寄生虫生长在我们的器官内部，窃取本应属于我们的养分，吸食我们的血液，但它们并不是一无是处。一项以生活在亚马逊热带雨林的人们进行的研究表明：一些特定类型的寄生虫能够增加女性怀孕的几率。"这是一项原创性的研究"，来自爱丁堡大学的寄生虫免疫学家Rick Maizels博士说到。"我认为这项研究引申出的关于寄生虫的'生育催化能力'将引发很多后续的研究"。 世界上有10亿人体内有寄生虫存在，大部分位于热带且卫生条件较差的地区。最常见的一类寄生虫是蛔虫，最长能生长到14英寸。蛔虫常常寄生在宿主的小肠部位，以吸食宿主正在消化的食物为生。其它类型的虫子，比如十二指肠钩虫与美洲钩虫，更像是微型的吸血鬼，它们隐藏在小肠褶皱里面，靠吸食宿主的血液为生。 由于它们显而易见的危害与不劳而获的特性，寄生虫与母亲体内的胎儿似乎有着某种程度的相同点。免疫系统将寄生虫与胎儿视作闯入者，因此一定有特殊的机制使得宿主的免疫系统对它们产生耐受。寄生虫与怀孕都能够触发某些免疫稳态的变化，比如，激活调节性T细胞，抑制免疫反应的发生。 由于这些相同点的存在，来自加州圣巴巴拉分校的人类生物学家Aaron Blackwell与同事们猜想是否寄生虫的感染能够引发类似于怀孕的效应呢？他们以生活在玻利维亚（亚马逊热带雨林）的提斯曼原住民为对象进行研究，以验证他们的猜想。 大约16000名提斯曼原住民主要以打猎、钓鱼与种植庄稼等为生。他们的家园充满了各种各样的寄生虫。Blackwell提到，在他们的研究中涉及到受到感染的女性，她们自己都察觉不到已经被感染。 在大约1000名提斯曼女性中，受寄生虫感染引发的唯一健康问题发生在部分受到钩虫感染的女性。这部分女性体重指数有略微升高，血液中血红蛋白的含量有所下降。钩虫对生育具有明显的影响，它们能够延长女性第一次受孕的年龄以及两次受孕之间的间隔。研究者们分析得出：体内有钩虫寄生的女性相比体内没有寄生虫的女性，一生中平均少生育三个孩子。在提斯曼女性中，平均每个人会有九个孩子。 与此相反，蛔虫则会提高怀孕的能力，它能够缩短第一次怀孕的年龄以及两次受孕之间的间隔。感染了蛔虫的女性相比其它人群一生中会平均多生育两个孩子。他们的研究结果发表在最近一期的《science》杂志上。 通过调节免疫系统，蛔虫使得体内的炎症反应程度下降，这也许能够为卵子的着床提供合适的环境。而钩虫在抑制炎症反应方面效果并不明显，而且它们窃取养分与吸食血液的特性将会给怀孕带来一定的不利影响。Blackwell等人目前正在分析究竟寄生虫影响了免疫系统中的哪一类细胞导致截然不同的情况的发生。 其它一些研究则发现细菌对宿主的受孕能力也有重要影响，但大多都是负面的。如果说寄生虫能够提高生育的能力，这实在是令人惊讶。另外，这一研究也强调了免疫系统对生育具有重要的影响。 由于寄生虫能够调节免疫系统使之降低炎症反应强度，因此对过敏反应、哮喘以及自身免疫病都是利大于弊。临床上已经有一些试验正在检测寄生虫感染后患者对以上疾病的抵御能力。一些专家质疑蛔虫能否作为促进受孕的治疗手段。不过，即使不能直接接种活体蛔虫，也可以通过进一步研究蛔虫释放的活性物质寻找新的治疗不孕不育的疗法

近日，斯克里普斯研究所(TSRI)的科学家们发现了对抗HIV的新武器。他们的新研究发表在2015年11月17日的《Immunity》杂志上，文章针对病毒的一个特定的弱点描述了四个原型抗体。在这些抗体的引导下，研究人员在设计艾滋病候选疫苗时仿造了一个HIV蛋白质的分子结构。“这项研究可以帮助我们如何将这些信息转化为疫苗开发，” TSRI研究助理Raiees Andrabi说。“这是一个基于HIV抗体疫苗的重要发展领域。”令人惊讶的新抗体研究结果以最近几项成功的TSRI研究为基础表明，促使免疫系统开发出抗体来中和多株HIV病毒。在新的研究中，研究人员进行了一系列的实验，包括病毒修饰、蛋白质和抗体工程。他们发现，四种抗体靶向一个艾滋病毒表面的点称为V2顶点。这是很重要的，因为这些抗体可识别大约90%的已知艾滋病毒菌株甚至感染其他物种相关菌株的V2顶点。疫苗针对这个区域可以防止多种形式的病毒。“这个区域可以帮助稳定病毒， 如果你想消除艾滋病毒那么这是一个重要的目标区域。”Andrabi说。通过进一步调查，研究者注意到四个抗体中有两个具有不寻常的特性，它们是疫苗设计的重要部分。免疫系统通常通过激活免疫B细胞开始抵御感染， 免疫B细胞可表达“生殖系”形式的抗体去连接入侵的病原体。生殖系抗体很少能非常有效地连接病毒；相反，它们是更多发达抗体的前体细胞。但是在新的研究中，两种抗体不需要通过变异与V2顶点连接；相反，这些抗体使用基本生殖系结构的一部分是由非变异基因编码的。理论上讲，这意味着任何艾滋病患者都应该有能力启动免疫反应。不幸的是，自然免疫系统中似乎只产生少量HIV中和生殖系抗体。为了生成免疫反应就需要这些抗体，这是科学家们找到抗体可以识别和结合的合适的HIV蛋白质的关键。在新的研究中，研究人员成功地模拟了一种作用于艾滋病毒的结构，称为原生艾滋病毒外壳蛋白。这促使他们设计一种可以更好的结合到生殖系抗体上的蛋白质，希望开始能有一个起作用的免疫反应。该研究的下一步是在动物模型中测试候选疫苗的效用

最近，来自法国蒙特利尔临床研究所的一个研究团队对一类免疫细胞进行深入研究,发现一条可以促进肿瘤免疫治疗方法开发的新机制。他们的这一研究成果发表在国际学术期刊Journal of Experimental Medicine上。 在这项研究中，研究人员对免疫系统中一类非常关键的细胞类型--自然杀伤细胞（NK细胞）进行了深入研究，NK细胞能够通过直接摧毁癌细胞发挥机体保护作用。该研究团队着重研究一个叫做DNAM-1的蛋白，该蛋白在NK细胞清除癌细胞的过程中发挥重要作用。 IRCM分子肿瘤研究系主任Dr. Veillette表示："我们在这项研究中发现了一个新机制，在这个机制中DNAM-1能够刺激NK细胞发挥功能，因此增强了它们清除癌细胞的能力。" DNAM-1蛋白是NK细胞表面的一个受体，在正常情况下它能够与NK细胞表面的TIGIT受体竞争结合癌细胞，如果TIGIT受体与癌细胞发生结合就会降低NK细胞的杀伤效率。"当TIGIT受体与感染细胞发生相互作用，它能够阻止DNAM-1蛋白与感染细胞结合，结果抑制了NK细胞功能，延缓了免疫系统发挥作用。"Dr. Veillette解释道。 最近肿瘤免疫治疗方法进展火热，而一些重要研究也大大促进了肿瘤免疫治疗方法的开发。这类方法主要是利用抗体增强免疫系统功能，实现杀伤癌细胞的目的。其中一些抗体，如抗CTLA-4抗体以及抗PD-1抗体已经为许多癌症病人带来持久作用。 这项最新研究表明抗TIGIT抗体或将作为肿瘤免疫治疗的新方法发挥重要作用，这类抗体能够增强DNAM-1蛋白的功能，进一步增强NK细胞摧毁肿瘤细胞的能力。研究人员表示上述机制将为下一代癌症治疗方法的开发带来重大影响

捷克布拉格查理大学和耶鲁大学的联合课题组近期在《Nature Communications》上发表的一篇研究论文认为，当生物的栖息地从外围向内被破坏时，和栖息地从中心区域向外部被破坏相比而言，更多的物种会灭绝。了解栖息地被破坏的形状，和物种灭绝速率之间的关系，有助于全球的生态保护工作。栖息地的破坏是物种灭绝的主要原因之一。栖息地被破坏主要与人为干扰相关，例如城市扩建，或者将天然栖息地转化为农业用途。但是栖息地破坏对于不同物种的影响有所不同，这取决于栖息地被破坏的程度以及生物物种在栖息地中的生态位。现有估计物种灭绝的方法一般只考虑栖息地被破坏的面积，而没有考虑在一个物种分布区域中哪个部分的栖息地被破坏了。布拉格查理大学的Petr Keil和他的同事研究了四个大洲上栖息地丧失对鸟类、哺乳动物和两栖动物的影响。这四个大洲是北美洲、南美洲、非洲和亚洲。每个大洲上的生态栖息地足够大，大到足以容阔每个物种的整个自然分布范围。通过计算在这样的一个区域中当栖息地从边缘向内消失时，以及栖息地从中心向外消失时，或者随机消失时，环境中损失的物种数量，研究团队发现从外向内的栖息地破坏方式带来的物种灭绝数量最大。除了损失最多的物种，从外向内的栖息地破坏，还与最严重的生物多样性损失相关。生物多样性指的是一个区域物种的丰富程度。从外向内的栖息地破坏，还与物种在生态系统中扮演角色的多样性的迅速下降相关联。这些结果表明，当一个物种的活动范围在一个地区的边缘（例如濒临灭绝的埃塞俄比亚狼）时，这个物种在遭遇大规模栖息地破坏时，他们最终灭绝的风险最高

近日，一项刊登在国际杂志Translational Psychiatry上的研究报告中，来自赫尔辛基大学的科学家通过研究发现了一种遗传突变，该突变可是的携带者喝醉酒后出现特别冲动和鲁莽的行为，研究者指出，在芬兰超过10万人都携带这种突变。许多芬兰人都知道有些人喝醉后会行为会变得过度奇怪且不稳定，文章中研究者推测这或许是某些生物因素所导致的；研究者Roope Tikkanen博士表示，如今我们发现血清素2B受体基因的点图片或许会使得携带者更加易于出现冲动行为，尤其是在酒后表现尤为明显，这项研究是对2010年发表在Nature杂志上的研究结果的补充，Nature杂志上研究者Bevilacqua阐述了在芬兰人机体中发现了血清素2B受体的突变。本文研究结果表明，携带该突变的个体在自然状态下易于变得冲动，而且这些个体非常有可能挣扎于自我控制和情绪障碍中；目前研究者对血清素2B受体在人类机体中的功能知之甚少，但其被认为和个体情绪冲动相关，尽管这只是在很少一部分人中出现的精神健康问题，本文中研究者在2.2%的人群中发现了该基因的突变，一个基因在复杂现象中的影响往往是次要的，但其却有可能帮助鉴别出该基因对人群的影响，比如基因突变对芬兰人的影响等。如果这些研究结果在遭受冲动控制困难的单一个体的大量临床样本中表现较为明显，那么研究者或许就可以采取一定的保护措施，而最为重要的措施明显就是控制个体的酒精消耗，其它的措施还包括尝试通过认知行为精神疗法和药物疗法来对个体的行为进行控制。除了芬兰人群体健康的假定影响外，本文研究发现还揭示了血清素2B受体在人类机体中的重要角色，研究者还需要进行更多研究来揭示该基因表达的影响，即基因表达的蛋白产物可以在多种方式中受到影响。最后研究者表示，本文研究阐明了血清素2B受体在个体健康中的影响，而增加对血清素2B受体功能的理解对于后期开发新型药理学方法来治疗相关疾病的患者提供了一定的帮助和思路

中国军事医学科学院北京放射与辐射医学研究所和第三军医大学（重庆）的联合课题组近期在《Scientific Reports》上发表了一篇论文。该论文描述了通过CRISPR/Cas9基因修饰工具，可以在猪的体内产生人血白蛋白。人血白蛋白是一种在血液存在的蛋白质，可用于一系列疾病的治疗，其中就包括肝衰竭和创伤性休克。过去也有尝试在猪体内产生人血白蛋白，但是由于无法避免猪源的白蛋白的产生，这使得分离与提纯人源血白蛋白具有很大挑战。中国科学家张普民和他的研究团队，使用CRISPR/Cas9基因编辑系统，在猪受精卵基因组中用于产生猪白蛋白的区域，插入了一段可以合成人类白蛋白的DNA片段。在猪基因组中嵌入的等位基因位于猪白蛋白合成基因的下游。研究者认为，这可以让猪产生人源的血清白蛋白的同时，却不产生猪源白蛋白，这样就可以避免人源血清白蛋白和猪源白蛋白的混合。研究者植入了300个基因组编辑后的受精卵到10只母猪体内，这些受精卵都携带有插入人血白蛋白的等位基因。5只猪成功怀孕，产下了16只巴马猪仔。研究者发现这16只猪仔来自携带人源白蛋白基因的受精卵，并且它们的血液中能检测到人血白蛋白。不过，猪仔体内的人血白蛋白含量有所不同。进一步的繁殖实验表明，通过CRISPR/Cas9基因修饰工具插入的人源基因可以传给这些猪仔的后代

活性氧和抗氧化分子在促进或抑制肿瘤发展中扮演的角色一直存在争议。在这个问题上，美国德州西南医学中心的科学家们认为，黑色素瘤细胞如果能够细胞应激压力，即能够解决活性氧化物的问题，那么这些细胞就能高效地在血液循环系统中移动，并导致癌症的扩散。作者们还表明，抑制这些小鼠中处理活性氧化物的代谢途径，可以有效地减弱了黑色素瘤细胞的转移。活性氧化物（ROS），含有氧原子与不成对电子，是一类可以破坏DNA和其他细胞成分的高活性分子。活性氧产生氧化应激会导致增强的突变率，促进正常细胞转化为肿瘤细胞。ROS也可以稳定癌细胞出现和发展的细胞因子因素。因此，可以推测，使用抗氧化剂以消除ROS，并且降低细胞内部的氧化应激，可以作为预防及治疗的癌症的新策略。在此基础上，补充抗氧化剂的大型多中心临床试验发现，这些抗氧化的补充剂不但没有使患者受益，反而被发现与癌症发病率的显著增加有关。这些成果所带来的令人费解的问题：如果抗氧化剂消除可以消除活性氧化分子，这应该可以抑制肿瘤的发生和发展，又怎么也促进肿瘤的生长？根据最新的研究，答案开始浮出水面。Piskounova 等人的研究认为，处于血液循环系统中的黑色素瘤细胞，比起处于皮下的肿瘤团中的细胞，往往会有更高的ROS浓度。这会导致这些处于移动中的黑色素瘤细胞，可能会通过某种方法来消除这些ROS分子。这些黑色素瘤细胞可以改变代谢途径，比如增加在叶酸途径中对NADPH依赖的酶的量，这就好增加NADPH的生成量，同时还会导致叶酸代谢途径更加活跃。而NADPH作为一种还原性分子，可以有效中和掉活性氧化物。通过使用 甲氨蝶呤抑制叶酸代谢途径，可以有效地抑制黑色素瘤细胞在血液循环中的长距离转移。这项研究指出了，如果ROS在黑色素瘤细胞过度积累，则可导致细胞生长停滞或死亡，从而抑制肿瘤的长距离转移。黑色素癌细胞却通过增加NADPH代谢，加强叶酸代谢途径，可以有效抵御活性氧化物带来的应激压力，从而更好地转运。针对这个途径，如果能够开发出更安全的抑制叶酸途径的抑制剂，则可能成为潜在的抗黑色素瘤的新药物

检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人IRAK3抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人IRAK3会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人IRAK3抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人IRAK3抗体与结合在包被抗体上的人IRAK3结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，IRAK3浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中IRAK3的浓度。 样品收集: 1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂样品。 3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。 4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测 6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。 7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。 8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。  试验所需自备物品: 1. 酶标仪(450nm波长滤光片) 2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水 4. 吸水纸  检测前准备工作: 1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。 2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。 3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为50ng/mL）。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：50、25、12.5、6.25、3.125、1.563、0.781、0ng/mL，标准品&样品稀释液直接作为空白孔0ng/mL。如配制25ng/mL标准品：取0.5mL50ng/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。  4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。 5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。当日使用。 标准品稀释方法图例：（以500μL/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200μL/管）   1 2 3 4 5 6 7 8 Tube  50 25 12.5 6.25 3.125 1.563 0.781 0 ng/mL  洗涤方法: 1. 自动洗板机：每孔加入洗涤液350μL，注入与吸出间隔60秒。 2. 手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350μL，浸泡1-2分钟，吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。  操作步骤: 实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。 1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加标准品&样品稀释液 100μL，余孔分别加标准品或待测样品 100μL，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育 90 分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每个孔中加入生物素化抗体工作液 100μL（在使用前 15 分钟内配制），酶标板加上覆膜，37℃温育 1 小时。 3. 弃去孔内液体，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 1-2 分钟，大约 350μL/每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。 4. 每孔加酶结合物工作液（临用前 15 分钟内配制）100μL，加上覆膜，37℃温育 30 分钟。 5. 弃去孔内液体，甩干，洗板 5 次，方法同步骤 3。 6. 每孔加底物溶液(TMB)90μL，酶标板加上覆膜 37℃避光孵育 15 分钟左右（根据实际显色情况酌情缩短或延长，但不可超过 30 分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止）。 7. 每孔加终止液 50μL，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。 8. 立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度（OD 值）。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。 9. 实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存。  注意事项： 1. 保存：试剂盒中各试剂请按说明书提示合理存放。在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染，否则可能会出现错误的结果。 2. 酶标板：刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。暂时不用的板条应拆卸后放入备用铝箔袋，按推荐温度存放！ 3. 加样：加样或加试剂时，第一个孔与最后一个孔的加样时间间隔如果太大，将会导致不同的“预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。每次的加样时间最好控制在10分钟内。推荐设置复孔。 4. 温育：为防止样品蒸发，实验时必须给酶标板覆膜；洗板后应尽快进行下步操作，避免酶标板处于干燥状态；严格遵守给定的温育时间和温度。 5. 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在吸水纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。在读数前要注意清除底部残留的液体和手指印，以免影响酶标仪读数。 6. 试剂配制：Concentrated Biotinylated Detection Ab及Concentrated HRP Conjugate体积较小，运输过程会使液体沾到管壁或瓶盖，因此使用前1000转/分离心1min，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。取用前，请用移液器小心吹打4-5次使溶液混匀。标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液请根据所需用量配制，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确配制标准品及工作液，尽量不要微量配制（如吸取Concentrated Biotinylated Detection Ab时，一次不要小于10μL），以避免由于不准确稀释而造成浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液。若需要分次使用标准品应按照每一次用量分装，将其放在-20～-80℃贮存。避免反复冻融。 7. 显色时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如每隔5分钟），如梯度已很明显，请提前加入终止液终止反应，避免颜色过深影响酶标仪读数。 8. 底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。 9. 混匀：充分轻微混匀对反应结果尤为重要，最好使用微量振荡器(使用最低频率)，如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻敲击酶标板框混匀。 10. 安全：试验中请穿着实验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液样品时，请按国家生物试验室安全防护条例执行。 11. 不同批号的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外） 12. 试验中所用的EP管和吸头均为一次性使用，严禁混用，否则将影响试验结果！ 结果判断: 1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图，如设置复孔，则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。 2. 推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 3. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。  灵敏度、检测范围、特异性和重复性: ●灵敏度：最小可测 0.469ng/mL。 ●检测范围：0.781–50ng/mL。 ● 特异性：可检测重组或天然的人 IRAK3，且与其它相关蛋白无交叉反应。 ● 重复性：板内，板间变异系数均操作概要 1. 在各孔中加入标准品或样品各 100μL， 37℃孵育 90 分钟 2. 倒去孔内液体，加入 100μL 生物素化抗体工作液，37℃孵育 60 分钟 3. 洗涤 3 次 4. 加入 100μL 酶结合物工作液， 37℃孵育 30 分钟 5. 洗涤 5 次 6. 加入 90μL 底物溶液， 37℃孵育 15 分钟左右 7. 加入 50μL 终止液，立即在 450nm 波长处测量 OD 值 8. 结果计算

检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人IL-7抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人IL-7会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人IL-7抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人IL-7抗体与结合在包被抗体上的人IL-7结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，IL-7浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中IL-7的浓度。 样品收集: 1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂样品。 3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。 4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测 6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。 7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。 8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。  试验所需自备物品: 1. 酶标仪(450nm波长滤光片) 2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水 4. 吸水纸  检测前准备工作: 1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。 2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。 3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为500pg/mL）。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.813、0pg/mL，标准品&样品稀释液直接作为空白孔0pg/mL。如配制250pg/mL标准品：取0.5mL500pg/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。  4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。 5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。当日使用。 标准品稀释方法图例：（以500μL/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200μL/管）   1 2 3 4 5 6 7 8 Tube  500 250 125 62.5 31.25 15.625 7.813 0 pg/mL  洗涤方法: 1. 自动洗板机：每孔加入洗涤液350μL，注入与吸出间隔60秒。 2. 手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350μL，浸泡1-2分钟，吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。  操作步骤: 实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。 1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加标准品&样品稀释液 100μL，余孔分别加标准品或待测样品 100μL，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育 90 分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每个孔中加入生物素化抗体工作液 100μL（在使用前 15 分钟内配制），酶标板加上覆膜，37℃温育 1 小时。 3. 弃去孔内液体，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 1-2 分钟，大约 350μL/每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。 4. 每孔加酶结合物工作液（临用前 15 分钟内配制）100μL，加上覆膜，37℃温育 30 分钟。 5. 弃去孔内液体，甩干，洗板 5 次，方法同步骤 3。 6. 每孔加底物溶液(TMB)90μL，酶标板加上覆膜 37℃避光孵育 15 分钟左右（根据实际显色情况酌情缩短或延长，但不可超过 30 分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止）。 7. 每孔加终止液 50μL，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。 8. 立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度（OD 值）。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。 9. 实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存。  注意事项： 1. 保存：试剂盒中各试剂请按说明书提示合理存放。在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染，否则可能会出现错误的结果。 2. 酶标板：刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。暂时不用的板条应拆卸后放入备用铝箔袋，按推荐温度存放！ 3. 加样：加样或加试剂时，第一个孔与最后一个孔的加样时间间隔如果太大，将会导致不同的“预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。每次的加样时间最好控制在10分钟内。推荐设置复孔。 4. 温育：为防止样品蒸发，实验时必须给酶标板覆膜；洗板后应尽快进行下步操作，避免酶标板处于干燥状态；严格遵守给定的温育时间和温度。 5. 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在吸水纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。在读数前要注意清除底部残留的液体和手指印，以免影响酶标仪读数。 6. 试剂配制：Concentrated Biotinylated Detection Ab及Concentrated HRP Conjugate体积较小，运输过程会使液体沾到管壁或瓶盖，因此使用前1000转/分离心1min，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。取用前，请用移液器小心吹打4-5次使溶液混匀。标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液请根据所需用量配制，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确配制标准品及工作液，尽量不要微量配制（如吸取Concentrated Biotinylated Detection Ab时，一次不要小于10μL），以避免由于不准确稀释而造成浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液。若需要分次使用标准品应按照每一次用量分装，将其放在-20～-80℃贮存。避免反复冻融。 7. 显色时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如每隔5分钟），如梯度已很明显，请提前加入终止液终止反应，避免颜色过深影响酶标仪读数。 8. 底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。 9. 混匀：充分轻微混匀对反应结果尤为重要，最好使用微量振荡器(使用最低频率)，如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻敲击酶标板框混匀。 10. 安全：试验中请穿着实验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液样品时，请按国家生物试验室安全防护条例执行。 11. 不同批号的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外） 12. 试验中所用的EP管和吸头均为一次性使用，严禁混用，否则将影响试验结果！ 结果判断: 1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图，如设置复孔，则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。 2. 推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 3. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。  灵敏度、检测范围、特异性和重复性: ●灵敏度：最小可测 4.688pg/mL。 ●检测范围：7.813–500pg/mL。 ● 特异性：可检测重组或天然的人 IL-7，且与其它相关蛋白无交叉反应。 ● 重复性：板内，板间变异系数均操作概要 1. 在各孔中加入标准品或样品各 100μL， 37℃孵育 90 分钟 2. 倒去孔内液体，加入 100μL 生物素化抗体工作液，37℃孵育 60 分钟 3. 洗涤 3 次 4. 加入 100μL 酶结合物工作液， 37℃孵育 30 分钟 5. 洗涤 5 次 6. 加入 90μL 底物溶液， 37℃孵育 15 分钟左右 7. 加入 50μL 终止液，立即在 450nm 波长处测量 OD 值 8. 结果计算

检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人IL10Rβ抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人IL10Rβ会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人IL10Rβ抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人IL10Rβ抗体与结合在包被抗体上的人IL10Rβ结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，IL10Rβ浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中IL10Rβ的浓度。 样品收集: 1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂样品。 3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。 4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测 6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。 7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。 8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。  试验所需自备物品: 1. 酶标仪(450nm波长滤光片) 2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水 4. 吸水纸  检测前准备工作: 1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。 2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。 3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为2000pg/mL）。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：2000、1000、500、250、125、62.5、31.25、0pg/mL，标准品&样品稀释液直接作为空白孔0pg/mL。如配制1000pg/mL标准品：取0.5mL2000pg/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。  4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。 5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。当日使用。 标准品稀释方法图例：（以500μL/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200μL/管）   1 2 3 4 5 6 7 8 Tube  2000 1000 500 250 125 62.5 31.25 0 pg/mL  洗涤方法: 1. 自动洗板机：每孔加入洗涤液350μL，注入与吸出间隔60秒。 2. 手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350μL，浸泡1-2分钟，吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。  操作步骤: 实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。 1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加标准品&样品稀释液 100μL，余孔分别加标准品或待测样品 100μL，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育 90 分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每个孔中加入生物素化抗体工作液 100μL（在使用前 15 分钟内配制），酶标板加上覆膜，37℃温育 1 小时。 3. 弃去孔内液体，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 1-2 分钟，大约 350μL/每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。 4. 每孔加酶结合物工作液（临用前 15 分钟内配制）100μL，加上覆膜，37℃温育 30 分钟。 5. 弃去孔内液体，甩干，洗板 5 次，方法同步骤 3。 6. 每孔加底物溶液(TMB)90μL，酶标板加上覆膜 37℃避光孵育 15 分钟左右（根据实际显色情况酌情缩短或延长，但不可超过 30 分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止）。 7. 每孔加终止液 50μL，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。 8. 立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度（OD 值）。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。 9. 实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存。  注意事项： 1. 保存：试剂盒中各试剂请按说明书提示合理存放。在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染，否则可能会出现错误的结果。 2. 酶标板：刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。暂时不用的板条应拆卸后放入备用铝箔袋，按推荐温度存放！ 3. 加样：加样或加试剂时，第一个孔与最后一个孔的加样时间间隔如果太大，将会导致不同的“预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。每次的加样时间最好控制在10分钟内。推荐设置复孔。 4. 温育：为防止样品蒸发，实验时必须给酶标板覆膜；洗板后应尽快进行下步操作，避免酶标板处于干燥状态；严格遵守给定的温育时间和温度。 5. 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在吸水纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。在读数前要注意清除底部残留的液体和手指印，以免影响酶标仪读数。 6. 试剂配制：Concentrated Biotinylated Detection Ab及Concentrated HRP Conjugate体积较小，运输过程会使液体沾到管壁或瓶盖，因此使用前1000转/分离心1min，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。取用前，请用移液器小心吹打4-5次使溶液混匀。标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液请根据所需用量配制，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确配制标准品及工作液，尽量不要微量配制（如吸取Concentrated Biotinylated Detection Ab时，一次不要小于10μL），以避免由于不准确稀释而造成浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液。若需要分次使用标准品应按照每一次用量分装，将其放在-20～-80℃贮存。避免反复冻融。 7. 显色时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如每隔5分钟），如梯度已很明显，请提前加入终止液终止反应，避免颜色过深影响酶标仪读数。 8. 底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。 9. 混匀：充分轻微混匀对反应结果尤为重要，最好使用微量振荡器(使用最低频率)，如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻敲击酶标板框混匀。 10. 安全：试验中请穿着实验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液样品时，请按国家生物试验室安全防护条例执行。 11. 不同批号的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外） 12. 试验中所用的EP管和吸头均为一次性使用，严禁混用，否则将影响试验结果！ 结果判断: 1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图，如设置复孔，则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。 2. 推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 3. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。  灵敏度、检测范围、特异性和重复性: ●灵敏度：最小可测 18.75pg/mL。 ●检测范围：31.25–2000pg/mL。 ● 特异性：可检测重组或天然的人 IL10Rβ，且与其它相关蛋白无交叉反应。 ● 重复性：板内，板间变异系数均操作概要 1. 在各孔中加入标准品或样品各 100μL， 37℃孵育 90 分钟 2. 倒去孔内液体，加入 100μL 生物素化抗体工作液，37℃孵育 60 分钟 3. 洗涤 3 次 4. 加入 100μL 酶结合物工作液， 37℃孵育 30 分钟 5. 洗涤 5 次 6. 加入 90μL 底物溶液， 37℃孵育 15 分钟左右 7. 加入 50μL 终止液，立即在 450nm 波长处测量 OD 值 8. 结果计算

干细胞可以进行再生并且维持机体组织的更新，而一旦干细胞失控就会引发机体出现像癌症等疾病；近日一项刊登于国际杂志eLife上的研究论文中，来自德国马克斯普朗克研究所(Max Planck Institute)等处的研究人员通过研究设计了一种数学模型，该模型可以帮助绘制造血干细胞随着年龄变化的细胞群体的发育情况，而且该模型是利用血细胞染色体末端的端粒来完成对细胞发育情况的预测的。干细胞是机体所有特殊细胞的起源，当其进行分裂时，前体细胞就会形成，其会不断再生分化成为成熟细胞，比如在血液形成过程中，数十亿不同的血细胞就会通过骨髓中的干细胞每天不断生成，而干细胞的数量在儿童期是出于增加趋势的，但在成年期其数量相对维持不变，当处于成年期时，细胞分裂通常会产生新的干细胞和前体细胞，而这些细胞的数量从很大程度上保持着恒定不变的状态。尽管造血干细胞寿命较长，但其也会经历老化阶段，最后面临着遗传物质发生突变的悲剧；当突变的干细胞产生时就细胞的生长就会失去控制从而引发癌症，然而目前研究者很难建立老化和干细胞分裂历史之间的关联，同时研究者也并不清楚干细胞恶性变性对患者的影响。文章中研究者就评估了干细胞的发育情况；当细胞分裂时，端粒就会发生轻微收缩，直到不会出现分裂，Werner教授说道，端粒的长度分布直接反映了细胞早期分裂的状况，目前已经有研究数据来证明端粒的长度，但没有相关数据反应端粒的分布情况，本文研究中我们就对此进行了相关研究。研究者对公356名所有年龄段的测试个体机体的血细胞进行了研究分析，从中确定了56名个体机体的端粒长度的分布，随后基于这些数据研究人员检测了不同的数学模型来描述每个年龄段个体机体端粒长度的分布，结果显示，可以对数据进行最佳描述的模型可以有效揭示干细胞库中干细胞的生长状况。另一位研究者Beier指出，利用这种新型模型我们就可以对染色体端粒长度的分布进行直观地描述和分析，同时当前数据也足以帮助我们寻找个体染色体端粒过去和未来的状态，这样一来我们就可以在任何时间点来鉴别干细胞群体，从而帮助我们对疾病及风险群体进行预测，如今研究者计划利用当前开发的新型模型来改善对特定疾病的诊断和预后评估，而基于此研究者还希望可以在未来开发出治疗特定血液疾病的靶向疗法

近日，刊登于国际著名杂志Nature上的一篇研究论文中，来自德州大学安德森癌症中心的科学家通过研究揭示了为何某些化疗药物，比如吉西他滨不能够有效治疗某些胰腺癌患者，该研究或为开发新型疗法通过增强吉西他滨的功效来阻断肿瘤生长提供希望。文章中研究者通过对小鼠进行研究发现，抑制一种名为上皮细胞间质转型(EMT)的细胞可塑性过程同吉西他滨的结合或许就可以增强该药物的功效，Raghu Kalluri博士表示，尽管当前存在很多疗法，但对胰腺癌患者的预后往往较差，文章中，研究者过对胚胎细胞的EMT可塑性过程进行了重点研究，该过程可以被癌细胞拦截，而且被认为可以帮助癌细胞向其他器官中迁移。癌细胞可以通过分裂或者迁移不断扩散，从而引发癌症转移；当癌细胞采用EMT过程促进癌细胞迁移时，其一般就会阻断细胞分裂，而研究者发现，EMT过程可以导致癌细胞增殖被“拘捕”从而促进癌细胞对化疗的敏感性被损伤，最终影响患者对疗法的有效性。吉西他滨主要对正在分裂或增殖的细胞进行作用，当癌细胞推迟增殖时，比如其开启EMT程序时，抗增殖药物比如吉西他滨就不会对癌细胞进行靶向作用。研究者指出，EMT程序可以抑制药物的运输和蛋白质的浓缩，从而会不经意地保护癌细胞免于诸如吉西他滨等抗增殖药物的杀灭作用，而和EMT程序增加而引发的胰腺癌患者生存率降低之间的相互关联似乎取决于患者对化疗反应能力的损伤，进而导致患者总体预后不良及转移发生率上升。而抑制EMT过程或许会导致肿瘤对吉西他滨的反应增强；最后研究者说道，总而言之，本文研究中我们提供了一定的机会来评估靶向作用EMT过程增强肿瘤对化疗的反应，为后期开发新型靶向疗法来抑制肿瘤耐药性的产生提供了新的线索和思路

人白介素7(IL-7)酶联免疫吸附测定试剂盒参考方法特别说明： *: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整） #: 一周内使用可存于4℃，需长时间存放或多次使用建议存于-20℃. 相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出！ 检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人IL-7抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人IL-7会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人IL-7抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人IL-7抗体与结合在包被抗体上的人IL-7结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，IL-7浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中IL-7的浓度。 样品收集: 1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂样品。 3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。 4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测 6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。 7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。 8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。 试验所需自备物品: 1. 酶标仪(450nm波长滤光片) 2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水 4. 吸水纸 检测前准备工作: 1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。 2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。 3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为500pg/mL）。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.813、0pg/mL，标准品&样品稀释液直接作为空白孔0pg/mL。如配制250pg/mL标准品：取0.5mL500pg/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。   4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。 5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。当日使用。 标准品稀释方法图例：（以500μL/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200μL/管）   1 2 3 4 5 6 7 8 Tube  500 250 125 62.5 31.25 15.625 7.813 0 pg/mL 洗涤方法: 1. 自动洗板机：每孔加入洗涤液350μL，注入与吸出间隔60秒。 2. 手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350μL，浸泡1-2分钟，吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。  操作步骤: 实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。 1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加标准品&样品稀释液 100μL，余孔分别加标准品或待测样品 100μL，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育 90 分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每个孔中加入生物素化抗体工作液 100μL（在使用前 15 分钟内配制），酶标板加上覆膜，37℃温育 1 小时。 3. 弃去孔内液体，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 1-2 分钟，大约 350μL/每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。 4. 每孔加酶结合物工作液（临用前 15 分钟内配制）100μL，加上覆膜，37℃温育 30 分钟。 5. 弃去孔内液体，甩干，洗板 5 次，方法同步骤 3。 6. 每孔加底物溶液(TMB)90μL，酶标板加上覆膜 37℃避光孵育 15 分钟左右（根据实际显色情况酌情缩短或延长，但不可超过 30 分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止）。 7. 每孔加终止液 50μL，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。 8. 立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度（OD 值）。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。 9. 实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存。 注意事项： 1. 保存：试剂盒中各试剂请按说明书提示合理存放。在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染，否则可能会出现错误的结果。 2. 酶标板：刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。暂时不用的板条应拆卸后放入备用铝箔袋，按推荐温度存放！ 3. 加样：加样或加试剂时，第一个孔与最后一个孔的加样时间间隔如果太大，将会导致不同的“预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。每次的加样时间最好控制在10分钟内。推荐设置复孔。 4. 温育：为防止样品蒸发，实验时必须给酶标板覆膜；洗板后应尽快进行下步操作，避免酶标板处于干燥状态；严格遵守给定的温育时间和温度。 5. 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在吸水纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。在读数前要注意清除底部残留的液体和手指印，以免影响酶标仪读数。 6. 试剂配制：Concentrated Biotinylated Detection Ab及Concentrated HRP Conjugate体积较小，运输过程会使液体沾到管壁或瓶盖，因此使用前1000转/分离心1min，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。取用前，请用移液器小心吹打4-5次使溶液混匀。标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液请根据所需用量配制，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确配制标准品及工作液，尽量不要微量配制（如吸取Concentrated Biotinylated Detection Ab时，一次不要小于10μL），以避免由于不准确稀释而造成浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液。若需要分次使用标准品应按照每一次用量分装，将其放在-20～-80℃贮存。避免反复冻融。 7. 显色时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如每隔5分钟），如梯度已很明显，请提前加入终止液终止反应，避免颜色过深影响酶标仪读数。 8. 底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。 9. 混匀：充分轻微混匀对反应结果尤为重要，最好使用微量振荡器(使用最低频率)，如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻敲击酶标板框混匀。 10. 安全：试验中请穿着实验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液样品时，请按国家生物试验室安全防护条例执行。 11. 不同批号的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外） 12. 试验中所用的EP管和吸头均为一次性使用，严禁混用，否则将影响试验结果！ 结果判断: 1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图，如设置复孔，则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。 2. 推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 3. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。 灵敏度、检测范围、特异性和重复性: ●灵敏度：最小可测 4.688pg/mL。 ●检测范围：7.813–500pg/mL。 ● 特异性：可检测重组或天然的人 IL-7，且与其它相关蛋白无交叉反应。 ● 重复性：板内，板间变异系数均操作概要 1. 在各孔中加入标准品或样品各 100μL， 37℃孵育 90 分钟 2. 倒去孔内液体，加入 100μL 生物素化抗体工作液，37℃孵育 60 分钟 3. 洗涤 3 次 4. 加入 100μL 酶结合物工作液， 37℃孵育 30 分钟 5. 洗涤 5 次 6. 加入 90μL 底物溶液， 37℃孵育 15 分钟左右 7. 加入 50μL 终止液，立即在 450nm 波长处测量 OD 值 8. 结果计算 

人白介素10受体β(IL10Rβ)酶联免疫吸附测定试剂盒参考方法特别说明： *: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整） #: 一周内使用可存于4℃，需长时间存放或多次使用建议存于-20℃. 相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出！ 检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人IL10Rβ抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人IL10Rβ会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人IL10Rβ抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人IL10Rβ抗体与结合在包被抗体上的人IL10Rβ结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，IL10Rβ浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中IL10Rβ的浓度。 样品收集: 1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂样品。 3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。 4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测 6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。 7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。 8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。 试验所需自备物品: 1. 酶标仪(450nm波长滤光片) 2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水 4. 吸水纸 检测前准备工作: 1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。 2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。 3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为2000pg/mL）。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：2000、1000、500、250、125、62.5、31.25、0pg/mL，标准品&样品稀释液直接作为空白孔0pg/mL。如配制1000pg/mL标准品：取0.5mL2000pg/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。  4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。 5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。当日使用。 标准品稀释方法图例：（以500μL/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200μL/管）   1 2 3 4 5 6 7 8 Tube  2000 1000 500 250 125 62.5 31.25 0 pg/mL 洗涤方法: 1. 自动洗板机：每孔加入洗涤液350μL，注入与吸出间隔60秒。 2. 手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350μL，浸泡1-2分钟，吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。 操作步骤: 实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。 1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加标准品&样品稀释液 100μL，余孔分别加标准品或待测样品 100μL，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育 90 分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每个孔中加入生物素化抗体工作液 100μL（在使用前 15 分钟内配制），酶标板加上覆膜，37℃温育 1 小时。 3. 弃去孔内液体，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 1-2 分钟，大约 350μL/每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。 4. 每孔加酶结合物工作液（临用前 15 分钟内配制）100μL，加上覆膜，37℃温育 30 分钟。 5. 弃去孔内液体，甩干，洗板 5 次，方法同步骤 3。 6. 每孔加底物溶液(TMB)90μL，酶标板加上覆膜 37℃避光孵育 15 分钟左右（根据实际显色情 况酌情缩短或延长，但不可超过 30 分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止）。 7. 每孔加终止液 50μL，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。 8. 立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度（OD 值）。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。 9. 实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存。 注意事项： 1. 保存：试剂盒中各试剂请按说明书提示合理存放。在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染，否则可能会出现错误的结果。 2. 酶标板：刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。暂时不用的板条应拆卸后放入备用铝箔袋，按推荐温度存放！ 3. 加样：加样或加试剂时，第一个孔与最后一个孔的加样时间间隔如果太大，将会导致不同的“预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。每次的加样时间最好控制在10分钟内。推荐设置复孔。 4. 温育：为防止样品蒸发，实验时必须给酶标板覆膜；洗板后应尽快进行下步操作，避免酶标板处于干燥状态；严格遵守给定的温育时间和温度。 5. 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在吸水纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。在读数前要注意清除底部残留的液体和手指印，以免影响酶标仪读数。 6. 试剂配制：Concentrated Biotinylated Detection Ab及Concentrated HRP Conjugate体积较小，运输过程会使液体沾到管壁或瓶盖，因此使用前1000转/分离心1min，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。取用前，请用移液器小心吹打4-5次使溶液混匀。标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液请根据所需用量配制，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确配制标准品及工作液，尽量不要微量配制（如吸取Concentrated Biotinylated Detection Ab时，一次不要小于10μL），以避免由于不准确稀释而造成浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液。若需要分次使用标准品应按照每一次用量分装，将其放在-20～-80℃贮存。避免反复冻融。 7. 显色时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如每隔5分钟），如梯度已很明显，请提前加入终止液终止反应，避免颜色过深影响酶标仪读数。 8. 底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。 9. 混匀：充分轻微混匀对反应结果尤为重要，最好使用微量振荡器(使用最低频率)，如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻敲击酶标板框混匀。 10. 安全：试验中请穿着实验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液样品时，请按国家生物试验室安全防护条例执行。 11. 不同批号的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外） 12. 试验中所用的EP管和吸头均为一次性使用，严禁混用，否则将影响试验结果！ 结果判断: 1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图，如设置复孔，则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。 2. 推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 3. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。 灵敏度、检测范围、特异性和重复性: ●灵敏度：最小可测 18.75pg/mL。 ●检测范围：31.25–2000pg/mL。 ● 特异性：可检测重组或天然的人 IL10Rβ，且与其它相关蛋白无交叉反应。 ● 重复性：板内，板间变异系数均操作概要 1. 在各孔中加入标准品或样品各 100μL， 37℃孵育 90 分钟 2. 倒去孔内液体，加入 100μL 生物素化抗体工作液，37℃孵育 60 分钟 3. 洗涤 3 次 4. 加入 100μL 酶结合物工作液， 37℃孵育 30 分钟 5. 洗涤 5 次 6. 加入 90μL 底物溶液， 37℃孵育 15 分钟左右 7. 加入 50μL 终止液，立即在 450nm 波长处测量 OD 值 8. 结果计算 

人白介素20(IL-20)酶联免疫吸附测定试剂盒参考方法特别说明： *: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整） #: 一周内使用可存于4℃，需长时间存放或多次使用建议存于-20℃. 相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出！ 检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人IL-20抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人IL-20会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人IL-20抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人IL-20抗体与结合在包被抗体上的人IL-20结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，IL-20浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中IL-20的浓度。 样品收集: 1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂样品。 3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。 4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测 6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。 7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。 8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。 试验所需自备物品: 1. 酶标仪(450nm波长滤光片) 2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水 4. 吸水纸 检测前准备工作: 1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。 2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。 3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为4000pg/mL）。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：4000、2000、1000、500、250、125、62.5、0pg/mL，标准品&样品稀释液直接作为空白孔0pg/mL。如配制2000pg/mL标准品：取0.5mL4000pg/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。  4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。 5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。当日使用。 标准品稀释方法图例：（以500μL/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200μL/管）  1 2 3 4 5 6 7 8 Tube  4000 2000 1000 500 250 125 62.5 0 pg/mL 洗涤方法: 1. 自动洗板机：每孔加入洗涤液350μL，注入与吸出间隔60秒。 2. 手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350μL，浸泡1-2分钟，吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。 操作步骤: 实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。 1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加标准品&样品稀释液 100μL，余孔分别加标准品或待测样品 100μL，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育 90 分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每个孔中加入生物素化抗体工作液 100μL（在使用前 15 分钟内配制），酶标板加上覆膜，37℃温育 1 小时。 3. 弃去孔内液体，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 1-2 分钟，大约 350μL/每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。 4. 每孔加酶结合物工作液（临用前 15 分钟内配制）100μL，加上覆膜，37℃温育 30 分钟。 5. 弃去孔内液体，甩干，洗板 5 次，方法同步骤 3。 6. 每孔加底物溶液(TMB)90μL，酶标板加上覆膜 37℃避光孵育 15 分钟左右（根据实际显色情况酌情缩短或延长，但不可超过 30 分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止）。 7. 每孔加终止液 50μL，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。 8. 立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度（OD 值）。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。 9. 实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存。 注意事项： 1. 保存：试剂盒中各试剂请按说明书提示合理存放。在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染，否则可能会出现错误的结果。 2. 酶标板：刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。暂时不用的板条应拆卸后放入备用铝箔袋，按推荐温度存放！ 3. 加样：加样或加试剂时，第一个孔与最后一个孔的加样时间间隔如果太大，将会导致不同的“预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。每次的加样时间最好控制在10分钟内。推荐设置复孔。 4. 温育：为防止样品蒸发，实验时必须给酶标板覆膜；洗板后应尽快进行下步操作，避免酶标板处于干燥状态；严格遵守给定的温育时间和温度。 5. 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在吸水纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。在读数前要注意清除底部残留的液体和手指印，以免影响酶标仪读数。 6. 试剂配制：Concentrated Biotinylated Detection Ab及Concentrated HRP Conjugate体积较小，运输过程会使液体沾到管壁或瓶盖，因此使用前1000转/分离心1min，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。取用前，请用移液器小心吹打4-5次使溶液混匀。标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液请根据所需用量配制，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确配制标准品及工作液，尽量不要微量配制（如吸取Concentrated Biotinylated Detection Ab时，一次不要小于10μL），以避免由于不准确稀释而造成浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液。若需要分次使用标准品应按照每一次用量分装，将其放在-20～-80℃贮存。避免反复冻融。 7. 显色时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如每隔5分钟），如梯度已很明显，请提前加入终止液终止反应，避免颜色过深影响酶标仪读数。 8. 底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。 9. 混匀：充分轻微混匀对反应结果尤为重要，最好使用微量振荡器(使用最低频率)，如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻敲击酶标板框混匀。 10. 安全：试验中请穿着实验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液样品时，请按国家生物试验室安全防护条例执行。 11. 不同批号的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外） 12. 试验中所用的EP管和吸头均为一次性使用，严禁混用，否则将影响试验结果！ 结果判断: 1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图，如设置复孔，则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。 2. 推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 3. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。 灵敏度、检测范围、特异性和重复性: ●灵敏度：最小可测 37.5pg/mL。 ●检测范围：62.5–4000pg/mL。 ● 特异性：可检测重组或天然的人 IL-20，且与其它相关蛋白无交叉反应。 ● 重复性：板内，板间变异系数均操作概要 1. 在各孔中加入标准品或样品各 100μL， 37℃孵育 90 分钟 2. 倒去孔内液体，加入 100μL 生物素化抗体工作液，37℃孵育 60 分钟 3. 洗涤 3 次 4. 加入 100μL 酶结合物工作液， 37℃孵育 30 分钟 5. 洗涤 5 次 6. 加入 90μL 底物溶液， 37℃孵育 15 分钟左右 7. 加入 50μL 终止液，立即在 450nm 波长处测量 OD 值 8. 结果计算 

日前，来自圣塔菲研究所等处的研究人员通过研究表示，尽管看似相关的细胞间存在着相似的形状、功能、甚至DNA，但这些细胞或许经历着不同的进化路径，相关研究刊登于国际著名杂志Science上，该研究或为开发鉴别细胞类型的新方法提供帮助。10月份多个生物学家召集名为“细胞类型和细胞起源”的研究小组来探讨利用不同且可靠的思路来对细胞进行分类，研究小组成员由圣塔菲研究所和亚利桑那州立大学的相关科学家组成。传统方法是基于细胞的结构、功能或者在有机体中的位置来对细胞进行分类，而本文研究中研究小组却提出了一种利用进化的方法来对细胞进行分类，研究者主要关注细胞内基因的表达谱，其可以帮助揭示细胞的部分基因组处于活性状态，这些特殊的基因表达谱或许就可以反应表面上相似的细胞间不同的进化起源。这项研究中研究人员表示，比如对人类大脑和生殖道中看似相似的细胞进行分类，研究者在单一的神经系统中描述了神经元的不同进化历史，同时还揭示了跨越物种的相似细胞是否可以帮助解释进化上的连通性，比如脊椎动物和刺胞动物（水母）的横纹肌细胞。最后研究者表示，我们的研究小组还写了一篇分析文章，在文章中我们阐释了如何通过基因表达谱系以及进化方法的优势来理解不同类型的细胞，同时对不同类型的细胞进行分类

在今天进行的美国心脏病协会年会上由NIH资助的高血压实验SPRINT结果正式公布，同时在NEJM上发表，并伴随发表三篇评论，显示业界对此实验的重视。这个实验招募了9361名50岁以上、血压130毫米汞柱以上、没有糖尿病的患者。严格控制组一年后血压控制在121.4毫米，标准组在136.2毫米。随访3.26年后因疗效显着提前终止，结果120毫米组全因死亡155人，心血管死亡37人，而140毫米组分别为210和65人。120毫米组复合终点（心梗、急性心脏病、心衰、中风、心血管死亡）发生率为5.2%，140毫米组为6.8%。但严格控制组安全性事件显着增加。高血压是最早显示改善所谓化验指标可以带来收益的慢性病，早在50年代就有这方面数据。据估计50%的心血管疾病来自高血压。虽然降压可以带来心血管收益，但过度降压显然风险也很大，所以业界对血压控制在什么范围并无定论。不同机构给出的指南不同，但根据年龄、并发症一般在130-150毫米之间。以前曾有一个叫做ACCORD的试验比较控制在120和140毫米的区别但没有显示显着统计区别。但那个试验较小，只能区分27%以上的风险，而且人群是糖尿病并发人群。这个实验曾经在九月因疗效突出而提前停止，但当时没有公布太多细节，只是说收缩压控制在120毫米汞柱比140毫米汞柱死亡风险下降约25%。今天的结果显示不仅相对风险下降显着，绝对风险也同样显着。三年避免一例一级终点需要治疗61人，避免一例死亡需治疗90人，而且亚组疗效均衡，副作用可以控制。非心血管死亡也下降约20%，不知是因为高血压有心血管以外的不良作用还是分组不均衡不得而知。由于这个试验较为庞大这些结果非常可靠。这个结果会影响高血压的标准疗法，并会显着扩大高血压这个相对成熟的市场。现在140毫米的治疗目标即使在美国也只有1/3-1/2的患者能达到，在发展中国家据估计不到10%的病人能达到这个目标。如果以120毫米作为治疗目标显然大大增加治疗难度。这个试验达到120毫米平均使用3种降压药，但实际治疗中医生不愿使用2种以上的药物降压。为了避免低血压病人必须花更长时间滴定药量，医生需要更长时间检测病人，这些因素可能导致依从性下降和治疗成本的上升。当然这为新型高效降压药提供了一个商机。使用方便、更为安全有效的降压药现在有了更大的市场。如果把高血压的定义从140降低到120毫米，仅美国一个市场就一夜之间多出2500万新病人，这个新增市场就是整个癌症市场的两倍。第一个受益的可能是诺华的心衰药物Entresto，因为这是两个降压药的组合并且已经在二期临床显示降压疗效。高血压是个相对成熟的市场，但一直由便宜老药控制。如果现有药物无法安全有效地达到新的治疗目标，这个庞大的市场可能会再度成为制药工业关注的领域

DNA反应了动态信息、平衡储存的有效机制及一种访问需求，将大约1.8米长的DNA包装入细胞核中看似是一件得不偿失的事情。另一方面，又是如何进行再拆分来获取所需的DNA片段和基因呢？这就需要明确的组织化。近日，一项刊登在国际杂志Molecular Cell上的研究论文中，来自英国医学理事研究会(MRC)临床科学中心(MRC Clinical Sciences Centre)等处的科学家针对基因组包装及再拆分进行了详细的解析。简单来讲，DNA聚集包装可以形成染色质，而染色质是一种DNA和组蛋白的混合体，其可以被适当修饰，而组蛋白则需要不断地替代来维持染色质争产的功能以便可以从事正常的细胞活动。为了理解组蛋白替代的重要性，文章中研究者利用发育中的小鼠卵母细胞进行研究，发育中的卵母细胞需要一种机械性的系统来揭示DNA如何缺失复制过程的情况下被包装进入细胞，单独的卵细胞并不会分裂，然而其基因组却会随着卵细胞的发育而具有高度的活性，卵细胞在成熟准备受精之前通常会参与基因的开启和关闭以及DNA的修饰工作。文章中，研究者剔除了一种组蛋白伴侣蛋白，伴侣蛋白是一类主要负责替代染色质结构中组蛋白的特殊蛋白质，同时研究者还分析了卵细胞发育的效应，DNA的完整性以及DNA甲基化的积累。Gavin Kelsey教授说道，缺失Hira组蛋白伴侣蛋白的卵母细胞往往会表现出发育缺失的现象，这就会导致细胞死亡；一旦整个系统被破坏，卵细胞就会积累大量的DNA损伤以及染色质改变，这就会引发基因不能够被有效地沉默或激活。研究者同时还阐明了卵母细胞中不同的表观遗传系统之间的精细关联，研究者在文章中强调了组蛋白更新对于维持基因组精确度的重要性，当然这对于理解机体保护基因组功能完整性也非常重要。对卵母细胞发育过程的研究或为理解基因组的动态变化及DNA的复制提供了线索，也为阐明维持染色质动态对于配偶子完整性的重要作用

人短缩素/短蛋白聚糖(BCAN)酶联免疫吸附测定试剂盒操作步骤特别说明： *: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整） #: 一周内使用可存于4℃，需长时间存放或多次使用建议存于-20℃. 相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出！  检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人BCAN抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人BCAN会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人BCAN抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人BCAN抗体与结合在包被抗体上的人BCAN结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，BCAN浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中BCAN的浓度。 样品收集: 1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂样品。 3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。 4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测 6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。 7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。 8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。  试验所需自备物品: 1. 酶标仪(450nm波长滤光片) 2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水 4. 吸水纸  检测前准备工作: 1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。 2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。 3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为20ng/mL）。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：20、10、5、2.5、1.25、0.625、0.313、0ng/mL，标准品&样品稀释液直接作为空白孔0ng/mL。如配制10ng/mL标准品：取0.5mL20ng/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。  4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。 5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。当日使用。 标准品稀释方法图例：（以500μL/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200μL/管）   1 2 3 4 5 6 7 8 Tube  20 10 5 2.5 1.25 0.625 0.313 0 ng/mL  洗涤方法: 1. 自动洗板机：每孔加入洗涤液350μL，注入与吸出间隔60秒。 2. 手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350μL，浸泡1-2分钟，吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。  操作步骤: 实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。 1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加标准品&样品稀释液 100μL，余孔分别加标准品或待测样品 100μL，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育 90 分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每个孔中加入生物素化抗体工作液 100μL（在使用前 15 分钟内配制），酶标板加上覆膜，37℃温育 1 小时。 3. 弃去孔内液体，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 1-2 分钟，大约 350μL/每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。 4. 每孔加酶结合物工作液（临用前 15 分钟内配制）100μL，加上覆膜，37℃温育 30 分钟。 5. 弃去孔内液体，甩干，洗板 5 次，方法同步骤 3。 6. 每孔加底物溶液(TMB)90μL，酶标板加上覆膜 37℃避光孵育 15 分钟左右（根据实际显色情 况酌情缩短或延长，但不可超过 30 分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止）。 7. 每孔加终止液 50μL，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。 8. 立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度（OD 值）。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。 9. 实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存。  注意事项： 1. 保存：试剂盒中各试剂请按说明书提示合理存放。在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染，否则可能会出现错误的结果。 2. 酶标板：刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。暂时不用的板条应拆卸后放入备用铝箔袋，按推荐温度存放！ 3. 加样：加样或加试剂时，第一个孔与最后一个孔的加样时间间隔如果太大，将会导致不同的“预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。每次的加样时间最好控制在10分钟内。推荐设置复孔。 4. 温育：为防止样品蒸发，实验时必须给酶标板覆膜；洗板后应尽快进行下步操作，避免酶标板处于干燥状态；严格遵守给定的温育时间和温度。 5. 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在吸水纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。在读数前要注意清除底部残留的液体和手指印，以免影响酶标仪读数。 6. 试剂配制：Concentrated Biotinylated Detection Ab及Concentrated HRP Conjugate体积较小，运输过程会使液体沾到管壁或瓶盖，因此使用前1000转/分离心1min，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。取用前，请用移液器小心吹打4-5次使溶液混匀。标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液请根据所需用量配制，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确配制标准品及工作液，尽量不要微量配制（如吸取Concentrated Biotinylated Detection Ab时，一次不要小于10μL），以避免由于不准确稀释而造成浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液。若需要分次使用标准品应按照每一次用量分装，将其放在-20～-80℃贮存。避免反复冻融。 7. 显色时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如每隔5分钟），如梯度已很明显，请提前加入终止液终止反应，避免颜色过深影响酶标仪读数。 8. 底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。 9. 混匀：充分轻微混匀对反应结果尤为重要，最好使用微量振荡器(使用最低频率)，如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻敲击酶标板框混匀。 10. 安全：试验中请穿着实验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液样品时，请按国家生物试验室安全防护条例执行。 11. 不同批号的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外） 12. 试验中所用的EP管和吸头均为一次性使用，严禁混用，否则将影响试验结果！ 结果判断: 1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图，如设置复孔，则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。 2. 推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 3. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。  灵敏度、检测范围、特异性和重复性: ●灵敏度：最小可测 0.188ng/mL。 ●检测范围：0.313–20ng/mL。 ● 特异性：可检测重组或天然的人 BCAN，且与其它相关蛋白无交叉反应。 ● 重复性：板内，板间变异系数均 操作概要 1. 在各孔中加入标准品或样品各 100μL， 37℃孵育 90 分钟 2. 倒去孔内液体，加入 100μL 生物素化抗体工作液，37℃孵育 60 分钟 3. 洗涤 3 次 4. 加入 100μL 酶结合物工作液， 37℃孵育 30 分钟 5. 洗涤 5 次 6. 加入 90μL 底物溶液， 37℃孵育 15 分钟左右 7. 加入 50μL 终止液，立即在 450nm 波长处测量 OD 值 8. 结果计算

人乳腺癌易感蛋白2(BRCA2)酶联免疫吸附测定试剂盒操作步骤特别说明： *: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整） #: 一周内使用可存于4℃，需长时间存放或多次使用建议存于-20℃. 相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出！  检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人BRCA2抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人BRCA2会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人BRCA2抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人BRCA2抗体与结合在包被抗体上的人BRCA2结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，BRCA2浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中BRCA2的浓度。 样品收集: 1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂样品。 3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。 4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测 6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。 7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。 8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。  试验所需自备物品: 1. 酶标仪(450nm波长滤光片) 2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水 4. 吸水纸  检测前准备工作: 1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。 2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。 3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为20ng/mL）。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：20、10、5、2.5、1.25、0.625、0.313、0ng/mL，标准品&样品稀释液直接作为空白孔0ng/mL。如配制10ng/mL标准品：取0.5mL20ng/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。   4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。 5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。当日使用。 标准品稀释方法图例：（以500μL/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200μL/管）   1 2 3 4 5 6 7 8 Tube  20 10 5 2.5 1.25 0.625 0.313 0 ng/mL  洗涤方法: 1. 自动洗板机：每孔加入洗涤液350μL，注入与吸出间隔60秒。 2. 手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350μL，浸泡1-2分钟，吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。  操作步骤: 实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。 1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加标准品&样品稀释液 100μL，余孔分别加标准品或待测样品 100μL，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育 90 分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每个孔中加入生物素化抗体工作液 100μL（在使用前 15 分钟内配制），酶标板加上覆膜，37℃温育 1 小时。 3. 弃去孔内液体，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 1-2 分钟，大约 350μL/每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。 4. 每孔加酶结合物工作液（临用前 15 分钟内配制）100μL，加上覆膜，37℃温育 30 分钟。 5. 弃去孔内液体，甩干，洗板 5 次，方法同步骤 3。 6. 每孔加底物溶液(TMB)90μL，酶标板加上覆膜 37℃避光孵育 15 分钟左右（根据实际显色情况酌情缩短或延长，但不可超过 30 分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止）。 7. 每孔加终止液 50μL，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。 8. 立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度（OD 值）。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。 9. 实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存。  注意事项： 1. 保存：试剂盒中各试剂请按说明书提示合理存放。在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染，否则可能会出现错误的结果。 2. 酶标板：刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。暂时不用的板条应拆卸后放入备用铝箔袋，按推荐温度存放！ 3. 加样：加样或加试剂时，第一个孔与最后一个孔的加样时间间隔如果太大，将会导致不同的“预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。每次的加样时间最好控制在10分钟内。推荐设置复孔。 4. 温育：为防止样品蒸发，实验时必须给酶标板覆膜；洗板后应尽快进行下步操作，避免酶标板处于干燥状态；严格遵守给定的温育时间和温度。 5. 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在吸水纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。在读数前要注意清除底部残留的液体和手指印，以免影响酶标仪读数。 6. 试剂配制：Concentrated Biotinylated Detection Ab及Concentrated HRP Conjugate体积较小，运输过程会使液体沾到管壁或瓶盖，因此使用前1000转/分离心1min，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。取用前，请用移液器小心吹打4-5次使溶液混匀。标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液请根据所需用量配制，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确配制标准品及工作液，尽量不要微量配制（如吸取Concentrated Biotinylated Detection Ab时，一次不要小于10μL），以避免由于不准确稀释而造成浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液。若需要分次使用标准品应按照每一次用量分装，将其放在-20～-80℃贮存。避免反复冻融。 7. 显色时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如每隔5分钟），如梯度已很明显，请提前加入终止液终止反应，避免颜色过深影响酶标仪读数。 8. 底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。 9. 混匀：充分轻微混匀对反应结果尤为重要，最好使用微量振荡器(使用最低频率)，如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻敲击酶标板框混匀。 10. 安全：试验中请穿着实验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液样品时，请按国家生物试验室安全防护条例执行。 11. 不同批号的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外） 12. 试验中所用的EP管和吸头均为一次性使用，严禁混用，否则将影响试验结果！ 结果判断: 1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图，如设置复孔，则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。 2. 推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 3. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。  灵敏度、检测范围、特异性和重复性: ●灵敏度：最小可测 0.188ng/mL。 ●检测范围：0.313–20ng/mL。 ● 特异性：可检测重组或天然的人 BRCA2，且与其它相关蛋白无交叉反应。 ● 重复性：板内，板间变异系数均 操作概要 1. 在各孔中加入标准品或样品各 100μL， 37℃孵育 90 分钟 2. 倒去孔内液体，加入 100μL 生物素化抗体工作液，37℃孵育 60 分钟 3. 洗涤 3 次 4. 加入 100μL 酶结合物工作液， 37℃孵育 30 分钟 5. 洗涤 5 次 6. 加入 90μL 底物溶液， 37℃孵育 15 分钟左右 7. 加入 50μL 终止液，立即在 450nm 波长处测量 OD 值 8. 结果计算

人胸肾表达趋化因子(BRAK/CXCL14)酶联免疫吸附测定试剂盒操作步骤特别说明： *: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整） #: 一周内使用可存于4℃，需长时间存放或多次使用建议存于-20℃. 相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出！  检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人BRAK/CXCL14抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人BRAK/CXCL14会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人BRAK/CXCL14抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人BRAK/CXCL14抗体与结合在包被抗体上的人BRAK/CXCL14结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，BRAK/CXCL14浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中BRAK/CXCL14的浓度。  样品收集: 1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂样品。 3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。 4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测 6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。 7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。 8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。  试验所需自备物品: 1. 酶标仪(450nm波长滤光片) 2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水 4. 吸水纸  检测前准备工作: 1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。 2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。 3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为10ng/mL）。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：10、5、2.5、1.25、0.625、0.313、0.156、0ng/mL，标准品&样品稀释液直接作为空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL标准品：取0.5mL10ng/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品& 样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。 4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。 5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。当日使用。 标准品稀释方法图例：（以500μL/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200μL/管）   1 2 3 4 5 6 7 8 Tube  10 5 2.5 1.25 0.625 0.313 0.156 0 ng/mL  洗涤方法: 1. 自动洗板机：每孔加入洗涤液350μL，注入与吸出间隔60秒。 2. 手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350μL，浸泡1-2分钟，吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。  操作步骤: 实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。 1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加标准品&样品稀释液 100μL，余孔分别加标准品或待测样品 100μL，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育 90 分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每个孔中加入生物素化抗体工作液 100μL（在使用前 15 分钟内配制），酶标板加上覆膜，37℃温育 1 小时。 3. 弃去孔内液体，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 1-2 分钟，大约 350μL/每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。 4. 每孔加酶结合物工作液（临用前 15 分钟内配制）100μL，加上覆膜，37℃温育 30 分钟。 5. 弃去孔内液体，甩干，洗板 5 次，方法同步骤 3。  6. 每孔加底物溶液(TMB)90μL，酶标板加上覆膜 37℃避光孵育 15 分钟左右（根据实际显色情况酌情缩短或延长，但不可超过 30 分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止）。 7. 每孔加终止液 50μL，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。 8. 立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度（OD 值）。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。 9. 实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存。  注意事项： 1. 保存：试剂盒中各试剂请按说明书提示合理存放。在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染，否则可能会出现错误的结果。 2. 酶标板：刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。暂时不用的板条应拆卸后放入备用铝箔袋，按推荐温度存放！ 3. 加样：加样或加试剂时，第一个孔与最后一个孔的加样时间间隔如果太大，将会导致不同的“预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。每次的加样时间最好控制在10分钟内。推荐设置复孔。 4. 温育：为防止样品蒸发，实验时必须给酶标板覆膜；洗板后应尽快进行下步操作，避免酶标板处于干燥状态；严格遵守给定的温育时间和温度。 5. 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在吸水纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。在读数前要注意清除底部残留的液体和手指印，以免影响酶标仪读数。 6. 试剂配制：Concentrated Biotinylated Detection Ab及Concentrated HRP Conjugate体积较小，运输过程会使液体沾到管壁或瓶盖，因此使用前1000转/分离心1min，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。取用前，请用移液器小心吹打4-5次使溶液混匀。标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液请根据所需用量配制，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确配制标准品及工作液，尽量不要微量配制（如吸取Concentrated Biotinylated Detection Ab时，一次不要小于10μL），以避免由于不准确稀释而造成浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液。若需要分次使用标准品应按照每一次用量分装，将其放在-20～-80℃贮存。避免反复冻融。 7. 显色时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如每隔5分钟），如梯度已很明显，请提前加入终止液终止反应，避免颜色过深影响酶标仪读数。 8. 底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。 9. 混匀：充分轻微混匀对反应结果尤为重要，最好使用微量振荡器(使用最低频率)，如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻敲击酶标板框混匀。 10. 安全：试验中请穿着实验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液样品时，请按国家生物试验室安全防护条例执行。 11. 不同批号的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外） 12. 试验中所用的EP管和吸头均为一次性使用，严禁混用，否则将影响试验结果！ 结果判断: 1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图，如设置复孔，则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。 2. 推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 3. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。  灵敏度、检测范围、特异性和重复性: ●灵敏度：最小可测 0.094ng/mL。 ●检测范围：0.156–10ng/mL。 ● 特异性：可检测重组或天然的人 BRAK/CXCL14，且与其它相关蛋白无交叉反应。 ● 重复性：板内，板间变异系数均 操作概要 1. 在各孔中加入标准品或样品各 100μL， 37℃孵育 90 分钟 2. 倒去孔内液体，加入 100μL 生物素化抗体工作液，37℃孵育 60 分钟 3. 洗涤 3 次 4. 加入 100μL 酶结合物工作液， 37℃孵育 30 分钟 5. 洗涤 5 次 6. 加入 90μL 底物溶液， 37℃孵育 15 分钟左右 7. 加入 50μL 终止液，立即在 450nm 波长处测量 OD 值 8. 结果计算

慢性炎症往往和机体脆弱及年龄相关的疾病发生直接相关，同时也是个体老化的一个标志；近日，来自梅奥诊所的研究者通过研究发现，抑制关键的酶类通路或许可以降低培养皿中培养的人类细胞的炎性表现，同时还会降低老化小鼠机体的炎症和脆弱疾病症状，相关研究刊登于国际杂志Proceedings of the National Academy of Sciences上，当然研究者表示还需要后期更多的研究来帮助开发治疗机体脆弱及年龄相关的慢性炎性症状的新型疗法。本文研究中，研究者发现，JAK激酶抑制剂，一种可以阻断JAK酶类的药物，可以减少培养中的人类衰老细胞释放的因子，衰老细胞通常会引发机体和年龄相关的疾病发生和脆弱表现，而且相同的JAK抑制剂还可以降低小鼠机体的炎性介导子的水平。文章中研究者在施用JAK抑制剂前后，对老年小鼠（相当于90岁人类）进行了研究，在超过两个月的研究过程中，研究者发现，老年小鼠的机体功能得到了实质性地改善，包括握力、忍耐力和体力活动等。James Kirkland博士表示，我们想做的其中一件事情就是寻找比当前疗法更好的新型药物或疗法，我们在研究中发现很多老年患者会出现多种机体疾病，而且这些疾病的预后往往较差，有时候还会引发患者出现功效性致残(functional disability)。研究者的目标是不一定增加个体的寿命，当然要不惜一切代价保护患者的健康和寿命，研究者的目的是增强患者的健康寿命，即个体可以独立生活不依赖的状态；当前研究者开发的药物方法或其它疗法似乎仅仅能达到他们部分的研究目的。后期研究人员还需要投入大量的经历和研究来致力于人类健康的研究。

近日，来自太平洋大学的科学家通过研究开发了一种新方法，其可以明显延长机体肽类的生命，相关研究发表于国际杂志Nature Chemical Biology上，该研究或为后期开发新型肽类药物来治疗癌症及其它疾病提供思路。研究者Mamoun Alhamadsheh说道，蛋白肽类所拥有的巨大治疗潜力并没有被科学家们意识到，主要是因为这些肽类在血液中不能够维持太长时间；本文研究中我们利用一种特殊的化合物对肽类进行标记，使其可以通过在血液中较大的蛋白分子上“打便车”，利用这种方法我们就可以使得肽类在血液中免于被降解，而且可以在机体血液中维持较长时间。蛋白肽类可以被工程化操作来治疗一系列疾病，包括癌症和糖尿病等，这些小型的氨基酸链具有非常大的潜力、选择性，而且相比大分子要更加安全一些，但肽类较短的寿命迫使科学家们不得不进行大剂量且频繁给予患者来增加作用效率。本文中研究者利用新技术可以使得肽类寿命延长，这就可以降低肽类药物的使用频率，从而将帮助患者节约药物成本且提高患者的依从性。最后研究者Sravan Penchala指出，我们认为本项研究对于改善人类健康又迈进了一步，文章中我们采用的方法具有巨大的应用潜力，其不光可以帮助治疗疾病，还可以增强对患者机体的成像及诊断

大脑早期是可塑的，即大脑回路很容易重组，从而促进学习。然而，成年后大脑失去了大部分可塑能力，在遭遇损伤，例如中风后，不能再迅速地恢复失去的机能。科学家现已通过移植幼年神经细胞，成功在成年小鼠脑内恢复了早期的可塑性——从而治疗了它们在实验过程中严重受损的视觉。一项发表于五月份《神经》杂志的新研究显示，加利福尼亚大学大学欧文分校的苏尼尔·甘地（Sunil Gandhi）为首的神经学家将小鼠的胚胎干细胞移植到其他小鼠的脑内。这些细胞主要是抑制性神经元，可抑制大脑活动。研究开始前，论文第一作者梅利莎·戴维斯（Melissa Davis）曾说：“研究者普遍怀疑成年大脑是否能让这些细胞分散、整合并恢复可塑性。”多年来科学家一直在进行尝试，不断改进他们的实验方法，欧文分校的研究团队最终得到了答案：这些细胞可在脑内被整合，触发大规模神经回路重组，恢复早期发育阶段的高可塑性。神经信号测试和水迷宫测试结果显示，在视觉受损的小鼠体内植入的细胞能使其恢复正常视力。虽然科学家还未测试该移植技术可否用于其它神经疾病，但他们相信，这种技术有潜力用于许多病症和损伤，具体取决于新神经细胞是怎样恢复可塑性的。目前研究者尚还不清楚，大脑可塑性的恢复到底源于移植细胞的增生，还是它们触发了已有神经元的可塑性。如果是后者的话，那么这项治疗将促进神经回路重塑从而治愈严重的大脑损伤或中风。因为在此前的实验中这种神经元效果最好，研究团队在研究中使用了抑制性神经元。但这种特别的神经细胞也是最有潜力应用于临床的，因为很多精神疾病和神经疾病都与刺激和抑制不平衡有关，包括癫痫、精神分裂和慢性疼痛。以宾夕法尼亚大学佩雷尔曼医学院的斯图尔特·安德森（Stewart Anderson）为首的实验团队发现，为疾病模型小鼠小鼠植入从健康小鼠取出的抑制性神经元，可以改善其症状。这项新方法可以引起大脑内部大规模的改变，也许就能完全根除疾病。对于那些药物治疗无效的人而言，“采取神经细胞移植之类的大胆疗法可能会改变他们的命运。”安德森说道。在人体进行内神经细胞移植还存在着重重阻碍。首先，小鼠的干细胞移植到人体内也许未必安全有效，而科学家还不知道如让人体干细胞，转化为手术所需的神经元前体细胞。 另外，小鼠脑内接收的移植细胞要经过至少一个多月才成熟；人体细胞理论上要花更长的时间，多则要好几年。尽管还存在种种阻碍，专家们还是跃跃欲试努力突破。他们相信，未来移植神经元可以提供一种基于细胞的疗法，能够有效治疗、甚至根治与衰老相关的疾病以及发育类疾病

研究者们对NIH长期以来对肌痛性脑脊髓炎/慢性疲劳综合症研究力度不够的指责正在加剧，面对这些指责，NIH最近表示要加大力度开展对这一疾病的研究，以及开发有效的治疗手段。NIH的主任Francis Collins在采访时称一些研究员主动避开与肌痛性脑脊髓炎有关的研究，因为这一领域目前还比较混乱。许多研究人员都认为这是个难以解决的科学问题，不如把精力花在其它方面。不过我们现在正以更加坚定的态度去支持这一疾病的相关研究。对于肌痛性脑脊髓炎研究的具体投入，NIH并没有给出确切的承诺，但它下属的临床中心开展了一项对与该疾病类似的感染性疾病患者的研究计划（该疾病跨越了神经紊乱到系统性紊乱，以及免疫与睡眠异常等问题）。另外，NIH还将通过国家神经异常与痛风研究所，女性健康研究办公室开展对肌痛性脑脊髓炎方面的研究。该疾病的研究倡议者Robert Miller对NIH刚刚作出的这项决定表示赞成，同时他也赞扬了为促使这一决定达成的患者群体长期以来的不断呼吁。Miller本人是一名居住在内华达的矿工，1982年因为感染流感进而患有该病。目前NIH计划以5百万美元的预算用于该疾病的研究，美国疾控中心认为这一计划将对至少一百万美国人有影响。对这一研究的重新被重视，医学研究所（IOM）也功不可没，其于今年2月份刊登的一项报告指出，对慢性疲劳综合症的起因，病理学以及治疗方案方面的研究投入的资金实在太少。IOM甚至为该病起了一个绰号："systemic exertion intolerance disease"（再不能忍的疾病）。Collins也表示IOM的这一报告为NIH新计划的启动起到了一定的作用。Miller则认为："NIH空说大话，也没见多投一个子儿"，不过，他还是相信collins的承诺。"过去他们常常说把钱用在这上面是不科学的，现在虽然不说了，但还是啥也没有做"

近日在英国利物浦举行的NCRI癌症会议上，有两项新研究开发出了装有热敏触发元件的癌症药物"手榴弹"，这项进展能够帮助科学家对肿瘤进行直接的药物靶向治疗。 来自曼彻斯特大学的研究人员之前开发出小的膜泡样脂质体可以用来装载癌症治疗药物并将药物转运到癌细胞内，但是与其他治疗方法所面临的问题相同，如何将脂质体直接导向到肿瘤进行药物投递同时不影响健康组织是这一技术所面临的重要挑战。 最近这两项新研究表明在脂质体上装备热激活触发元件能够部分解决上述问题。研究人员在实验室内对小鼠模型体内的肿瘤进行轻微加热，通过这种方式拉开了"手榴弹"的拉环，实现了对癌细胞杀伤药物的释放并达到靶向癌细胞的目的。 来自曼彻斯特大学的Kostas Kostarelos教授这样说道："温度敏感性脂质体在携带癌症治疗药物并安全地游走于身体各处方面具有巨大潜力，它们一旦到达被加热过的癌细胞"热点"位置，热激活启动元件就会发挥作用促进脂质体释放药物。这让我们能够更加有效地将癌症治疗药物投递到肿瘤部位，并可以降低对健康细胞的附带损伤。" Kostas Kostarelos教授指出，他们将热触发温度设为42摄氏度，比正常体温高几度。虽然这项工作目前只在实验室内得到验证，但研究人员表示目前已经有一些可以根据不同的肿瘤类型对病人体内的癌细胞进行加热的方式，并且其中一些方法已经得到了临床应用。 这两项研究首次实现了通过控制温度对癌症治疗药物进行定点投掷，为新治疗方法的开发开辟了新的方向

Human ARRβ2 ELISA Kit特别说明： *: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整） #: 一周内使用可存于4℃，需长时间存放或多次使用建议存于-20℃. 相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出！ Human ARRβ2 ELISA Kit 检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人ARRβ2抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人ARRβ2会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人ARRβ2抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人ARRβ2抗体与结合在包被抗体上的人ARRβ2结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，ARRβ2浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中ARRβ2的浓度。 Human ARRβ2 ELISA Kit样品收集: 1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂样品。 3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。 4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测 具体处理方法可参考：6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。 7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。 8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。  Human ARRβ2 ELISA Kit试验所需自备物品: 1. 酶标仪(450nm波长滤光片) 2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水 4. 吸水纸  检测前准备工作: 1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。 2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。 3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为2000pg/mL）。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：2000、1000、500、250、125、62.5、31.25、0pg/mL，标准品&样品稀释液直接作为空白孔0pg/mL。如配制1000pg/mL标准品：取0.5mL2000pg/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。  4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。 5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。当日使用。 Human ARRβ2 ELISA Kit标准品稀释方法图例：（以500μL/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200μL/管） 

Human ARRβ1ELISA Kit本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人ARRβ1抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人ARRβ1与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人ARRβ1抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人ARRβ1抗体与结合在包被抗体上的人ARRβ1结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，人ARRβ1浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中人ARRβ1的浓度。Human ARRβ1ELISA Kit英文名称    Human ARRβ1 (Arrestin Beta 1) ELISA Kit    中文名称    人抑制蛋白β1(ARRβ1)酶联免疫吸附测定试剂盒    货号 H0502c    种属    Human/人    规格    96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)    检测方法    双抗体夹心法    检测范围    0~    灵敏度    0  Human ARRβ1ELISA Kit 1. 在各孔中加入标准品或样品各100μL， 37℃孵育90分钟2. 加入100μL 生物素化抗体工作液，37℃孵育60分钟3. 洗涤3次4. 加入100μL酶结合物工作液， 37℃孵育30分钟5. 洗涤5次6. 加入90μL底物溶液， 37℃孵育15分钟左右7. 加入50μL终止液，立即在450nm波长处测量OD值8. 结果计算 

Human ARHGDIα ELISA Kit特别说明： *: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整） #: 一周内使用可存于4℃，需长时间存放或多次使用建议存于-20℃. 相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出！  Human ARHGDIα ELISA Kit检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人ARHGDIα抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人ARHGDIα会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人ARHGDIα抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人ARHGDIα抗体与结合在包被抗体上的人ARHGDIα结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，ARHGDIα浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中ARHGDIα的浓度。 Human ARHGDIα ELISA Kit样品收集: 1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂样品。 3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。 4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测 具体处理方法可参考6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。 7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。 8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。  Human ARHGDIα ELISA Kit试验所需自备物品: 1. 酶标仪(450nm波长滤光片) 2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水 4. 吸水纸  检测前准备工作: 1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。 2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。 3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为10ng/mL）。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：10、5、2.5、1.25、0.625、0.313、0.156、0ng/mL，标准品&样品稀释液直接作为空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL标准品：取0.5mL10ng/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。   4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。 5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。当日使用。 标准品稀释方法图例：（以500μL/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200μL/管） 

许多研究已经证明免疫疗法在对一些癌症病人的治疗过程中非常成功，但尽管有这些成功案例的存在，我们仍然注意到大部分病人并不会对这种治疗方法产生应答。 最近，由美国密歇根大学的科学家们领导的一项研究揭示了对免疫治疗药物产生抵抗的肿瘤其内部所发生的分子变化。相关研究结果发表在国际学术期刊Nature上。 一些研究已经表明含有大量促炎症T细胞的肿瘤对基于PD-L1和PD-1抑制剂的免疫疗法应答情况更好。而炎症水平较低或T细胞数目较少的肿瘤对上述免疫疗法的应答情况相对较差。但在肿瘤内部的微环境中T细胞究竟如何得到调控一直不被人所知。 在这项研究中研究人员对人类和小鼠卵巢癌模型进行了研究，他们用表观遗传药物对癌症模型进行处理，结果发现肿瘤内部的T细胞数目出现增加。他们还在他们的模型中观察到表观遗传药物能够增强PD-L1阻断药物的抗肿瘤效应。 文章作者Weiping Zou这样说道："我们发现的分子机制或许可以解释为什么一些肿瘤是炎症性的而另外一些则不是，在此之后我们就可以知道为什么一些病人能够对免疫疗法产生很好的应答，而另外一些病人则不能。" 该研究团队最早在人类癌症微环境的树突细胞中证明了PD-L1的表达，调控以及功能性阻断效果。研究人员表示，如果能够对表观遗传机制进行重编程，免疫疗法或许会适用于更多病人。 Zou表示他们希望能够进行进一步的临床试验，对PD-L1和PD-1阻断与表观遗传治疗的联合治疗效果进行检测，看看是否可以让产生应答的病人应答情况更好，并且让非应答病人对免疫疗法产生应答