大鼠蛋白激酶CElisa试剂盒如何检验？

2015-04-27 16:27

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使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中蛋白激酶C（PKC）含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠蛋白激酶C（PKC）水平。用纯化的大鼠蛋白激酶C（PKC）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入蛋白激酶C（PKC），再与HRP标记的蛋白激酶C（PKC）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的蛋白激酶C（PKC）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠蛋白激酶C（PKC）浓度。标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。计算以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

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