研究人员还指出，本文研究结果到目前为止支持使用低剂量的阿司匹林来作为个人的化学防癌措施，而且阿司匹林-PC/PL2200似乎也具有和低剂量阿司匹林相类似的化学防癌效果，而且或许更加有效。

科学家定量化研究免疫细胞和个体乳腺癌风险之间的关联日前，一项刊登在国际杂志Clinical Cancer Research上的研究报告中，来自梅奥诊所的研究人员通过研究定量化地分析了多种类型免疫细胞的数量和个体患乳腺癌风险之间的关联。研究者Amy Degnim博士表示，这项研究中我们首次分析了乳腺组织中多种类型免疫细胞的数量以及是否这些免疫细胞和个体后期乳腺癌发病风险之间存在一定关联。我们的研究提供了一定证据，阐明了免疫系统在促进或抑制早期乳腺癌发生上所扮演的重要角色；相关研究结果也为研究人员提供了更大的信心来开发预防乳腺癌的免疫相关策略，比如开发新型疫苗等。文章中，研究人员分析了来自捐献者正常乳腺组织以及良性乳腺疾病捐献者的乳腺组织中免疫细胞类型之间的定量差异，良性乳腺疾病就是患者的乳腺中出现了非癌变的一种肿块或乳腺密度加厚。随后研究人员利用来自组织库以及在梅奥诊所诊断为良性乳腺疾病女性个体的样本进行研究，设计了一项乳房组织匹配的病例对照研究，研究者指出，在梅奥诊所诊断为良性疾病的女性后期会患上乳腺癌或继续维持无癌状态。研究结果表明，相比正常乳腺组织而言，良性乳腺疾病个体的乳腺组织中多种类型免疫细胞的数量较高，尤其是树突细胞和巨噬细胞，这两种免疫细胞能够通力合作来产生特殊的机体免疫反应。研究者Degnim最后说道，后期患上乳腺癌的女性个体乳腺组织中产生抗体的B细胞水平往往较低，这或许就支持了一种假设，即免疫系统在个体早期乳腺癌的发生上扮演着关键的角色。

令人意外！发现新的调节细胞衰老的蛋白TZAP在一项新的研究中，来自美国斯克里普斯研究所（TSRI）的研究人员发现一种新的蛋白微调参与衰老的细胞时钟。相关研究结果于2017年1月12日在线发表在Science期刊上，论文标题为“TZAP: A telomere-associated protein involved in telomere length control”。这种新的蛋白被称作TZAP，结合到染色体的末端上，决定着端粒（保护染色体末端的DNA片段）的长度。理解端粒长度是至关重要的，这是因为端粒设定着体内细胞的寿命，决定着衰老和癌症发病率等关键性的过程。论文通信作者、TSRI副教授Eros Lazzerini Denchi说，“端粒代表着一个细胞的时钟。你出生时具有某种长度的端粒。细胞每分裂一次，它就丢失一小部分端粒。一旦端粒变得太短，细胞就不能够再分裂。”自然地，科学家们想知道延长端粒是否能够延缓衰老，而且很多人研究过利用一种特定的被称作端粒酶的酶“微调”这种细胞时钟。一种不足之处在于人们发现不合乎自然规律地延长端粒长度是癌症产生的一种风险因素。Lazzerini Denchi说，“需要对这种细胞时钟进行微调以便允许发生足够多的细胞分裂而在我们的体内产生分化组织和维持可再生的组织，与此同时限制癌细胞增殖。”在这项新的研究中，研究人员发现TZAP控制一种被称作端粒修剪（telomere trimming）的过程，从而确保端粒不会变得太长。Lazzerini Denchi解释道，“这种蛋白为端粒长度设置上限。这允许细胞增殖，但增殖次数不会太多。”在过去几十年来，已知特异性地结合到端粒上的蛋白是端粒酶和一种被称作Shelterin复合体的蛋白复合体。发现特异性地结合到端粒上的TZAP是令人吃惊的，这是因为这个领域的很多科学家们认为不再存在结合到端粒上的其他蛋白。论文第一作者、Lazzerini Denchi实验室研究生Julia Su Zhou Li说，“发现存在一种蛋白复合体特异性地位于染色体末端上，但是在这项发现之前，还未发现特异性地结合到端粒上的蛋白。”Lazzerini Denchi说，“这项研究打开了许多新的令人关注的问题。

eRNA在调节基因表达中发挥着至关重要作用在细胞中，DNA经转录产生RNA，而RNA为细胞表达蛋白提供遗传指令。基因组的大部分经转录产生RNA，但是仅有一小部分RNA确实是来自基因组的蛋白编码区域。美国宾夕法尼亚大学佩雷尔曼医学院宾州表观遗传学研究所主任、细胞与发育生物学教授Shelley Berger博士说，“为什么非编码区域会发生转录？它们的功能是未知的。”Berger、她的实验室博士后研究员Daniel Bose博士研究了增强子对基因表达的调节。增强子是基因组的非编码区域，与基因组的蛋白编码区域相隔较远。增强子提高附近的蛋白编码基因的表达率，因此细胞产生更多的所需的蛋白分子。非编码RNA的一小部分是神秘的增强子RNA（enhancer RNA, eRNA）。它们是由增强子序列经转录而产生的。尽管它们在促进基因表达时起着重要的作用，但是它们如何实现这一点是完全未知的。为了获得关于这些神秘的eRNA的新认识，研究人员证实作为一种激活增强子转录的酶，CBP直接结合到eRNA上。这种简单的行为通过调节乙酰化而控制着有机体中的基因表达模式。乙酰化是一种指导在细胞核中紧密包裹的DNA松弛下来促进转录的化学标记。相关研究结果发表在2017年1月12日那期Cell期刊上，论文标题为“RNA Binding to CBP Stimulates Histone Acetylation and Transcription”。Bose说，“我们体内的细胞具有相同的基因和DNA序列，仅在这些基因如何表达上存在差异。增强子和eRNA在这个过程中发挥着至关重要的作用。我们的研究发现了eRNA产生这些不同的基因表达模式的一个令人兴奋的新方式。我们想知道eRNA是否直接与CBP结合，结果发现它们确实如此。”利用生化检测方法，他们证实CBP结合到eRNA上的区域也能够调节着CBP加入乙酰化化学标记的能力。通过结合到CBP的这个区域，eRNA能够直接地激活CBP的乙酰化活性。Berger说，“在癌症生物学世界，人们对增强子和eRNA越来越关注，这是因为存在缺陷的增强子能够导致太多的或太少的蛋白表达，或者能够导致蛋白编码区关闭或启动，或者能够导致蛋白在错误的时间表达。”鉴于近期对人肿瘤进行的DNA测序结果表明与癌症和其他疾病相关的多种突变发生于基因组的增强子区域而不是蛋白编码区域，因此更多地了解增强子和eRNA如何发挥功能将有助于肿瘤学家。Berger说，“事实上，这是比较重要的，这是因为我们证实eRNA在整个基因组中和体内指导蛋白表达中发挥着关键性作用。我们在全基因组中鉴定出eRNA是结合到CBP上的最为常见的RNA类型，而且鉴定出通过这种相互作用，eRNA在调节CBP活性和基因表达中发挥着一种至关重要的作用。”

上海钰博生物科技有限公司2017年春节放假通知 尊敬的客户及同事们：　　新春伊始，万象更新。上海钰博生物科技有限公司全体员工在此深深感谢您长期以来对我司的支持与厚爱!向您致以最诚挚的祝福和问候!在新的一年里，我司会更加努力，给您提供更优质的服务!　　结合我司的具体状况，公司春节放假时间具体安排如下：　　春节放假时间：1月22日——2月3日(农历正月初七)。2月4日(农历正月初八)恢复正常上班。　　放假期间业务联系电话：陈经理：13816899465。　　因放假给您带来的不便，深表歉意，望见谅!新年来临之际，谨祝您在新的一年里生意兴隆、万事如意、幸福安康!备注：1月22号之前订单请订货时与销售员核实能否在节前发货;1月22号之后的订单，全部在节后安排发货。给您带来的不便，敬请谅解.　　                       上海钰博生物科技有限公司 　　                                2017年1月17

女性医生为什么更加容易使患者康复？研究者们最近发现，接受女医生诊断治疗的老年男性患者，其疾病的复发率以及死亡率都要明显低于接受男性医生诊断的同龄群体。这一证据表明女性医生在对老年男性患者进行诊疗时会有不一样的效果。根据研究者们的说法，如果所有的医生都能够做到女性医师在诊疗男性患者时达到的效果，那么每年的患者死亡人数将会减少32000例。"这一死亡率上的差异令我们十分震惊"，该研究的首席作者，来自哈佛大学的Yusuke Tsugawa说道。"对于患病的人群来说，医师的性别具有更为显著的意义。这一发现表明男性医师与女性医师在诊断治疗策略上的差异对临床结果具有重要的影响"。在该研究中，研究者们分析了美国超过150万例的医疗案例，其中620000例为男性，960000例为女性。他们的主治大夫中有20000名男性与60000名女性。研究者们同时调查了患者住院的原因以及疾病的严重程度。结果显示，接受女性医师治疗的患者其死亡率相比其他患者人群会有4%的下降，另外他们的30天内的二次住院概率也有5%的降低。之后，研究者们排除了女性医师们被有意地分配了较为轻松的患者类型的可能。针对这一结果，研究者们认为女性医师在治疗患者时可能运用了不同于男性同行的手段，尽管目前这一"特殊"的手段并不明确。"虽然此前有大量的证据揭示男女医生在医疗实践中的差异，我们的发现则表明这些差异对患者的健康十分重要"。该文章的通讯作者Ashish Jha说道："我们需要了解为什么女性医师诊疗的患者病情相对较好"。此前研究曾发现，女性医生相比男性同行能够更加严格地遵守医疗规则，而且善于与患者进行沟通。不过，我们还需要更多的研究去揭示是否这些差异能够拯救生命。相关结果发表在《JAMA Internal Medicine》杂志上。

人类舞蹈病的基因缘何让鸟儿不唱歌？ 在宠物市场，模仿能力强、鸣叫声悦耳动听、外表漂亮的鸟儿总是很受欢迎，有歌声婉转动听的画眉鸟，有叫声高亢明亮的夜莺，有高贵漂亮的金丝雀，有羽色艳丽的黄鹂鸟，有象征吉祥的喜鹊，也有擅长模仿的八哥，这些都是供人观赏的宠物鸟。除了宠物鸟，还有一些善于鸣唱的鸟儿，如来自澳洲的斑胸草雀等，由于某些与人类相似的特点，成为研究人类神经科学的一种重要模式动物，为科学的进步作出了巨大的贡献。1、从鸣禽中脱颖而出的模式动物全世界约有4000多种鸣禽，占鸟类总数的一半以上，它们都是属于雀形目的鸟类。鸣禽的发声是鸣禽进行种群和个体识别、信息交流的重要行为，大部分鸣禽的鸣声悦耳，但是一般雄鸟的鸣声更加悦耳动听，而且繁殖季节雄鸟的鸣声最为婉转、响亮，既是为了取悦雌鸟，同时也有吓退竞争对手的作用。鸣禽的鸣声可以分为两类，一类称为鸣叫，是指一些短暂且简单的发声， 是对特定刺激的反应， 是由遗传决定的，另一类称为鸣啭或鸣唱，指的是鸣禽发出的婉转动听的歌声，具有高度模式化和周期性， 必须后天通过模仿和学习获得。鸣禽学习鸣唱的过程与人类婴儿的语言学习颇为相似，可以分为两个阶段，第一个阶段为感觉学习期，幼鸟须反复听到成鸟的鸣唱，在大脑中形成鸣唱模板的记忆；第二个阶段为感觉运动学习期，鸣禽通过听觉反馈将自己发出的鸣唱与模板进行匹配，经过小范围的调整，逐步建立稳定的鸣唱。除了人类，鸣禽这种鸣唱学习的能力在自然界只有几种动物掌握，包括大象、白鲸、海豚和蝙蝠等，而啮齿类动物与人类亲缘关系最近的其它灵长类动物均不具备这一本领。与人类语言学习一样，鸣禽的鸣唱学习也涉及到复杂的神经反应，因此鸣禽已成为研究神经科学，甚至神经性疾病的重要模式动物。斑胸草雀是鸣禽中常见的一种模式动物。它原产于澳大利亚东部、新几内亚的热带森林，属于雀形目梅花雀科的鸟类。由于栖息地遭到破坏等原因，野生的斑胸草雀已经难觅踪迹，但是在世界很多国家的宠物市场都能买到人工养殖的斑胸草雀。同时，斑胸草雀繁殖快、饲养成本低，上世纪五六十年代开始，常被用于脊椎动物的脑、行为和演化研究的模型。近年来，更是有科学家利用转基因斑胸草雀来研究人类神经性疾病的发病机理，以及与发声学习相关基因的功能，展现出鸣禽在科学研究中的重要价值。 图1 模式动物斑胸草雀  来源：pbs2、第一只转基因斑胸草雀转基因禽类的研究历史相对较早，最早转入外源基因的禽类是鹌鹑和家鸡等家禽。这些转基因禽类的研究始于20世纪80年代末，之后转基因技术成为家禽育种和生物制药研究的重要技术。2015年，转基因鸡生产的重组蛋白药物更是获得美国食品药品监督管理局批准上市，成为少数几种实现商品化的转基因动物产品之一。 图2 第一只转基因斑胸草雀（右） 图片来源：proc natl acad sci usa. 2009相对而言，其它鸟类的转基因研究则开展较晚，直到2009年，美国洛克菲勒大学和麻省理工学院的科学家才首次在《美国国家科学院院刊》（pnas）上报道其成功建立转基因鸣禽的制作方法。该研究的对象正是来自澳大利亚的斑胸草雀，而采用的转基因方法则是在转基因鹌鹑和鸡上已相当成熟的技术——慢病毒载体法，不过做了一些重要的技术改进。研究人员将携带绿色荧光蛋白基因的自失活hiv慢病毒注射到鸟蛋的胚胎中，hiv慢病毒会感染胚胎中的生殖细胞，并将外源基因整合到生殖细胞的基因组中，最终获得3只能表达绿色荧光蛋白的转基因斑胸草雀。这些转基因斑胸草雀能正常繁殖后代，幼年雄性转基因斑胸草雀也能正常模仿成年雄鸟的鸣唱，研究人员希望可以将这种转基因斑胸草雀发展成为研究人类语言学习机制的动物模型。2010年4月，一个由美国华盛顿大学牵头，英国、德国等多国科学家参与的联合研究小组宣布破译了斑胸草雀的全基因组序列。他们发现800多个基因与斑胸草雀鸣唱学习记忆相关，当斑胸草雀学习鸣唱时，大脑中的这些基因会产生非常复杂的“网络反应”，最终帮它学会特有的“歌声”。斑胸草雀基因组是继2004年鸡基因组测序完成之后第二个被测定的鸟类基因组，将有助于研究有神经功能、参与叫声认知处理的基因，以及这些基因的进化。还有专家指出，基因组序列明晰的斑胸草雀能够帮助人们了解人类的诸如孤独症、中风、口吃、帕金森症等言语失常病症的病源。当然这些研究更多地需要借助转基因技术。3、这些鸟儿为什么不能唱歌很快，美国洛克菲勒大学动物行为实验室的研究人员就研制出了一种鸣唱学习能力严重受损的转基因斑胸草雀，而这次转入的基因则是人突变型亨廷顿基因。为什么转入人突变型亨廷顿基因呢？原来亨廷顿氏病（huntington‘s disease）是欧美国家较为常见的一种遗传疾病，主要表现为运动障碍和认知退化，也表现出口吃、错误发音、语言学习能力弱等障碍。亨廷顿氏病人之所以患病，主要因为其携带有突变型的亨廷顿基因，即该基因的第一个外显子中有一些三联核苷酸（cag）重复。正常人群的cag重复少于26个，自己和后代都不会得病，当某个人的cag重复数为27-35个时，自己不得病，后代有较小的概率患病，但重复数等于或大于36个时，自身则会表现出症状，而且后代有50%的概率患病。亨廷顿基因突变后，其编码的蛋白质含有过多的谷氨酸，引起大脑纹状体和皮质区域的神经退行性变，是导致亨廷顿氏病的重要原因之一。2015年11月，美国洛克菲勒大学的研究小组在《自然·神经科学》（nature neuroscience）首次报道了一种携带人突变型亨廷顿基因的斑胸草雀模型，不仅表现出与人亨廷顿氏病相似的一些典型症状，其鸣唱学习能力也严重下降。研究人员同样采用自失活慢病毒载体法，将人亨廷顿基因整合到斑胸草雀的基因组中，获得了8只转基因斑胸草雀，其中5只整合的人亨廷顿基因含有145个cag重复，另外3只则含有23个cag重复。在两年的实验中，5只携带突变型亨廷顿基因（145个cag）的转基因斑胸草雀生长性状与非转基因鸟没有显着差异，但是均表现出一定的身体颤抖，并偏好高蛋白食物，其中2只成年突变型斑胸草雀在实验后期还表现出严重的身体颤抖、重心不稳等典型亨廷顿氏病症状。为了验证这些突变表型，该研究小组还制作了携带人突变型亨廷顿基因的转基因金丝雀，也表现出运动障碍和认知退化，而且更严重。值得注意的是，这些突变型雄性斑胸草雀的鸣唱学习能力严重受损，在孵出53天以后，处于感觉学习期的突变型雄性斑胸草雀只能模仿非转基因成年雄鸟鸣唱声的少数几个音节，甚至什么音节也学不会，而成年的转基因雄鸟则不能按音节顺序进行重复而稳定地鸣唱。进一步的研究表明，这些症状与亨廷顿氏病相关的神经病变和皮质基底神经节鸣唱回路的失能有关。携带人突变型亨廷顿基因的斑胸草雀将为研究人类语言学习能力的机制提供一个不错的动物模型，也有望为治疗与皮质基底神经节相关的语言和运动障碍提供帮助。4、发现影响鸟儿鸣唱学习能力的基因同一年，日本京都大学的科学家也培育出一种转基因斑胸草雀，用于研究特定基因与鸣唱学习能力相关性。该转基因斑胸草雀也是采用了慢病毒载体法，转入了一个名叫creb蛋白（camp反应元件结合蛋白）的基因突变体。creb蛋白是一种研究得较为透彻的神经元基因转录调控因子，之前日本独协大学的研究显示，鸣禽creb蛋白的激活与成年鸣禽对其它鸟鸣声的辨别和回应相关，但是其在鸣禽的鸣叫学习或听觉辨别中扮演什么角色还不是很清楚。日本京都大学研究人员将突变型creb蛋白基因转入斑胸草雀早期胚胎，培育出一批健康的转基因斑胸草雀，其表达的外源突变型crfb蛋白能与内源crfb蛋白组成二聚体，影响crfb蛋白对相关基因转录的调控。研究人员共培育了两种转基因草雀，第一种的外源creb蛋白第119个氨基酸由丝氨酸变成丙氨酸，表达磷酸化修饰缺乏型creb蛋白，导致其介导的基因转录水平显着降低，第二组外源creb蛋白第120个氨基酸由酪氨酸变成苯丙氨酸，creb蛋白表达过量，导致其介导的基因转录水平显着提高。为了测试转基因斑胸草雀的听觉记忆构建能力，研究人员专门设计了一个有趣的测试方法，将每只转基因斑胸草雀单独关在一个隔音室内，用录音机从与转基因草雀没有亲缘关系的普通班胸草雀录下5段不同鸣唱曲，通过扬声器随机播放给转基因草雀和对照的非转基因草雀，并在第1段特定鸣唱曲之后，加入了乌鸦的鸣叫声，安静片刻后马上播放其它4段草雀的鸣唱曲。结果非转基因草雀在听到乌鸦叫声后，会表现出一种僵住的条件反射，似乎识别出该叫声并非其同伴的鸣唱声，到第四次训练，对照组开始减少模仿乌鸦鸣叫声，第二天也能保持这些记忆，而上述两种转基因草雀则不能识别乌鸦鸣叫声，只是creb蛋白过量表达的转基因草雀在最后一次，也就是第八次训练中表现出僵住的条件反射。同时，研究人员也对转基因幼鸟的鸣唱学习能力进行了测试，以一只成年雄性斑胸草雀为鸣唱教练，通过观察转基因草雀和非转基因草雀模仿发出的鸣唱声与教练的鸣唱声相似度差异，来判断转基因是否影响幼鸟的鸣唱学习。结果显示，表达磷酸化修饰缺乏型creb蛋白的转基因草雀鸣唱相似度明显低于对照组，而creb蛋白过量表达的转基因草雀鸣唱相似度则与对照组相当，而且随着年龄增长，后者和对照组的鸣唱声与模仿对象的鸣唱声相似度还会逐渐提高。以上结果表明，正常的creb蛋白活性对于鸣禽的鸣唱学习能力获得至关重要。目前，对转基因斑胸草雀的研究还处于起步阶段，还需进一步深入开展研究，未来也可能出现更多的转基因鸟类，鸣禽鸣唱学习行为的神经学分子机制必将更加清晰，转基因鸟类也将为研究人类语言学习的神经学机制、相关神经性疾病的发病机理和治疗良方发挥重要作用。 

华东师大学者在Nature子刊发表治疗胰岛素抵抗智能传感器的重要研究成果 随着生活水平的不断提高，人们的生活质量尤其是饮食方面有了显著的改善。但大量高脂、高糖食物的摄入，大大提高了人们患高血糖、高血脂等为特征的胰岛素抵抗综合症风险，严重影响了人们的健康安全。胰岛素抵抗是由于多种因素使胰岛素促进葡萄糖摄取和利用的效率下降，机体代偿性的分泌过多胰岛素产生高胰岛素血症，以维持血糖的稳定。胰岛素抵抗易导致代谢综合征和II型糖尿病等代谢疾病。来自华东师范大学和瑞士苏黎世联邦理工大学的研究者们，为了实现胰岛素抵抗诊疗目的，他们利用合成生物学的策略，设计构建了一种智能胰岛素传感器，并应用于胰岛素抵抗综合症的诊疗。该研究成果发表在Nature子刊Nature Biomedical Engineering。领导这一研究的为来自瑞士苏黎世联邦理工大学的Martin Fussenegger教授和来自华东师范大学的叶海峰研究员，两人是本研究的共同通讯作者。他们巧妙地设计、合成了一种能自我回馈调节的胰岛素传感器，可以高效识别血液中胰岛素水平，当血液里的胰岛素超过一定阈值后，其可以调控表达脂联素(Fc-adiponectin)，从而缓解胰岛素抵抗症状起到治疗效果（下图）。人工智能胰岛素传感器设计及其胰岛素抵抗治疗策略示意图为了验证该胰岛素传感器在体内长期的诊疗效果，他们成功筛选到了一株含有胰岛素传感器的稳转细胞系HEKIR-Adipo，通过微囊包裹技术，并移植到胰岛素抵抗性糖尿病、肥胖症、饮食诱导性肥胖症等多种高胰岛素血症小鼠模型中，通过自动感应血液胰岛素浓度的变化，精准调控细胞表达脂联素(Fc-adiponectin)，有效地降低血脂和血糖从而缓减胰岛素抵抗的症状。实验数据表明，该胰岛素传感器在体内可以长期监测胰岛素水平并协同表达脂联素，从而起到缓解胰岛素抵抗症状的治疗效果（下图）。该胰岛素感受器有利于治疗早期糖尿病。这种自给自足式的基因线路设计在监测某种代谢疾病标记物时能同时协调表达治疗药物，这样的治疗设计理念将有望引领未来个性化精准医疗新时代。胰岛素传感器在胰岛素抵抗的肥胖模型鼠（ob/ob）体内长期诊疗效果注：叶海峰在博士和博士后期间（2007.8-2013.12）师从国际知名合成生物学专家Martin Fussenegger教授，于2014年3月回国受聘为华东师范大学“紫江优秀青年学者”，担任生命医学研究所生化与分子生物学专业研究员、博士生导师。主要从事合成生物学与生物医学工程领域的研究。Martin Fussenegger教授于2016年初被聘为华东师范大学荣誉教授。该研究得到国家自然科学基金优秀青年基金、面上项目、上海市科委项目、青年千人计划以及华东师范大学人才队伍建设等经费资助。论文的三位主要作者，由左至右依次是叶海峰、Mingqi Xie和Martin Fussenegger，叶海峰和Martin Fussenegger为论文通讯作者论文发表花絮：该文从投稿到发表已经接近三年了，第一次投稿Science送审后要求补实验，一补就是大半年将近一年的时间过去了，补完数据后审稿人还有其它要求然后就换了现在这个杂志投稿，结果面临的是相同的类似问题，最终该课题组成员合作完成了后续重要的实验后论文才最终顺利接受。Nature Biomedical Engineering杂志是今年Nature出版集团新增的5种子刊之一，该杂志将面向在实验室从事研究，以了解或抗击各种疾病的科研人员、临床医生和工程师。该刊横跨生命科学、自然科学和工程学，涵盖材料、治疗方法和器材等领域，旨在理解、诊断或改善各种临床和卫生背景下的人类健康问题。值得一提的是该杂志比较有意思的一个特色是推出了一个“Behind the Paper”的专栏，专门邀请论文的主要作者对发表的工作的研究背景和动机写一个简短的介绍，以增进读者对论文更好的阅读和理解 。

癌症在原发肿瘤形成前即可扩散和转移12月15日由美国西奈山伊坎医学院和德国Regensburg大学在Nature在线发表的两篇论文揭示：即使在原发性肿瘤形成之前，具有某些分子改变的乳腺癌细胞即可扩散到其他器官，先长时间保持沉默，然后被唤醒形成侵略性的、致命的乳腺癌转移。研究人员说，他们发表在Nature中的发现是在动物模型中开展实验，并在人体样本中进行测试而获得的。这些发现解决了在这种新的肿瘤早期传播和转移模型中，不产生原发性肿瘤时，转移性乳腺癌如何形成的秘密。甚至，研究人员说临床上原发性肿瘤有可能从不会形成。两个团队现在都已经确定了允许细胞在癌症进展中早期传播并促进转移的机制。1西奈山团队发现乳腺癌无原发肿瘤即可转移在西奈山的研究中，乳腺癌细胞的两个变化（一个开启的癌基因和一个关闭的肿瘤抑制基因）促使细胞从乳腺组织迁移到肺部和身体的其他部位。在那里，细胞保持静止，直到生长开关被激活并且在肺里出现转移瘤。研究的通讯作者，西奈山的Julio A. Aguirre-Ghiso博士说：“这项研究提供了洞察早期癌症传播的机制，并可能阐明了一些不明现象的原因：为什么全世界多达5％的癌症患者在没有原发性肿瘤的情况下却有癌细胞扩散？最重要的是，为什么这种早期扩散的癌症如此难以治疗。在生物学上，这种早期转移的新模式挑战了我们所知道的癌症如何扩散和形成转移瘤的一切，我们将不得不调整我们关于肿瘤转移话题的想法，我们希望这些发现将重塑我们思考如何治疗肿瘤转移的方式。”西奈山研究团队的一个重要发现是：大多数早期扩散的细胞保持着休眠状态，而大多数化疗和靶向治疗针对的是那些增殖性细胞。因此，早期扩散的癌细胞会逃避这些常规治疗，即使它们已经杀死了原发性肿瘤。这项工作还提出了新的问题：早期扩散的癌细胞是如何促进肿瘤转移发展的？光是它们自己做到这点的吗？它们为后来到达的早期没被捉住的肿瘤细胞铺设了土壤还是与后来到达的癌细胞合作实现的？这项研究表明：完全理解如何靶向转移的癌细胞，必须探索早期扩散的新生物学机制。

科学家有望开发出新型靶向性药物 彻底根治癌症不是梦！日前，一项发表在国际杂志ACS Chemical Biology上的研究报告中，来自加利福尼亚大学的研究人员表示，癌症研究者和药物制造商们往往或许会迅速忽略掉一系列对靶向特殊细胞蛋白的调查研究；机体中的每个细胞都会促死亡蛋白和抗死亡蛋白，二者之间能够相互作用，从而抵消彼此的功能，这两种蛋白之间健康的平衡是一种自然的过程，比如损伤的细胞会产生较多的促死亡蛋白，从而导致疾病细胞被自然消除，该过程称之为细胞凋亡，因此这两种蛋白被分别命名为促凋亡和抗凋亡蛋白。在癌细胞中，遗传改变会导致抗凋亡蛋白的过量产生，最终使得癌细胞能够不断生长并且对当前疗法产生一定的耐受性。因此这种抗凋亡蛋白就能够作为新型抗癌药物的靶点，Bcl-2就是6种抗细胞凋亡蛋白的其中一种，同时其也是被研究的最多的一种蛋白，2016年FDA批准的药物Venetoclax就以Bcl-2为作用靶点。但如果癌细胞对该药物产生耐受性该怎么办？是不是该药物仅以Bcl-2为作用靶点呢？基于此前利用小鼠机体蛋白进行的研究，研究人员和制药公司就将目光锁定到新一代的抗凋亡蛋白Mcl-1上了。当癌细胞暴露于化疗、放疗，甚至是免疫疗法之中时，促凋亡信号，比如毒素NOXA就会产生从而诱发癌细胞死亡，两种抗细胞凋亡蛋白Mcl-1和Bfl-1能够抵消NOXA的效应，因此这两种抗凋亡蛋白的抑制剂或许就能够互补药物Venetoclax来恢复癌细胞的细胞凋亡，目前很多研究都仅仅关注Mcl-1，因为利用小鼠蛋白进行的大量研究都表明，NOXA能够同Mcl-1发生紧密地相互作用并且对其进行隔离。研究者表示，我们也应当需要关注另外一个不同的抗凋亡蛋白：Bfl-1，当研究者发现，小鼠机体中NOXA、Mcl-1和Bfl-1能够被纠正时，他们意识到这或许并不能够完全适用于人类机体蛋白，这或许是因为，人类机体中NOXA和Bfl-1同小鼠机体并不相同，而且研究者还发现，当他们发现NOXA能够有效抵御人类机体的抗凋亡蛋白时，或许Bfl-1具有更高的亲和性，这就是其能够作为一种新型药物靶点来帮助开发新型药物。研究者Pellecchia的实验室此前发现，NOXA能够通过一种特殊的化学键来同Bfl-1作用，而这种化学键在其它5种抗凋亡蛋白中并不存在。研究者Pellecchia表示，理解NOXA与Bfl-1之间相互作用的机制或能帮助我们在实验室中设计出替代NOXA样的分子来紧密结合并且抑制Bfl-1的功能，研究者对来自耐受性慢性淋巴细胞白血病患者机体的细胞进行概念验证研究，结果表明，如果能够利用创新性的抑制剂阻断Bfl-1，那么细胞就能够对疗法产生反应并且死亡。为此研究者强烈认为Bfl-1能够作为一种新型的药物靶点，目前研究人员花费了大量的心血来寻找Mcl-1的拮抗剂，而这些制剂往往能够用于某些特定疾病之中，而相关的疾病也会因为Mcl-1的过量产生而恶化，因此研究者表示，我们可以转向对Bfl-1进行研究，本文研究结果就揭示了癌症对化疗产生耐药性的新机制，同时也证实了Bfl-1的确可以作为一种新型药物的靶点，未来研究者有望利用该靶点开发出更多治疗疾病的新型药物。

令人意外！噬菌体携带抗生素耐药性基因根据一项新的研究，来自多种环境的病毒组携带着抗生素耐药性基因。这一结果提示着噬菌体---感染细菌的病毒---可能在转移让细菌产生耐药性的基因中发挥着作用。相关研究结果将发表在2017年1月那期Environmental Pollution期刊上，论文标题为“Exploring the contribution of bacteriophages to antibiotic resistance”。来自西班牙赫罗纳大学的研究人员扫描了来自未经净化的污水、人粪便、猪粪便、淡水环境和海洋环境的病毒组，以便寻找抗生素耐药性存在的证据。他们发现这样的基因存在于所有分析的病毒组中，尽管它们的丰度存在差异。在人类相关的病毒组中，研究人员发现相对较少的耐药性基因，它们中的大多数与四环素耐药性相关联。他们在其他的样品中观察到更加丰富的抗生素耐药性基因。在猪粪便病毒组中发现的绝大多数耐药性基因是编码β-内酰胺酶的基因，而未经净化的污水、淡水和海洋样品携带许多各种不同的耐药性基因，包括那些赋予对至少三种不同的抗生素产生多药耐药性的基因。论文通信作者、赫罗纳大学加泰罗尼亚水研究所科学家José Balcázar写道，“我们的研究表明环境是一个巨大的噬菌体库，它们中的大多数携带着抗生素耐药性基因。”因存在细菌DNA污染，Balcázar和同事们排除了他们的病毒组数据中的一些数据。Balcázar也强调应更加深入地研究他的团队在人类相关的病毒组中发现的较低数量的耐药性基因。他写道，“还需更多数量的样品来证实这一观察结果。”Balcázar说，噬菌体在细菌之间转移耐药性基因的机制和噬菌体在基因转移中发挥多大重要的作用还需在未来的研究中加以阐明。

ELISA结果造成假阳性的原因何在？ELISA 实验样本要求： 血清标本宜在新鲜时检测，严重溶血标本禁用。一般说来，在5天内测定的血清标本可放置于4℃，标本在冰箱中保存时间过长导致血清IgG 聚合。超过一周测定的需－20℃保存。冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀并避免产生气泡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤，澄 清后再检测。反复冻融会使抗体效价跌落，所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测，宜少量分装冰存；最好使用一次性玻璃试管或真空管采血管；并使用非抗凝 标本，肝素抗凝血浆会增加OD值，可能与高浓度肝素具有强大的负电荷能吸附酶标记物不易洗脱有关；EDTA、酶抑制剂（如NaN3）可抑制ELISA系统 中辣根过氧化物酶活性；血液标本采集后必须使其充分凝固后再分离血清，或标本采集时用带分离胶的采血管或于采血管中加入适当的促凝剂。关于ELISA结果造成假阳性的原因我司技术做出如下原因分析： 1.样本严重溶血 ，以HRP为标记的ELISA测定中，残留在孔内的血红蛋白具有过氧化物酶样活性，催化底物显色造成假阳性。2. 混有红细胞的血清沉淀或附着在聚乙烯孔内不易洗净；如有细菌污染 ，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应；3. 标本凝固不全 ，有时为了争取时间快速检测，常在血液还未开始凝固时即强行离心分离血清，使血清中仍残留部分纤维蛋白原，在ELISA测定过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白块，易造成假阳性结果；4. 采血试管洗涤不彻底 、反复使用易交叉污染； 塑料试管能吸附抗原物质 ，样本久置在塑料管内会使样本内抗原含量下降造成假阴性。

ELISA试剂盒结果误差如何处理Elisa试剂盒结果误差如何处理!生物实验室产生的废液污染主要是化学性污染和生物性污染，另外还有放射性污染。我们经常认为实验室中的有机试剂并不直接参与发生反应，仅仅起溶剂作用，因此就直接把消耗的有机试剂以各种形式排放到周边的环境中，排放总量大致就相当于试剂的消耗量，然而日复一日，年复一年，这样累积下来的排放量就十分可观了。近日，关于人elisa试剂盒结果“花板"的问题对检测数据造成了很大影响，往往会使检测者做出误判，是实验中必须要注意和避免的。 针对这种“花板"现象我们通过多次实验的分析和判断，总结了一些经验，分析如下：1 标本、试剂、仪器1.1 标本 出入境人员的血液标本。1.2 试剂 HBsAg、HCV、HIV、梅毒试剂均为不同厂家的ELISA试剂盒。1.3 仪器 LD4-2型脑心机BID RAD1575型洗板机BID RAD550酶标仪。2 方法所有被检出入境人员的血液标本，按照各个厂家提供的Elisa试剂盒说明书进行HBsAg-HCV-HIV梅毒等检验项目操作。所有试剂均在有效期内使用。3 结果所使用不同厂家的试剂有时会出现“花板"问题。4 分析在所有标本进行检测的过程中，所用的仪器及加样过程都处于正常状态的情况下，步骤均按照各种试剂说明书的要求去做，排除实验所用仪器和操作步骤对实验结果的影响外，ELISA试剂盒内的空白、阴性和阳性对照以及室内质控值都很正常，只有检测的血液标本情况异常。根据国家和疾控中心报告阳性率的比例不应该是很高的情况下，HBsAg在用ELISA之前都经过了快速金标试剂的检测，阳性标本得到了一定的控制。因此，原因可能是在标本的处理，特别是放置时间、离心速度和离心时间方面的问题。所以，标本的处理就成为实验结果的主要可疑因素。为了避免“花板"现象的出现，降低检测的假阳性率，获取准确的实验结果，应选择灵敏度高、特异性好、稳定性好、批间差小、操作方便省时的ELISA试剂。使用ELISA试剂盒对血液HBsAg-HCV-HIV及梅毒等实验检测的结果中，空白和阴性，阳性对照以及室内质控孔结果正常，根据卫生部临检中心提供的数据，HBsAg0.5ng1ng-HCV-HIV梅毒正常范围均为2NCU，但血液标本孔的OD值比较高（大多数OD值≥0.070）。标本的阳性率很高，每板除对照孔外，有时阳性高达10孔之多，而大多数真阳性标本都出现弱阳性结果。

Elisa试剂盒实验室操作安全第一!1.购买后，请务必确认标签上的注意事项。     2.做好预防颠倒，摔坏的措施和管理体制。     3.ELISA试剂盒在使用前再次确认标签上的注意事项。做好必要的安全对策。     4.对没有标明其危险特性?有害特性的，也要慎重地进行操作。     5.必须戴好防护用具，小心翼翼进行操作。     6.请参照相关法规，文献，MSDS等信息，理解并掌握好试剂的特性。再进行安全操作。     7.通常购买试剂时要想到一次性用完。若估算不足有剩余的话，要更加注意其保管和管理。     8.万一试剂操作者并非专业技术人员。必须在专业人士的指导监督下进行操作。     9.对于使用后的废弃物，不要或旧的试剂，应按照相关法律法规正当处理。

如何把细胞养的更漂亮？有经验和刚刚从事细胞培养工作的人员都应该认真仔细地询问下细胞提供方提供的建议，提前了解所要培养细胞的详细资料，准备好细胞所要用到的培养基和相关试剂，虽然所有的贴壁，半贴壁或者悬浮细胞处理方式差不多，但是不同的实验室培养条件和处理力度还有试剂的批间差这些问题存在，也会导致对细胞处理不当，或者环境的不适应而造成细胞的死亡。1.收到细胞，第一时间要镜检：观察细胞形态是否正常，对于贴壁细胞则要注意看贴壁情况是否很好，观察细胞密度，有疑议及时咨提供细胞的技术人员。 由于运输的时间或者温度的变化，很多贴壁细胞在盛满培养基的瓶子里生长的状态和平时会有点不一样，主要是贴壁牢固问题。比如293T，平时贴壁就不是很牢，在装满的培养基瓶子里面，会发生大片的脱落，细胞聚集在一起，但是细胞生长还是正常的，通过离心收集，加以胰酶的消化，重新打散，又可以正常的贴壁生长。2.当通过上一步的观察，细胞初步没有任何问题时，进行下一步操作。当收到的细胞密达到80%左右时，则处理如下：弃除瓶中大部分培养基，仅保留5到10mL培养所需的常规培养基；或更换新鲜的培养基，置于培养箱中，随后每天观察。 细胞在低于正常生长温度情况下，会调整为静止期，或者慢速生长期，必须恢复37度的环境至少3个小时左右，才能重新调整到接近对数生长期的状态，在对数生长期进行细胞的传代会大大增加传代的成功率，和细胞的存活率。3.如果经第一步观察发现细胞密度超过90%，并且细胞状态很好时，则复温后2个小时需要立即传代。传代的比例应依据不同的细胞而定。对于生长比较快，状态稳定，不易受外界影响的细胞可以一次多传几瓶；对于生长较慢，细胞比较薄，状态容易波动的细胞类型，一次少传些，保证每瓶细胞密度大些，便于稳定生长。至于一些比较陌生的细胞，第一次处理也可以依照第二种情况。传代操作：1.吸除培养瓶内旧培养液。2.加入无菌pbs洗液（5-8mL）轻轻润湿细胞，稀释多余的培养基，之后吸走洗液，动作要轻，不可吹打到细胞。3.向瓶内加入含0.25%EDTA的胰蛋白酶混合液少许，以能覆满瓶底为限。 4.置温箱中2~5分钟，一旦镜检发现细胞质回缩，细胞间隙增大后，细胞变圆，比较松动后，立即终止消化。5.加入该细胞对应的培养基6mL（T25培养瓶）或12mL（T75培养瓶）终止消化。6.用吸管通过吸取的培养基轻轻反复吹打瓶壁细胞，使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。吹打时应尽量以最少的次数将细胞从壁上吹下，不仅要控制吹打的力度、次数，还要注意要将细胞尽可能吹成单个。这样既能减少死细胞，又能便于细胞再次均匀贴壁生长。7.依据传代比例，将细胞悬液分瓶，再补充培养基后，静置于温箱培养，直止贴壁。贴壁细胞在培养瓶长成致密单层后，继续生长的空间不足，培养基中的营养成份也消耗较多，同时代谢废物也有较多堆积，需要分瓶培养，对细胞进行传代扩增。对于贴壁不太紧的细胞如293，可以直接吹散后分瓶。而对于贴壁较紧的细胞如CHO，则需要以胰酶消化后再吹散分瓶。以笔者的经验，以轻吹或加培养液后轻摇可下较好，但对于经验不太充分的实验者而言是较难判断掌握的。胰酶消化的程度是一个关键：消化过度则对细胞的活性影响较大，并有部分细胞漂浮，随弃去的胰酶流失;消化不足则细胞难于从瓶壁上吹下，反复吹打同样也会损伤细胞活性。影响消化速度的因素较多，主要有胰酶溶液的活性(配制条件、冻存或4℃保存时间长短、是否反复冻融、解冻后存放时间及温度等)、消化时的温度(气温、细胞培养瓶及胰酶溶液的温度)以及所加胰酶溶液的多少等。含有EDTA的胰酶会比不含的消化能力强很多，不同细胞对消化液的敏感性也不同，比如HEP-G2人肝癌细胞，该细胞消化时间可长达10分钟左右。 消化时间仔细去摸索一下最好，每过2分钟镜下观察细胞是否变圆，记录最佳消化时间，下一次操作参考之前的记录来控制时间即可。对于悬浮细胞换液时只需要补液就行。悬浮细胞的传代则不需要用胰酶消化，直接通过计数算好传代的比例，直接分瓶，补液。有些悬浮细胞趋于成团生长，此时细胞生长状态良好，当补液时，避免吹打。典型实例：jurkat就是成团生长。当jurkat细胞密度比较大时，可将培养瓶竖直放置2分钟左右，待大部分细胞沉下，吸走上层清液，补充等量的新鲜培养基。

细胞传代的一般方法 开始细胞传代前，仔细检查细胞传代所需的仪器和试剂是否齐全：一般主要有：细胞(单层细胞，镜检适合)、培养液(MEM-0.2%LH 培养液或MEM 培养液或199 等适合细胞有要求的培养液)、灭活小牛血清、庆大霉素溶液（1 万单位）、7.5％NaHC03 溶液、0.25％胰蛋白酶、PBS 洗液。用具：小方瓶(100m1)、克氏瓶、胶塞、吸管(10ml、1m1）、细胞吹打管（20 ml）(以上用具需经121℃至少15 分钟高压灭菌)、C02 孵箱、超净台、倒置显微镜、4℃、—20℃冰箱操作步骤：镜检细胞，挑选生长状态良好，细胞界限清晰，具有立体感，形态好无污染、无异常及可疑病变细胞。配制细胞培养液：按以下配比配制MEM-0.2%LH 培养液100ml 内，加入灭活小牛血清10m1，庆大霉素溶液0.3m1，7.5%碳酸氢钠溶液3ml。（仅供一般参考）。消化细胞；先用PBS 洗液冲洗细胞表面1-2 次，每次10m1，弃去洗液，向细胞瓶内加入0.25％胰蛋白酶溶液，每瓶1m1，细胞瓶平放，使消化液完全覆盖细胞表面。至细胞完全脱落到胰酶中。每瓶加入10m1 细胞培养液吹打分散细胞，按所需的传代比例分装于小方瓶(100m1)中，再加入10m1 细胞培养液重复吹打一次后分装，然后补加至所需培养量。加塞，置于37±1℃孵箱培养。约2～4 天成片。(由细胞接种浓度决定)；填写传代记录。

双抗体夹心法测抗原双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，操作步骤如下：1） 将特异性抗体与固相载体联结，形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。2） 加受检标本，保温反应。标本中的抗原与固相抗体结合，形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去其他未结合物质。3） 加酶标抗体，保温反应。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。4） 加底物显色。固相上的酶催化底物成为有色产物。通过比色，测知标本中抗原的量。在临床检验中，此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要获得针对受检抗原的异性抗体，就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法。如抗体的来源为抗血清，包被和酶标用的抗体最好分别取自不同种属的动物。如应用单克隆抗体，一般选择两个针对抗原上不同决定簇的单抗，分别用于包被固相载体和制备酶结合物。这种双位点夹心法具有很高的特异性，而且可以将受检标本和酶标抗体一起保温反应，作一步检测。在一步法测定中，当标本中受检抗原的含量很高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合，而不再形成"夹心复合物"。类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象，此时反应后显色的吸光值（位于抗原过剩带上）与标准曲线（位于抗体过剩带上）某一抗原浓度的吸光值相同（参见1.3.2，图1-4），如按常法测读，所得结果将低于实际的含量，这种现象被称为钩状效应（hook effect），因为标准曲线到达高峰后呈钩状弯落。钩状效应严重时，反应甚至可不显色而出现假阴性结果。因此在使用一步法试剂测定标本中含量可异常增高的物质（例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等）时，应注意可测范围的最高值。用高亲和力的单克隆抗体制备此类试剂可削弱钩状效应。假使在被测分子的不同位点上含有多个相同的决定簇，例如HBsAg的a决定簇，也可用针对此决定的同一单抗分别包被固相和制备酶结合物。但在HBsAg的检测中应注意亚型问题，HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4个亚型，虽然每种亚型均有相同的a决定簇的反应性，这也是用单抗作夹心法应注意的问题。双抗体夹心法测抗原的另一注意点是类风湿因子（RF）的干扰。RF是一种自身抗体，多为IgM型，能和多种动物IgG的Fc段结合。用作双抗体夹心法检测的血清标本中如含有RF，它可充当抗原成份，同时与固相抗体和酶标抗体结合，表现出假阳性反应。采用F（ab'）或Fab片段作酶结合物的试剂，由于去除了Fc段，从而消除RF的干扰。双抗体夹心法ELISA试剂是否受RF的影响，已被列为这类试剂的一项考核指标（参见6.2）。双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原，但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原，因其不能形成两位点夹心。

ELISA的类型ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有三个必要的试剂：（1）固相的抗菌素原或抗体，即"免疫吸附剂"（immunosorbent）；（2）酶标记的抗原或抗体，称为"结合物"（conjugate）；（3）酶反应的底物。根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件，可设计出各种不同类型的检测方法。

免疫胶体金技术 免疫胶体金技术是以胶体金这样一种特殊的金属颗粒作为标记物。胶体金是指金的水溶胶，它能迅速而稳定地吸附蛋白，对蛋白的生物学活性则没有明显的影响。因此，用胶体金标记一抗、二抗或其他能特异性结合免疫球蛋白的分子（如葡萄球菌A蛋白）等作为探针，就能对组织或细胞内的抗原进行定性、定位，甚至定量研究。由于胶体金有不同大小的颗粒，且胶体金的电子密度高，所以免疫胶体金技术特别适合于免疫电镜的单标记或多标记定位研究。由于胶体金本身呈淡至深红色，因此也适合进行光镜观察。如应用银加强的免疫金银法则更便于光镜观察。