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ELISA试剂盒的清洗操作注意事项
(1)试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
(2)实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
(3)不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
(4)使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
(5)使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
(6)洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
(7)底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
(8)加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
(9)按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
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常见问题:
1.加样量不一致?
解决方法:样品稀释前应充分混匀,尽可能使用同一移液器并装紧吸嘴。
2.样品数量多少不一,加样时间有长有短?
解决方法:重复某一样品时,加样时间尽可能与第一次接近。
3.保温时间不一致,洗涤条件不一致,操作人员不一致?
解决方法:重复测定标本,操作条件、人员等应尽可能与上次保持一致,以排除这些因素造成的不一致的可能性。
ELISA方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定。 但ELISA测定中影响因素较多,而且其操作中有一定的技术要求,在检测过程中除正常反应外,有时常见到一些错误的结果。引起ELISA测定错误结果的原因主要有:①标本因素;②试剂因素;③操作因素。
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