ELISA试剂盒的定性或定量分析

纪宁生物

2016/07/29 09:41

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最常用的ELISA试剂盒标本，血浆一般可视为与血清同等的标本，标本引起的假阳性和假阴性结果主要是干扰性物质所致，分为内源性物质和外源性物质两种：

1．内源性物质有人认为大约40%的人血清标本中含有非特异性干扰物质，可以不同程度影响检测结果。常见的干扰物质有：类风湿因子、补体、嗜异性抗体、嗜靶抗原自身体、医源性诱导的抗鼠Ig（s）抗体、交叉反应物质和其它物质等。

（1）类风湿因子人血清中IgM、IgG型类风湿因子（RF）可以与ELISA试剂盒系统中的捕获抗体及酶标记二抗的FC段直接结合，从而导致假阳性。解决该情况的办法是：

①用F（ab）2替代完整的IgG；

②标本用联有热变性（63℃，10min）IgG的固相吸附剂处理（将热变性IgG加入到标本稀释液中同样有效）；③检测抗原时，可以用2-巯基乙醇等加入到标本稀释液中，使RF降解。

（2）补体ELISA系统中固相一抗和标记二抗过程中，抗体分子发生变构，其FC段的补体C1q分子结合位点被暴露出来，使C1q可以将二者连接起来，从而造成假阳性。解决的办法是：①用EDTA稀释标本；②用53℃，10min或56℃，30min加热血清使C1q灭活。

（3）嗜异性抗体人类血清中含有能与啮齿类动物（如鼠等）Ig（s）结合的天然嗜异性抗体，可将ELISA系统中一抗和二抗连接起来，也能造成假阳性。解决的办法是：可在标本稀释液中加入过量的动物Ig（s），但加入量不足或亚类不同时无效。ELISA试剂盒方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定。但ELISA试剂盒测定中影响因素较多，而且其操作中有一定的技术要求，在临床检验中除正常反应外，有时常可见到一些错误结果（即假阳性或假阴性结果）。