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ELISA实验操作注意事项:
大部分实验室在使用酶标仪之前是通过目测判断结果,操作过程随意性较大,在使用酶标仪后操作必须规范:
A. 使用移液器加液,移液枪头不能混用。
B. 洗板要干净,避免交叉污染。
C. 严格按照试剂盒的说明书操作,反应时间准确。
D. 请勿将样品或试剂洒到仪器表面或内部,操作完成注意做好清洁工作。
E. 不要在测量过程中关闭电源。
F. 对于因试剂盒问题造成的测量结果的偏差,应根据实际情况及时修改参数,以达到最佳效果。
G. 使用后盖好防尘罩。
H. 出现技术故障时应及时与厂家联系,切勿擅自拆卸酶标仪。
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试剂盒操作中出现的问题:现象、可能原因和解决办法:
1、 不同厂家生产的试剂盒因生产工艺和操作方法略有不同,务必按照所用试剂盒严格操作,否则容易产生检测结果的不确定性.
2、 若不同批号试剂的不同组分(A液或酶工作液),或不同试剂的不同组分进行交叉使用,有可能出现显色浅或本底高,花板等情形。
3、 加样时样品量误差,对于阴或很阳的标本影响不大,但对阈值附近的标本影响极大,建议校对加样器。
4、 反应时间的误差,做大量标本时,第一孔和最后一孔以及一些特殊标本可能影响较大。
5、 由于滴瓶的精密性肯定不如加样器,不排除不同滴头滴量的误差。另外滴加过程中是否产生气泡、速度是否均匀,是否颤动等影响液量的因素均可导致以上情况。高标准要求时应使用加样器。
6、 阈值附近实际上是个灰区(gray scale),不能截然分为阴性、阳性,国外厂家均要求对这部分可疑标本进行奇数次复检,以次数多者为准,如一次阳两次阴最后判为阴,但实际上是否为阴不好说,只有判为可疑,临床上可以让患者过一段时间后再测。
7、 肉眼观察稍显色,酶标仪打印为阴性的标本在实际工作中是难以避免的,肉眼目测结果不可靠,应以酶标仪判读为准。
8、 由阴性变为强阳性原因多为操作过程中漏加试剂等有关。
9、 临界值附近标本波动为正常现象,任何试剂均不可避免。可以考虑将标本做奇数次复检。
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