1、尽量用早期的细胞,传代太多状态不好,产毒也不好,贴壁困难。
2、塑料的瓶子,Dmem+10%的小牛血清即可,要求并不高,ATCC上有详细的培养方法。
3、主要是传代,胰酶消化点到即止,不能和其它成纤维细胞一样。
最近的体会是:不用胰酶,轻轻吹打使细胞脱壁,然后将滴管前端插一个200ul的枪头,再吹打1min左右(有点费力),肉眼看不见大的细胞团即可,此时显微镜下,可见细胞都分散开来,多数为单个,最多数个细胞,培养贴壁效果很好。因为枪头柔软,开口处小且规则,可以将细胞比较温柔地分开。
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