ELISA法测定肺炎衣原体实验步骤

2015-04-08 15:59

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资料摘要：

实验检验过程： 1、配制洗涤液 l瓶浓缩洗涤液加475ml蒸馏水。配好的洗涤液短期内可置室温环境中，长期可存于2—8℃环境中。 2、配制酶联物按1：101倍稀释，即取1u1浓缩酶联物加酶联物稀释液1 000ul(根据检测标本数量确定稀释量)，未用完的丢弃。 3、待试剂盒平衡至室温后，待测标本按1；51稀释，即取4tA血清与200u1标本稀释液混合。 4、将稀释标本置37℃环境中20min。 5、各加100ul阳性、弱阳性、阴性对照及已稀释待测标本上清液于相应孔中，空白对照孔加100u1标本稀释液，盖好反应板，置37℃环境中30min。 6、甩尽板中液体，每孔用200～300ul洗涤液洗5次，每次均需拍干。 7、每孔加酶联物100~1，盖好反应板，置37℃环境中30min。 8、甩尽板中液体，洗5次，每次拍干。 9、加底物A、B各1滴或各50tzl，混匀，置37℃环境中15min。 10、取出，加终止液1滴，用酶标仪450nm测其OD值。若肉眼观察则不加终止液，直接判断结果。实验过后，我们要做一个结果判断： 1、阴性对照平均OD值须小于0．20。 2、弱阳性对照平均OD值须在0．20—0．65。 3、弱阳性对照与阴性对照的平均OD值之比须≥2。符合以上3个条件时，本试验结果可信，否则重复实验。 4、若待测标本孔显色比弱阳性对照孔深则判为阳性，反之为阴性。但在弱阳性对照值上下10％范围内最好再测1次，如确实高于弱阳性对照则可判为阳性。

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