大鼠单核细胞趋化蛋白2(MCP-2/CCL8)
ELISA 检测试剂盒
本试剂仅供研究使用
试验原理:
MCP-2/CCL8试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知MCP-2/CCL8浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将MCP-2/CCL8和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中MCP-2/CCL8的活性浓度呈比例关系。
试剂盒内容及其配制
试剂盒成份(2-8℃保存) | 96孔配置 | 48孔配置 | 配制 |
96/48份酶标板 | 1块板(96T) | 半块板(48T) | 即用型 |
塑料膜板盖 | 1块 | 半块 | 即用型 |
标准品:400ng/ml | 1瓶(0.6ml) | 1瓶(0.3ml) | 按说明书进行稀稀 |
空白对照 | 1瓶(1.0ml) | 1瓶(0.5ml) | 即用型 |
标准品稀释缓冲液 | 1瓶(5ml) | 1瓶(2.5ml) | 即用型 |
生物素标记的抗MCP-2/CCL8抗体 | 1瓶(6ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 |
亲和链酶素-HRP | 1瓶(10ml) | 1瓶(5.0ml) | 即用型 |
洗涤缓冲液 | 1瓶(20ml) | 1瓶(10ml) | 按说明书进行稀释 |
底物A | 1瓶(6.0ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 |
底物B | 1瓶(6.0ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 |
终止液 | 1瓶(6.0ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 |
自备材料
1. 蒸馏水。
2. 加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3. 振荡器及磁力搅拌器等。
安全性
1. 避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
2. 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3. 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
大鼠单核细胞趋化蛋白2(MCP-2/CCL8) ELISA 检测试剂盒操作注意事项
1. 试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
2. 实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
3. 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4. 使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
5. 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6. 洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7. 底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
8. 加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9. 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
大鼠单核细胞趋化蛋白2(MCP-2/CCL8) ELISA 检测试剂盒样品收集、处理及保存方法
1、 血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2、 血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、 细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、 保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
试剂的准备
1. 标准品:标准品的系列稀释应在实验时准备,不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行:
400ng/ml | (6号标准品) | 原倍浓度不用稀释直接加入50ul。 |
200ng/ml | (5号标准品) | 100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液 |
100ng/ml | (4号标准品) | 100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液 |
50ng/ml | (3号标准品) | 100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液 |
25ng/ml | (2号标准品) | 100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液 |
12.5ng/ml | (1号标准品) | 100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液 |
0ng/ml | (空白对照) | 原始浓度不用稀释直接加入50ul。 |
2. 洗涤缓冲液(50×)的稀释:蒸馏水50倍稀释。
大鼠单核细胞趋化蛋白2(MCP-2/CCL8) ELISA 检测试剂盒操作步骤
1. 使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
2. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
3. 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。
4. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
5. 每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
6. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
7. 每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。
8. 取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。
9. 在450nm波长处测定各孔的OD值。
性能
1. 灵敏度:最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
2. 特异性:不与人其它细胞因子反应。
3. 重复性:板内、板间变异系数均小于10%。
4.局限性:6号标准品以上的结果为非线性的,根据此标准曲线无法得到精确的结果。
结果 判 断 与 分 析
1、仪器值:于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值
2、以吸光度OD值为纵坐标(Y),相应的MCP-2/CCL8标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线,样品的MCP-2/CCL8含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。
3、检测值范围:0-400ng/ml
4、敏感度: 1.0ng/ml
相关产品如下:
XY-EL-RB1251c 兔抗乙酰胆碱受体抗体(Anti-AChR)ELISA试剂盒 Rabbit Anti-AChR (Anti-Acetylcholine Receptor Antibody) ELISA Kit
XY-EL-RB1252c 兔血小板型磷酸果糖激酶(PFKP)ELISA试剂盒 Rabbit PFKP (Phosphofructokinase, Platelet) ELISA Kit
XY-EL-RB1253c 兔血小板衍生生长因子AA(PDGF-AA)ELISA试剂盒 Rabbit PDGF-AA (Platelet Derived Growth Factor-AA) ELISA Kit
XY-EL-RB1254c 兔脑源性神经营养因子(BDNF) ELISA试剂盒 Rabbit BDNF(Brain Derived Neurotrophic Factor) ELISA Kit
XY-EL-RB1255c 兔核因子κB (NFκB)ELISA试剂盒 Rabbit NFκB (Nuclear Factor Kappa B) ELISA Kit
XY-EL-RB1256c 兔胶原酶I(Collagenase I)ELISA试剂盒 Rabbit Collagenase I ELISA Kit
XY-EL-RB1258c 兔XIV型胶原 (COL14)ELISA试剂盒 Rabbit COL14 (Collagen Type XIV) ELISA Kit
XY-EL-RB1259c 兔谷氨酸半胱氨酸连接酶修饰亚基(GCLM)ELISA试剂盒 Rabbit GCLM (Glutamate Cysteine Ligase, Modifier Subunit) ELISA Kit
XY-EL-RB1260c 兔精氨酸酶(Arg)ELISA试剂盒 Rabbit Arg (Arginase) ELISA Kit
XY-EL-RB1261c 兔糖原合成酶激酶3β(GSK3β)ELISA试剂盒 Rabbit GSK3β (Glycogen Synthase Kinase 3 Beta) ELISA Kit
XY-EL-RB1263c 兔CC趋化因子受体1(CCR1)ELISA试剂盒 Rabbit CCR1 (CC-Chemokine Receptor 1) ELISA Kit
XY-EL-RB1264c 兔神经肽Y(NPY)ELISA试剂盒 Rabbit NPY (Neuropeptide Y) ELISA Kit
XY-EL-RB1265c 兔过氧化物酶体增殖物激活受体γ( PPAR-γ)ELISA试剂盒 Rabbit PPAR-γ (Peroxisome Proliferator Activated Receptor Gamma) ELISA Kit
XY-EL-RB1266c 兔生长调节致癌基因β(GROβ)ELISA试剂盒 Rabbit GROβ (Growth Regulated Oncogene Beta) ELISA Kit
XY-EL-RB1267c 兔多巴胺脱羧酶(DDC)ELISA试剂盒 Rabbit DDC (Dopamine Decarboxylase) ELISA Kit
XY-EL-RB1268c 兔促胰液素/分泌素受体(SCTR)ELISA试剂盒 Rabbit SCTR (Secretin Receptor) ELISA Kit
XY-EL-RB1269c 兔内吗啡肽2(EM2)ELISA试剂盒 Rabbit EM2 (Endomorphin 2) ELISA Kit
XY-EL-RB1271c 兔低氧诱导因子1α (HIF-1α)ELISA试剂盒 Rabbit HIF-1α (Hypoxia Inducible Factor 1 Alpha) ELISA Kit
XY-EL-RB1272c 兔微球粒蛋白1(MCRS1)ELISA试剂盒 Rabbit MCRS1 (Microspherule Protein 1) ELISA Kit
XY-EL-RB1273c 兔端粒酶逆转录酶(TERT)ELISA试剂盒 Rabbit TERT (Telomerase Reverse Transcriptase) ELISA Kit
XY-EL-RB1274c 兔肺表面活性物质相关蛋白D(SPD)ELISA试剂盒 Rabbit SPD (Pulmonary Surfactant Associated Protein D) ELISA Kit
XY-EL-RB1275c 兔II D组磷脂酶A2(PLA2G2D)ELISA试剂盒 Rabbit PLA2G2D (Phospholipase A2, Group II D) ELISA Kit
XY-EL-RB1276c 兔Rac-GTP酶激活蛋白1(Rac-GAP1)ELISA试剂盒 Rabbit Rac-GAP1 (Rac-GTPase Activating Protein 1) ELISA Kit
XY-EL-RB1277c 兔抗角蛋白丝聚集素/丝集蛋白抗体(AFA)ELISA试剂盒 Rabbit AFA (Anti-Filaggrin Antibody) ELISA Kit
XY-EL-RB1278c 兔核因子相关κB结合蛋白 (NFRκB)ELISA试剂盒 Rabbit NFRκB (Nuclear Factor Related To Kappa B Binding Protein) ELISA Kit
XY-EL-RB1279c 兔垂体腺苷酸环化酶激活肽受体 (PACAPR)ELISA试剂盒 Rabbit PACAPR (Pituitary Adenylate Cyclase Activating Polypeptide Receptor 1) ELISA Kit
XY-EL-RB1280c 兔极低密度脂蛋白受体(VLDLR)ELISA试剂盒 Rabbit VLDLR (Very Low Density Lipoprotein Receptor) ELISA Kit
XY-EL-RB1283c 兔凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)ELISA试剂盒 Rabbit LOX-1 (Lectin Like Oxidized Low Density Lipoprotein Receptor 1) ELISA Kit
XY-EL-RB1284c 兔血小板激活因子ib3(PAFAHIB3)ELISA试剂盒 Rabbit PAFAHIB3 (Platelet Activating Factor Acetylhydrolase Ib3) ELISA Kit
XY-EL-RB1285c 兔睾酮受体(TR)ELISA试剂盒 Rabbit TR (Testosterone Receptor) ELISA Kit
XY-EL-RB1286c 兔肌营养不良蛋白(DMD)ELISA试剂盒 Rabbit DMD (Dystrophin) ELISA Kit
XY-EL-RB1287c 兔I型胶原交联氨基端肽(NTXI)ELISA试剂盒 Rabbit NTXI (Cross Linked N-telopeptide of Type I Collagen) ELISA Kit
XY-EL-RB1288c 兔B细胞活化因子 (BAFF/CD257/TNFSF13B)ELISA试剂盒 Rabbit BAFF/CD257/TNFSF13B (B-Cell Activating Factor) ELISA Kit
XY-EL-RB1289c 兔黑素转铁蛋白(MFI2)ELISA试剂盒 Rabbit MFI2 (Melanotransferrin) ELISA Kit
XY-EL-RB1290c 兔细胞粘附蛋白相互作用蛋白(CYTIP)ELISA试剂盒 Rabbit CYTIP (Cytohesin Interacting Protein) ELISA Kit