大鼠B细胞淋巴瘤因子2,大鼠Bcl-2 ELISA

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常见问题：

1.加样量不一致？

解决方法：样品稀释前应充分混匀，尽可能使用同一移液器并装紧吸嘴。

2.样品数量多少不一，加样时间有长有短？

解决方法：重复某一样品时，加样时间尽可能与第一次接近。

3.保温时间不一致，洗涤条件不一致，操作人员不一致？

解决方法：重复测定标本，操作条件、人员等应尽可能与上次保持一致，以排除这些因素造成的不一致的可能性。

ELISA方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定。 但ELISA测定中影响因素较多，而且其操作中有一定的技术要求，在检测过程中除正常反应外，有时常见到一些错误的结果。引起ELISA测定错误结果的原因主要有：①标本因素；②试剂因素；③操作因素。

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试剂盒操作中出现的问题：现象、可能原因和解决办法：

1、 不同厂家生产的试剂盒因生产工艺和操作方法略有不同，务必按照所用试剂盒严格操作，否则容易产生检测结果的不确定性.

2、 若不同批号试剂的不同组分（A液或酶工作液），或不同试剂的不同组分进行交叉使用，有可能出现显色浅或本底高，花板等情形。

3、 加样时样品量误差，对于阴或很阳的标本影响不大，但对阈值附近的标本影响极大，建议校对加样器。

4、 反应时间的误差，做大量标本时，第一孔和最后一孔以及一些特殊标本可能影响较大。

5、 由于滴瓶的精密性肯定不如加样器，不排除不同滴头滴量的误差。另外滴加过程中是否产生气泡、速度是否均匀，是否颤动等影响液量的因素均可导致以上情况。高标准要求时应使用加样器。

6、 阈值附近实际上是个灰区（gray scale）,不能截然分为阴性、阳性，国外厂家均要求对这部分可疑标本进行奇数次复检，以次数多者为准，如一次阳两次阴最后判为阴，但实际上是否为阴不好说，只有判为可疑，临床上可以让患者过一段时间后再测。

7、 肉眼观察稍显色，酶标仪打印为阴性的标本在实际工作中是难以避免的，肉眼目测结果不可靠，应以酶标仪判读为准。

8、 由阴性变为强阳性原因多为操作过程中漏加试剂等有关。

9、 临界值附近标本波动为正常现象，任何试剂均不可避免。可以考虑将标本做奇数次复检。

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