大鼠免疫球蛋白E含量检测,大鼠IgE ELISA

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ELISA的血样本在收集、处理和保存方面要考虑的几个问题

(1)标本在保存中如出现细菌污染所致的混浊或絮状物时,应离心沉淀后取上清检测。

(2)样本的采集及血清分离中要注意尽量避免细菌污染。一是细菌的生长所分泌的一些酶可能会对抗原抗体等蛋白产生分解作用；二是一些细菌的内源性酶本身会对用相应酶作标记的测定方法产生非特异性干扰。

(3)血清标本如是以无菌操作分离,则可以在2～8℃下保存一周,如为有菌操作,则建议冰冻保存。样本的长时间保存,应在-70℃以下。

(4)冰冻保存的血清标本须注意避免因停电等造成的反复冻融。标本的反复冻融所产生的机械剪切力将对标本中的蛋白等分子产生破坏作用,从而引起假阴性结果。此外,冻融标本的混匀亦应注意,不要进行剧烈振荡,反复颠倒混匀即可。

(5)要注意避免出现溶血。血红蛋白中含有血红素基团,其有类似过氧化物的活性,如血清标本中血红蛋白浓度较高,就很容易在温育过程中吸附于固相,从而与后面加入的HRP底物反应显色。

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ELISA的基本原理有三条：

（1）抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫学活性；

（2）抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性；

（3）酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，因此，可以按底物显色的程度显示试验结果。

由于ELISA法一方面是建立在抗原与抗体免疫学反应的基础上，因而，具有特异性。而另一方面又由于酶标记抗原或抗体是酶分子与抗原或抗体分子的结合物，它可以催化底物分子发生反应，产生放大作用，正因为此种放大作用而使本法具有很高的敏感性。因此，ELISA法是一种既敏感又特异的方法

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