大鼠8-羟基鸟嘌呤DNA糖基化酶大鼠OGG ELISA

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测试剂盒检测原理

　　ELISA检测试剂盒应用定性夹心免疫检测技术，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板条，这些多肽是中国型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很强的肽段，分别来自于该毒株的开放阅读框2和开放阅读框3。将样品或标准品加入孔中并孵育，如果其中存在HEV IgM抗体，这些抗体就会与HEV 的多肽抗原结合，并固定在上面，洗板除去其它非特异性抗体和样品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP（辣根过氧化物酶）酶结合物，经第二次孵育后，酶结合物就会与第一次孵育结合上的HEV IgM抗体相结合，洗板除去未结合的酶结合物，加入TMB底物溶液，在第三次孵育时会发生酶-底物反应，只有那些含有HEV IgM抗体和酶结合物所形成的复合物的孔才会发生颜色变化，加入硫酸溶液终止酶和底物间的反应，并在波长: 450nm处测量O.D.值,按照本HEV IgM抗体elisa试剂盒的测试标准, O.D.值大于或等于Cut-Off值的样品被认为是初试阳性。 

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ELISA的血样本在收集、处理和保存方面要考虑的几个问题

(1)标本在保存中如出现细菌污染所致的混浊或絮状物时,应离心沉淀后取上清检测。

(2)样本的采集及血清分离中要注意尽量避免细菌污染。一是细菌的生长所分泌的一些酶可能会对抗原抗体等蛋白产生分解作用；二是一些细菌的内源性酶本身会对用相应酶作标记的测定方法产生非特异性干扰。

(3)血清标本如是以无菌操作分离,则可以在2～8℃下保存一周,如为有菌操作,则建议冰冻保存。样本的长时间保存,应在-70℃以下。

(4)冰冻保存的血清标本须注意避免因停电等造成的反复冻融。标本的反复冻融所产生的机械剪切力将对标本中的蛋白等分子产生破坏作用,从而引起假阴性结果。此外,冻融标本的混匀亦应注意,不要进行剧烈振荡,反复颠倒混匀即可。

(5)要注意避免出现溶血。血红蛋白中含有血红素基团,其有类似过氧化物的活性,如血清标本中血红蛋白浓度较高,就很容易在温育过程中吸附于固相,从而与后面加入的HRP底物反应显色。

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