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常见问题:
1.加样量不一致?
解决方法:样品稀释前应充分混匀,尽可能使用同一移液器并装紧吸嘴。
2.样品数量多少不一,加样时间有长有短?
解决方法:重复某一样品时,加样时间尽可能与第一次接近。
3.保温时间不一致,洗涤条件不一致,操作人员不一致?
解决方法:重复测定标本,操作条件、人员等应尽可能与上次保持一致,以排除这些因素造成的不一致的可能性。
ELISA方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定。 但ELISA测定中影响因素较多,而且其操作中有一定的技术要求,在检测过程中除正常反应外,有时常见到一些错误的结果。引起ELISA测定错误结果的原因主要有:①标本因素;②试剂因素;③操作因素。
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试剂盒操作中出现的问题:现象、可能原因和解决办法:
1、 不同厂家生产的试剂盒因生产工艺和操作方法略有不同,务必按照所用试剂盒严格操作,否则容易产生检测结果的不确定性.
2、 若不同批号试剂的不同组分(A液或酶工作液),或不同试剂的不同组分进行交叉使用,有可能出现显色浅或本底高,花板等情形。
3、 加样时样品量误差,对于阴或很阳的标本影响不大,但对阈值附近的标本影响极大,建议校对加样器。
4、 反应时间的误差,做大量标本时,第一孔和最后一孔以及一些特殊标本可能影响较大。
5、 由于滴瓶的精密性肯定不如加样器,不排除不同滴头滴量的误差。另外滴加过程中是否产生气泡、速度是否均匀,是否颤动等影响液量的因素均可导致以上情况。高标准要求时应使用加样器。
6、 阈值附近实际上是个灰区(gray scale),不能截然分为阴性、阳性,国外厂家均要求对这部分可疑标本进行奇数次复检,以次数多者为准,如一次阳两次阴最后判为阴,但实际上是否为阴不好说,只有判为可疑,临床上可以让患者过一段时间后再测。
7、 肉眼观察稍显色,酶标仪打印为阴性的标本在实际工作中是难以避免的,肉眼目测结果不可靠,应以酶标仪判读为准。
8、 由阴性变为强阳性原因多为操作过程中漏加试剂等有关。
9、 临界值附近标本波动为正常现象,任何试剂均不可避免。可以考虑将标本做奇数次复检。
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