有关物质测定浓度的确定

沪震实业

2017/06/21 15:47

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有关物质测定浓度的确定

不能按峰面积倍数来定，例如HP1100的数值就要比一般的工作站低1000倍，要面积7、8位数得多大浓度？
　　ICH中的要求是杂质峰大于0.1%以上的峰必须能够定量，0.05%以上的峰必须能够检出，也就是说能够定量的峰为N/S>＝10，所以有关物质检测浓度为>=定量限*1000（0.1%的倒数），例如基线噪音为0.03mv时，定量限峰高应为0.3mv，则供试液峰高至少要300mv以上，否则0.1%的杂质无法定量。但也并不是说峰高越高越好。

一般的要求浓度越大越好，在仪器条件能达到的情况下尽量提高测试样品的浓度，这样有些本来比较小的杂质峰也会在图谱上体现出来。

个人认为在进行完善的方法学研究的前提下，可以要求浓度小一些，因为有的物质的分离度不是太好，如果浓度太大的话可能达不到分离要求。这种情况下可以调低有关物质检查的浓度。

这个时候千万注意最小检测限和有关物质限度的大小，不能将有关物质限度定的比检测限还小。

但有关物质测定供试液的浓度并不是越大越好，应考虑实际样品在溶剂（流动相）中的溶解度问题，也要考虑柱子的承载问题，如果样品浓度过大，造成柱子超载，那样分离度不好，有关物质测定结果不准确。
有关物质测定供试液的浓度选择，在满足上述条件后，一般峰面积应达到7位数为佳（1000000-5000000之间为好）。在这个数据之间，有关物质测定供试液的峰面积的方法学研究的有关项目数据会很好，有关杂质也会很好的检测出来。

还有就是在破坏试验中要体现出杂质峰来。

以前学习时这么说的：之前有老师说有关物质最佳浓度是在你的系统中恰好出平头峰时的浓度，此时若杂质分离度均符合要求时即可。后来觉得这样做吸收弱的药很难达到这个要求，于是根据所用工作站确定了一个峰面积（我用的TL9000，要求1亿左右，有时通过调节灵敏度来做），另外xianghui_lv 老师所说的“一般峰面积应达到7位数为佳”，也不是所有工作站适用的，以前用过HP的工作站能达到6位也很大了。

我现在的一般做法：我们看到的很多标准很多都是用1mg、0.5mg/ml来做有关物质，比这个浓度还大的一般很少见了，所以除非吸收很小的药，我定有关物质浓度都是按照这两个浓度选其一，而含量若也用HPLC则稀释10倍或5倍。

另外，无名主任没有详细说明是HPLC or TLC，若是用TLC的话，浓度可就要大的多了，一般都要几十mg以上（溶解度保证前题下）。

我觉得有关物质的浓度是因不同的品种而不同的，因为不同的品种它的响应值有很大的差别。另外，现在的检测器的灵敏度都是很高的，即使浓度小点，有关物质也可以检测出来！所以我个人认为，如果吸收达到500～1000mv，我想都基本可以了！以前的很多老标准，现在再做很多都是出头峰，现在完全没有必要那样做！但是有些品种响应值实在是太低了，吸收度要达到那么高，浓度可能要很高很高。此时考虑所用的溶剂的成问题了，也就是说用一般的溶剂就根本没办法做到让吸收度达到比较高的程度！所以，有关物质的浓度，没有一个很明确的规定！！